内源性活性氧水平及锰型超氧化物歧化酶的表达与胃癌细胞分化、增殖相关

检测了不同分化的胃癌细胞株内MnSOD基因的表达及胞内活性氧(ROS)的水平。同时通过基因转染观察上调或下调MnSOD基因表达对SGC7901胃癌细胞胞内ROS水平及增殖能力的影响。用电穿孔法将人反义和正义MnSOD cDNA 真核表达载体pHβA-SOD (-)/pHβA-SOD (+)转入7901细胞,用含G418的RPMI1640培养基筛选稳定表达克隆。然后用RT-PCR鉴定MnDSOD基因的表达。同时用RT-PCR方法检测正常胃粘膜组织及MKN-28、SGC7901、BGC823、HGC-27四株高、中、低、未分化胃癌细胞株内的MnSOD的mRNA表达。利用DCFH-DA荧光染色方法检测不同分化胃癌细胞株及7901转染细胞株内的ROS水平。四唑蓝比色法(MTT)绘制MKN-28、SGC7901、BGC823、HGC-27四株不同分化胃癌细胞及正义、反义、空载MnSOD转染7901细胞的生长曲线。发现不同分化胃癌细胞内的MnSOD普遍呈低表达且与分化程度平行,不同分化胃癌细胞株胞内ROS水平随着MnSOD表达的下调逐步上升,细胞增殖加快。较之MnSOD空载7901,正义、反义MnSOD转染的7901细胞中该基因的表达出现明显上调及下调,胞内ROS水平较对照细胞也相应有显著降低和升高。正义株增殖受抑,反义株增殖加快。表明胃癌细胞内MnSOD的表达与肿瘤的分化程度呈负相关。可通过改变胞内ROS水平改变MnSOD基因的表达,从而调节胃癌?

MnSOD乙酰化对肾透明细胞癌786-O细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨沉默信息调节因子2-相关酶3(SIRT 3)对肾透明细胞癌细胞系786-O中锰型超氧化物歧化酶(MnSOD)的去乙酰化作用及其对786-O细胞增殖、凋亡的影响。方法Western blotting和免疫共沉淀(IP)测定786-O中MnSOD乙酰化的水平;MnSOD酶活性试剂盒、四甲基偶氮唑盐(MTT)和Hoechst荧光染色分别检测肾癌细胞中MnSOD酶活性、细胞增殖和凋亡。结果与空白载体(pcDNA3.0)相比,SIRT 3(转染pcDNA3.0-sirt3)使MnSOD乙酰化水平由1.29±0.16降低为0.74±0.07(t=7.21,P<0.001),其酶活性由(1.47±0.17)U/mg增加至(2.53±0.31)U/mg(t=6.70,P<0.001)、细胞增殖率由(25.28±5.75)%增加至(48.86±7.47)%(t=5.60,P<0.001),而细胞凋亡率由(4.53±0.51)%变为(4.45±0.59)%,差异无统计学意义(t=0.24,P=0.82)。结论肾透明细胞癌786-O中MnSOD的去乙酰化增强其细胞增殖能力,MnSOD或其乙酰化可能是肾透明细胞癌治疗的一个潜在靶点。