应用鸡胚尿囊绒膜锥虫蓝吸收法评价化学物质的眼刺激性

背景:传统多采用兔眼刺激实验(Draize实验)评价化学物质眼刺激性,即将化学物涂进兔眼睛后观察其变化,这种方法费时,费力,且给动物带来很大痛苦。各国实验室都在寻找动物替代实验的方法。目的:采用鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收实验作为兔眼刺激实验替代方法评价化学物眼刺激性的可行性。设计、时间及地点:观察实验,于2008-05/09在中国检验检疫科学研究院毒理学实验室完成。材料:无特定病原体级受精鸡卵,9日龄,购于北京梅里亚通实验动物技术有限公司。方法:将1g/L的锥虫蓝溶液滴加在受化学物质刺激损伤的鸡胚尿囊绒膜上,通过计算鸡胚尿囊绒膜受损伤后吸收锥虫蓝的量,半定量测定化学物质对鸡胚尿囊绒膜的刺激性,并将所得结果与体内兔眼刺激实验评分结果进行比对,作相关性分析。同时预测了5种常见有机溶剂的眼刺激性。主要观察指标:鸡胚尿囊绒膜受刺激损伤后吸收锥虫蓝的量。结果:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法与体内兔眼刺激实验评分结果相关性很好(R2=0.9259)。5种常见有机溶剂未稀释时,甘油无眼刺激性,丙酮、乙醇、二甲基亚砜、甲醇均有较高刺激性。当稀释为1%后,丙酮、乙醇、二甲基亚砜无眼刺激性,但甲醇刺激性仍然较高。结论:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法可以代替兔眼刺激试验对化学物质眼刺激性进行评价。

大鼠前列腺的锥虫蓝透过性实验研究

目的 :了解大鼠正常前列腺、炎症前列腺以及良性增生前列腺的锥虫蓝透过性。 方法 :取 6 0只SD雄性大鼠 ,随机分为正常组 (NP ,n =15 )、细菌性前列腺炎组 (BP ,n =15 )、良性前列腺增生组 (BPH ,n =15 )、良性增生合并细菌性前列腺炎组 (BPH BP ,n =15 ) ,各组随机抽取 5只作为不注射锥虫蓝的对照组 (NC ,n =5× 4 ) ,其余 10只分别由尾静脉注射 2ml1%锥虫蓝溶液。 2h后麻醉处死动物和分离前列腺 ,肉眼直接观察各组大鼠的前列腺被锥虫蓝染色情况 ,并用比色法检测前列腺组织的锥虫蓝浓度。 结果 :注射锥虫蓝的各组大鼠除脑组织和脊髓组织外 ,前列腺的表面及内部组织与肌肉、肝脏、肠道等组织同样被染成相似的蓝色。BP组和BPH BP组前列腺的锥虫蓝含量明显高于BPH组及NP组前列腺的锥虫蓝含量 (P <0 .0 5 )。 结论 :大鼠的正常前列腺、良性增生前列腺以及炎症前列腺都容易被具有较高分子量和离子化性质的锥虫蓝透过 ,但炎性前列腺具有更加明显增高的锥虫蓝透过性。

锥虫蓝囊膜二次染色在外伤性白内障手术中的应用

目的探讨锥虫蓝囊膜二次染色在外伤性白内障手术中应用的效果。方法对16例(16只眼)外伤性白内障采用0.01%锥虫蓝对晶状体前后囊膜染色后再行囊膜处理,常规进行白内障摘除人工晶状体植入,术后观察视力及前房内炎症情况。结果术后3天视力及前房内炎症情况与白内障常规手术后反应相似,人工晶状体前表面均未见染色剂沉着。结论将锥虫蓝应用于外伤性白内障手术,术中能清晰观察到蓝白相间的撕囊轨迹,较容易控制撕囊方向而保持了囊袋的完整性,植入人工晶状体稳定,且位于生理位置,更好地保护视功能。

锥虫蓝囊膜染色联合囊袋减张法对膨胀性白色白内障的效果

目的:探讨锥虫蓝囊膜染色联合囊袋减张法在膨胀性白色白内障的应用效果。方法:回顾性分析2013年2月至2019年2月中山火炬开发区医院收治的90例(90眼)膨胀性白色白内障患者,所有患者均采取白内障超声乳化术联合人工晶体植入手术进行治疗,根据术中撕囊方法的差异分为观察组(45眼)和对照组(45眼),观察组采用锥虫蓝囊膜染色联合囊袋减张撕囊法,对照组采用单纯锥虫蓝囊膜染色常规撕囊法,观察两组患者术后1个月视力水平、连续环形撕囊完成情况及并发症情况。结果:术后1个月,两组患者的视力水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);观察组患者的连续环形撕囊完成情况明显较优于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);并发症方面,观察组患者前囊放射状裂开明显比对照组少,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:锥虫蓝囊膜染色联合囊袋减张法在膨胀性白色白内障的应用显著提高连续环形撕囊成功率,减少了手术的并发症,提高了手术成功率。

锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力方案研究

目的摸索锥虫蓝直接染色法在人羊膜细胞活力快速鉴定中的适宜浓度及染色时间。方法取健康剖宫产产妇的胎膜6张，浸泡后分离羊膜并剪成1cmX1Cm备用。（1）取部分制备好的羊膜分别浸泡于1、2、3、4g／L4种浓度的锥虫蓝溶液中，每个浓度下各浸泡1、3、4、10min后取出，在PBS中漂洗30s，更换PBS，继续漂洗30S。在光学显微镜下选取4个视野拍照，每个视野计数1000个细胞，同时计数蓝染细胞计算细胞死亡率。（2）另取部分制备好的羊膜浸泡于0．5g/L氯己定1h后行锥虫蓝直接染色，锥虫蓝溶液浓度与染色时间为前一实验结果选定的浓度、时间，并与1g／L锥虫蓝染色10ram对比。后续操作及检测同前一试验。对数据行两因素析因设计方差分析、Duncan多范围检验及LSD检验。结果（1）1、2、3g／L锥虫蓝染色1、3min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色4、10min后细胞死亡率明显高于1、3min（P值均小于0．05）。4g／L锥虫蓝染色l、3、4min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色10min后细胞死亡率显著高于1、3min（P值均小于0．05）。锥虫蓝浓度为2、3、4g／L时，各时相点细胞死亡率都显著高于1g／L（P值均小于0．05）。（2）对经0．5g／L氯己定浸泡1h羊膜染色显示，1g／L锥虫蓝染色1min细胞死亡率[（72．6±7．4）％]显著低于预计死亡率（100．0％，P〈0．05），染色3min细胞死亡率[（95．3±5．6）％]、染色10min细胞死亡率[（99．8±5．O）％]与预计死亡率相近（P值均大于0．05）。结论锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力的适宜方案为浓度1g／L，染色时间3min。

兔眼玻璃体腔注射锥虫蓝对视网膜毒性的实验研究

染色技术的应用初步解决了玻璃体视网膜手术中靶组织透明、可视性差、切除范围不确切、手术费时等问题，从而降低视网膜损伤的风险，减少疾病复发。锥虫蓝是应用于玻璃体切割术中的新型染色剂，可使视网膜前膜（ERM）及内界膜（ILM）着染，尤其对ERM染色效果好。我们通过动物实验观察了视网膜暴露于不同浓度锥虫蓝一定时期后的组织病理学改变及对视功能的影响，为锥虫蓝染色在玻璃体视网膜手术中的临床应用提供实验依据。

一种鉴定α-淀粉酶活性及其产生菌的新方法

锥虫蓝法是利用锥虫蓝和淀粉交联生成蓝色复合物 ,淀粉经α 淀粉酶水解后蓝色褪去 ,出现透明水解圈这一原理来鉴定α 淀粉酶及其产生菌的。与碘淀粉法的不同之处在于 :本法对淀粉酶及其产生菌无任何不良影响。该交联复合物可以经加压灭菌处理 ;锥虫蓝的适宜使用浓度为 0 .0 0 5 %～ 0 .0 1% (W/V) ;培养基使用量为 15ml/皿左右 (φ80mm)。锥虫蓝法的灵敏度和使用范围与碘淀粉法相同 ,但以锥虫蓝和淀粉配制的鉴别培养基 ,在筛选淀粉酶基因时优于常规的碘淀粉法。

制作胚胎干细胞饲养层细胞条件的优化

背景:研究表明小鼠胚胎成纤维细胞的制作受多种因素的影响。目前对这些因素的研究均建立于半经验的基础上,缺乏客观定量的数据支持。目的:对小鼠胚胎成纤维细胞制作胚胎干细胞饲养层细胞条件进行优化。方法:用两种不同方法从孕13.5d昆明小鼠胚胎中分离胚胎成纤维细胞,采用锥虫蓝染色计数,比较两种分离方法在细胞活性和数量方面的差异。对分离得到的胚胎成纤维细胞用0.05%胰酶在室温下消化不同时间,分析胰酶消化时间解离贴壁细胞能力和其对细胞活性影响;采用梯度浓度国产丝裂霉素灭活饲养层细胞2h和2.5h并制作细胞生长曲线,探索丝裂霉素最佳浓度和处理时间;通过不同冻存方法比较复苏后胚胎成纤维细胞活性,筛选出适合小鼠胚胎成纤维细胞最佳冻存方法。结果与结论:胚胎成纤维细胞对胰酶极其敏感,短时间多次消化法方法显著提高细胞活性和数量;室温下4～6min胰酶消化时间有利于保存细胞活性;10mg/L2.5h和20mg/L2h丝裂霉素灭活适合制作饲养层细胞;程序性降温使细胞更能适应温度变化,显著提高解冻后细胞活性和数量。

湖南省野生乌饭越橘菌根形态特征

对湖南省野生乌饭越橘根系进行实地采样调查,并通过锥虫蓝染色压片法研究其菌根真菌侵染情况。结果表明:(1)湖南省野生乌饭均有菌根真菌侵染,侵染率为38.60%~63.80%,最大差值达25.20%,差异较大;(2)土壤pH为4~6时,菌根侵染率随着pH的增大而提高,pH为5.82时,岳阳黄家坡菌根侵染率最大,为63.80%,pH>6时,菌根侵染率随着pH的增大而降低;(3)外生菌丝在同一根段上有多个侵入点,且能跨细胞侵入,内生菌丝中呈现倒"Y"型结构,贯穿整个根段;(4)菌丝体侵染细胞形成"菌丝连接桥"结构,菌根真菌侵染引起根表皮细胞缺失现象。

大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化

目的通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究,探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型。方法清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只,体重250～300g,预先分为7组,每组6只。整体获取心肺,置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖酐（LPD）溶液中保存。保存不同的时间（0、2、4、6、12、18、24h）后,通过主肺动脉向肺内灌注20mL的500mmol/L锥虫蓝、20mL生理盐水和10mL4%的多聚甲醛后固定,蜡块包埋后按4μm层厚切片。在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况;另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色,在荧光显微镜下观察,严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数。结果随着供肺低温保存时间的延长,细胞死亡数量上逐渐增加,而且细胞的死亡类型上发生动态变化。在低温保存的条件下,4h组才开始有少量的坏死细胞出现,随着保存时间的逐渐延长,细胞坏死也逐渐增加,在供肺保存18h以上组,坏死细胞显著增加;而细胞的凋亡开始于供肺保存2h组,在供肺保存12h组达到高峰,约占所有细胞的9%,在供肺保存18h组基本消失。结论通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法,能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况。

不同类型白内障晶状体上皮细胞的组织病理学观察

背景 白内障的发生与晶状体上皮细胞（LECs）结构和功能的受损有直接关系,而白内障LECs的特征性形态学变化是目前证实细胞结构和功能受损最有力的证据,了解不同类型白内障的LECs形态变化对于研究不同环境或不同疾病对LECs的生物学行为有重要意义. 目的 观察不同类型白内障LECs的形态学变化.方法 在白内障摘出手术过程中分别收集年龄相关性白内障、糖尿病性白内障及高度近视并发性白内障的晶状体前囊膜各15片,各种类型白内障的前囊膜分别进行锥虫蓝-茜素红（TB-AR）染色和苏木精-伊红染色,评估LECs的活性和形态,并在透射电子显微镜下观察各种类型白内障LECs的超微结构改变,对不同类型白内障的LECs生物学行为进行比较.结果 TB-AR染色结果表明,年龄相关性白内障LECs大小不等,呈多边形,镶嵌样排列,少量细胞死亡,细胞膜模糊不清,细胞核呈圆形;糖尿病性白内障LECs水肿,体积增大,细胞大小不等;而高度近视并发白内障LECs体积较小,大部分细胞死亡.苏木精-伊红染色显示,年龄相关性白内障晶状体囊膜为一均质膜,LECs层呈单层排列,多数细胞结构完整,紧密贴附于前囊膜上;糖尿病性白内障前囊膜部分区域LECs与囊膜间有空隙,细胞核大小不等;高度近视并发性白内障LECs较小,形态不规则,细胞着色深.透射电子显微镜下观察发现,年龄相关性白内障前囊膜及多数LECs形态正常,细胞间以及细胞与囊膜间连接尚可;糖尿病性白内障LECs之间以及细胞与囊膜间也可见紧密连接,但显示细胞水肿,细胞间隙扩大,高度近视并发性白内障LECs可见细胞质嵌合突起,细胞质内有空泡变性.结论 年龄相关性白内障、糖尿病性白内障和高度近视并发性白内障均以LECs的变性、坏死、凋亡为共同的细胞学基础,但糖尿病性白内障和高度近视并发性白内障的LECs改变明显重于年龄相关性白内障.

树脂水门汀口腔黏结材料SuperBond C&B的体外细胞毒性

背景:口腔黏结材料长期与牙体组织、牙龈组织及口腔中唾液相接触,所以必须具备生物安全性、低细胞毒性或无细胞毒性等特点,保证对口腔黏膜无刺激,与人体组织接触不会发生毒性及过敏反应等。目的:观察口腔黏结材料Super Bond C&B超级粘接剂的体外细胞毒性。方法:取对数期人牙周膜成纤维细胞,以1.0×10~8 L^(-1)的细胞浓度接种在96孔板上,100μL/孔,常规培养24 h弃上清,分组培养:实验组加入90μL DMEM培养液+10μL Super Bond C&B超级粘接剂浸提液,阴性对照组加入100μL培养液,阳性对照组加入100μL苯酚溶液。培养72 h后,利用锥虫蓝排斥实验计算各组细胞存活率。结果与结论:实验组、阴性对照组细胞存活率均高于阳性对照组(P<0.05),实验组与阴性对照组细胞存活率比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明Super Bond C&B超级粘接剂无细胞毒性。

菌根真菌定殖检测技术研究进展

菌根真菌可与植物根系形成菌根共生体,从而影响植物生长发育。绝大多数菌根真菌促进植物生长,并能够促进植物抵御环境胁迫,因而了解菌根真菌在植物根部的定殖具有重要意义。本文对锥虫蓝染色法、免疫组化及免疫荧光技术、原位杂交这几种主要的菌根真菌定殖检测技术进行了介绍,并对各方法的特点进行了评述。

菌根真菌在越橘毛根中的定殖特点研究

为进一步研究植物-菌根真菌共生体形成的特殊根系结构,本研究以菌根真菌侵染21 d后的越橘毛根为试验材料,利用锥虫蓝染色对真菌侵染特点进行观察。结果表明:在越橘毛根细胞内存在大量的菌根真菌菌丝团,说明菌根真菌已成功在越橘根系定殖。菌根真菌侵染21 d后,其在越橘毛根中的侵染率为32%,属中度侵染。

医学论文中容易混淆的词语

箭头后为正确用字:1%饿酸→1%锇酸记数法→计数法水份→水分5-羟色氨→5-羟色胺甲氨喋呤→甲氨蝶呤丝裂酶素→丝裂霉素阿酶素→阿霉素节段性肠炎→局限性肠炎松驰→松弛阿斯匹林→阿司匹林禁忌症→禁忌证苔盼蓝→锥虫蓝