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题名重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造
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作者
普鸿丽
吕波
赵东旭
李春
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机构
北京理工大学生命学院
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期1119-1128,共10页
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基金
国家科学自然基金(Nos.20976014
21376028)
+1 种基金
国家杰出青年科学基金(No.21425624)
高等学校博士学科点专项科研基金(No.20121101110050)资助~~
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文摘
为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对键选择进行筛选,得到优势突变酶R329K、T369V。结果显示:与PGUS-E酶相比,突变酶R329K、T369V键选择性分别提高26.9%、34.3%。突变酶的酶学性质研究表明,突变酶的最适p H和温度与PGUS-E一致,但其酶催化效率下降。由此可见,R329、T369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响。综上结果,本文应用饱和突变方法改善了PGUS-E的键选择性,为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据。
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关键词
Β-葡萄糖醛酸苷酶
单葡萄糖醛酸基甘草次酸
键专一性
定点饱和突变
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Keywords
β-glucuronidase
glycyrrhetinic acid monoglucuronide
bond selectivity
site-saturation mutagenesis
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分类号
Q55
[生物学—生物化学]
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