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条斑紫菜锰超氧化物歧化酶基因克隆与序列分析 被引量:14
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作者 王荣 刘涛 +2 位作者 周晓君 庄筠昀 茅云翔 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期522-528,共7页
为研究紫菜抗逆抗病的分子机制,以本实验室建立的条斑紫菜表达序列标签(EST)和全长cDNA富集文库,结合PCR技术,克隆了条斑紫菜编码锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的cDNA及基因组DNA全长序列,并进行了序列特性相关分析.研究结果表明:该基... 为研究紫菜抗逆抗病的分子机制,以本实验室建立的条斑紫菜表达序列标签(EST)和全长cDNA富集文库,结合PCR技术,克隆了条斑紫菜编码锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的cDNA及基因组DNA全长序列,并进行了序列特性相关分析.研究结果表明:该基因cDNA序列全长为958个核苷酸,包含一个完整Mn-SOD基因的ORF,编码224个氨基酸和终止密码子;该基因在基因组中序列长度为1416bp,包含4个外显子和3个内含子,这既不同于高等植物的6个外显子和5个内含子,也不同于人的5个外显子和4个内含子;该基因编码区密码子的平均GC含量为60.9%,第三位密码子的GC含量高达84.9%;序列中包含4个与Mn^2+的结合位点及一个保守的金属结合结构域,预测分子量为24469.09Da,等电点为5.99;条斑紫菜Mn-SOD与人的相关蛋白具有类似的空间结构,都有6个跨膜α螺旋结构域;由cDNA序列推导的氨基酸序列与莱茵衣藻相似性为57.7%,系统发生分析表明条斑紫菜Mn-SOD与绿藻莱茵衣藻和硅藻海链藻的亲缘关系较近.这是该基因在红藻门中的首次报道. 展开更多
关键词 条斑紫菜 氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因 序列分析
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人锰超氧化物歧化酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:6
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作者 凌敏 谢科 苏上贵 《广西医科大学学报》 CAS 2004年第4期476-477,共2页
目的 :研究人锰超氧化物歧化酶 (h Mn- SOD)基因在不同大肠杆菌中的表达水平。方法 :以人肝细胞株 (L 0 2 )总 RNA为模板 ,用 RT- PCR扩增出 h Mn- SOD c DNA,构建重组质粒 p SE380 - Mn SOD并分别转化至 3种大肠杆菌 DH 5α、TOP10和BL... 目的 :研究人锰超氧化物歧化酶 (h Mn- SOD)基因在不同大肠杆菌中的表达水平。方法 :以人肝细胞株 (L 0 2 )总 RNA为模板 ,用 RT- PCR扩增出 h Mn- SOD c DNA,构建重组质粒 p SE380 - Mn SOD并分别转化至 3种大肠杆菌 DH 5α、TOP10和BL 2 1。采用 SDS- PAGE和改良的连苯三酚法分别检测 SOD酶蛋白及其活性。结果 :h Mn- SOD基因在 3种大肠杆菌中都可以表达 ,表达量分别为菌体总蛋白质的 11.9%、15 .8%和 30 .2 %。表达产物具有 SOD酶活性 ,酶比活性分别为 90 .15 U/ m g、114 .0 6 U/ mg和 2 16 .13U/ mg。结论 :h Mn- SOD基因在不同大肠杆菌中的表达水平明显不同 ,在 BL2 展开更多
关键词 氧化物歧化酶基因 大肠杆菌 表达 克隆
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锰超氧化物歧化酶基因C1183T、抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性与吸烟的交互作用和食管鳞状细胞癌的关系 被引量:1
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作者 张超贤 郭李柯 +1 位作者 秦咏梅 秦蕾 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期828-834,共7页
目的 探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因C1183T、抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性与吸烟的交互作用,以及与食管鳞状细胞癌(ESCC)的关系。方法 采用病例-对照研究的方法,选择经病理学检查确诊为原发性ESCC的患者720例(ESCC组... 目的 探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因C1183T、抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性与吸烟的交互作用,以及与食管鳞状细胞癌(ESCC)的关系。方法 采用病例-对照研究的方法,选择经病理学检查确诊为原发性ESCC的患者720例(ESCC组),对照组为进行健康体格检查者720名,并根据吸烟状况将研究对象分为不吸烟者和吸烟者(每天至少吸1支烟,持续半年以上)。以研究对象的外周血白细胞为样本,利用PCR分析MnSOD基因C1183T和抵抗素基因启动子-420C/G单核苷酸多态性。结果 ESCC组的吸烟者构成比显著高于对照组(OR=3.326 4,95%CI为1.907 5~5.740 6,P〈0.01)。ESCC组与对照组间C1183T的CC+CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率,以及-420C/G的CC+CG、GG基因型频率和C、G等位基因频率的差异均有统计学意义(P值均〈0.01)。ESCC组C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型频率分布分别为50.1%和49.9%,对照组分别为24.2%和23.9%。携带C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型者罹患ESCC的风险显著增加(OR=3.155 3和3.168 3,95%CI分别为1.806 2~5.145 1和1.925 4-5.206 2)。基因突变的协同分析发现,ESCC组C1183T的TT纯合子基因型联合-420C/G的GG纯合子基因型者占39.7%,显著高于对照组的12.8%(P〈0.01),携带两种纯合子基因型者罹患ESCC的风险显著增加(OR=5.065 1,95%CI为3.187 9~7.848 1)。吸烟与C1183T的TT纯合子基因型和-420C/G的GG纯合子基因型在ESCC的发生中均有交互作用(γ=3.926 6、3.938 3)。结论MnSOD基因C1183T的TT纯合子基因型、抵抗素基因启动子-420C/G的GG纯合子基因型和吸烟是ESCC的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了ESCC的发病风险。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 氧化物歧化酶基因C1183T 抵抗素基因启动子-420C/G 多态现象 吸烟
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锰超氧化物歧化酶基因V(16)A多态性的种族差异及与糖尿病肾病的关系 被引量:3
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作者 杨莹 宋滇平 +3 位作者 刘华 王玉明 张敏 段勇 《昆明医学院学报》 2005年第2期10-14,共5页
目的:探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因V(16)A多态性的种族差异及与糖尿病肾病(DN)的关系.方法:在中国昆明地区汉族人中对187例2型糖尿病患者(其中正常白蛋白尿即DN0组50例,微量白蛋白尿DN1组64例,大量白蛋白尿即DN2组73例)和97例健康... 目的:探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因V(16)A多态性的种族差异及与糖尿病肾病(DN)的关系.方法:在中国昆明地区汉族人中对187例2型糖尿病患者(其中正常白蛋白尿即DN0组50例,微量白蛋白尿DN1组64例,大量白蛋白尿即DN2组73例)和97例健康对照者的MnSOD基因V(16)A多态性进行检测,并比较不同种族中该位点基因型和等位基因分布及频率.结果:(1)中国昆明地区汉族人中存在MnSOD基因V(16)A多态性;(2)与日本人群、俄罗斯人群相比其基因型和等位基因频都存在显著性差异,中国和日本人群以VV型为主,俄罗斯人群以AA和AV型为主;(3)DN组(DN1+DN2)VV基因型和V等位基因频率显著高于不伴肾病的DN0组(分别为χ2=6·42和5·08,P<0·05),Logistic回归分析表明VV基因型相对于VA+AA基因型是DN发生的遗传危险因素.结论:MnSODV(16)A多态性分布存在种族异质性,在中国昆明汉族人2型糖尿病患者中MnSOD基因V(16)A多态性与DN发生相关.不同种族人群MnSODV(16)A多态性分布的差异,可能是亚裔人群比白种人群2型糖尿病患者DN发病率高的原因之一. 展开更多
关键词 氧化物歧化酶基因 种族差异 糖尿病肾病 Logistic回归分析 2型糖尿病患者 MnSOD基因 多态性分布 肾病(DN) 微量白蛋白尿 等位基因分布 等位基因频率 遗传危险因素 昆明地区 日本人群 显著性差异 AA基因 种族人群
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中国人2型糖尿病肾病患者锰超氧化物歧化酶基因的PCR-DGGE分析
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作者 刘伟军 王玉明 +1 位作者 刘华 宋滇平 《昆明医学院学报》 2010年第11期80-83,共4页
目的探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因在中国人糖尿病肾病(DN)遗传背景中的地位.方法运用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术在200例无亲缘关系之中国云南昆明地区汉族人2型糖尿病肾病患者90例;2型糖尿病患者70例;健康对照者4... 目的探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因在中国人糖尿病肾病(DN)遗传背景中的地位.方法运用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术在200例无亲缘关系之中国云南昆明地区汉族人2型糖尿病肾病患者90例;2型糖尿病患者70例;健康对照者40例中对MnSOD基因编码区进行分子扫查.结果在对研究对象MnSOD基因编码区的第1、2、3、4、5个外显子的PCR-DGGE扫查中未发现异常泳动片段.结论 MnSOD基因可能不是中国汉族人DN的主要致病基因. 展开更多
关键词 2型糖尿病肾病 氧化物歧化酶基因 编码区 聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳
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萘胁迫下秋茄MnSOD基因和C4H基因的实时定量表达分析 被引量:3
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作者 宋晖 王友绍 《生态科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期104-108,共5页
研究首次探讨了萘胁迫下红树植物秋茄不同组织C4H基因和MnSOD基因的表达特征。研究结果表明,两个基因在叶茎根中的表达量有明显的差异,C4H基因在叶茎中的表达量明显大于根,MnSOD基因的表达量为叶最大,茎次之,根最小。在5个不同浓度的萘... 研究首次探讨了萘胁迫下红树植物秋茄不同组织C4H基因和MnSOD基因的表达特征。研究结果表明,两个基因在叶茎根中的表达量有明显的差异,C4H基因在叶茎中的表达量明显大于根,MnSOD基因的表达量为叶最大,茎次之,根最小。在5个不同浓度的萘胁迫下,C4H基因和MnSOD基因的表达普遍被诱导,转录水平都随着处理浓度的升高而增强,而且在叶组织中的表达量和萘处理浓度表现出明显的相关关系,相关系数分别达到0.846和0.902(p<0.05),而在根和茎中并不具有显著的相关关系。在萘胁迫下秋茄叶子是最敏感的部位,而C4H基因和MnSOD基因在叶子中的表达量则为指示萘胁迫强度的良好生物学指标。 展开更多
关键词 秋茄 实时定量PCR 肉桂酸-4羟化酶基因 锰氧化物歧化酶基因
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植物内生蜡样芽孢杆菌M22 Mn-SOD基因的克隆及在大肠杆菌中表达 被引量:4
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作者 尚玉磊 陈惠芳 +4 位作者 王黎明 王勇军 王琦 张炳欣 梅汝鸿 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期487-494,共8页
通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218个和208个氨基酸残基的功能蛋白。2个蛋白氨基酸序列同源性为46... 通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218个和208个氨基酸残基的功能蛋白。2个蛋白氨基酸序列同源性为46%,均不含信号肽。与其它锰超氧化物歧化酶序列同源性高,保守氨基酸残基类型及位置与其它Mn-SOD相同,可确定2个基因均为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD基因。分别将2个基因的开放阅读框插入载体pET-22b(+)构建表达质粒pET-sodA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量分别为28 kD和27 kD。转入pET-sodA的SOD缺陷型大肠杆菌QC779转化子恢复在10μmol/L paraquat的LB平板上生长的能力。活性电泳显示,M22的Mn-SOD在QC779中成功表达。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 氧化物歧化酶基因 克隆 测序 原核表达
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氨肽酶N启动子调控的MnSOD基因对骨髓细胞的特异性辐射防护作用
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作者 梁利波 马业伟 +6 位作者 赵清正1 周小山 杨军 李艳春 刘玉英 王争 章扬培 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期939-943,共5页
背景与目的:骨髓造血细胞中导入耐辐射基因是克服放疗对造血系统抑制作用的有效手段,但这也增加了肿瘤细胞的辐射耐受性。本实验旨在探索不明显增加肿瘤细胞对辐射抗拒性的同时,能特异性保护骨髓细胞免受辐射导致的损伤的方法。方法:构... 背景与目的:骨髓造血细胞中导入耐辐射基因是克服放疗对造血系统抑制作用的有效手段,但这也增加了肿瘤细胞的辐射耐受性。本实验旨在探索不明显增加肿瘤细胞对辐射抗拒性的同时,能特异性保护骨髓细胞免受辐射导致的损伤的方法。方法:构建以氨肽酶N(aminopeptidaseN,APN)基因骨髓特异性启动子调控的锰超氧化物歧化酶(manganesesuperoxidedismutase,MnSOD)基因逆转录病毒载体,并导入成骨髓细胞KG1a和肝癌细胞BEL7402中。用RT-PCR分析MnSODmRNA水平,测定细胞中MnSOD活性,以细胞存活实验检测骨髓细胞和肝癌细胞对X射线的敏感性,并用流式细胞术和断裂DNA电泳方法对辐射诱导的细胞凋亡进行分析。结果:导入基因的KG1a细胞中MnSODmRNA水平和酶活性明显升高。APN骨髓特异性启动子调控的MnSOD基因表达能有效抑制辐射引起的KG1a细胞凋亡。导入基因的KG1a细胞对辐射的耐受性提高,在用10Gy剂量照射时,KG1a细胞存活率比原来增加3.7倍。而导入MnSOD基因并未使BEL7402细胞中MnSODmRNA水平和酶活性提高,其放射敏感性未发生明显变化。结论:APN骨髓特异性启动子能控制MnSOD基因在骨髓细胞中高表达,而在癌细胞中低表达。在用X射线杀伤癌细胞的过程中,APN骨髓特异性启动子调控的MnSOD基因能特异性保护骨髓细胞。 展开更多
关键词 氨肽酶N 骨髓特异性启动子 氧化物歧化酶基因 逆转录病毒载体 骨髓细胞 肝癌细胞
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黑木耳Mn-SOD基因的分子克隆与表达分析 被引量:1
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作者 孙婷婷 马伊莎 +2 位作者 刘瑞鹏 孙健 邹莉 《北方园艺》 CAS 北大核心 2022年第4期110-117,共8页
以黑木耳DL202为试材,采用RT-PCR技术克隆了Mn-SOD基因全长,并对其进行生物信息学分析和表达分析,以期为进一步研究Mn-SOD基因在黑木耳抗逆过程中的功能奠定基础。结果表明:Mn-SOD基因cDNA全长为609 bp,编码202个氨基酸,命名为Ah-MnSOD... 以黑木耳DL202为试材,采用RT-PCR技术克隆了Mn-SOD基因全长,并对其进行生物信息学分析和表达分析,以期为进一步研究Mn-SOD基因在黑木耳抗逆过程中的功能奠定基础。结果表明:Mn-SOD基因cDNA全长为609 bp,编码202个氨基酸,命名为Ah-MnSOD;蛋白具有锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)家族的保守结构域,不具有跨膜结构和信号肽;亚细胞定位主要位于过氧化物酶体中;系统进化分析表明Ah-MnSOD与Auricularia subglabra亲缘关系最近。此外,构建了Ah-MnSOD基因的原核表达载体并成功诱导出目的蛋白。荧光定量PCR结果显示Ah-MnSOD基因在不同发育阶段均有表达,且在原基中表达最高。 展开更多
关键词 黑木耳 氧化物歧化酶基因 克隆 原核表达 荧光定量PCR
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猕猴桃AdMSD1和AdMSD2的克隆及其在果实后熟软化中的表达
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作者 冯新 赖瑞联 +2 位作者 高敏霞 吴如健 陈义挺 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期895-906,共12页
锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在植物生长发育与衰老及应对逆境胁迫中发挥重要作用。为探究MnSOD基因在猕猴桃果实后熟软化及采后贮藏过程的作用,本研究以米良1号猕猴桃为试材,克隆了2个MnSOD基因,分别命名为AdMSD1和AdMSD2。AdMSD1包含675 b... 锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在植物生长发育与衰老及应对逆境胁迫中发挥重要作用。为探究MnSOD基因在猕猴桃果实后熟软化及采后贮藏过程的作用,本研究以米良1号猕猴桃为试材,克隆了2个MnSOD基因,分别命名为AdMSD1和AdMSD2。AdMSD1包含675 bp的开放阅读框(ORF),编码224个氨基酸,登录号为KY471358;AdMSD2包含690 bp的ORF,编码229个氨基酸,登录号为KY471359。生物信息学分析结果表明,AdMSD1和AdMSD2均编码稳定的碱性亲水蛋白,包含保守金属结合域DVWEHAYY、Mn^(2+)金属结合位点和特征氨基酸。AdMSD1和AdMSD2均由6个外显子和5个内含子组成。进化树结果显示,2个蛋白聚在双子叶植物组的不同分支,属于MnSOD家族的不同成员。定量分析结果表明,AdMSD1在叶片的转录水平最高,在花中的转录水平最低;AdMSD2在花中的转录水平最高,在成熟果中的转录水平最低。2个基因在果实后熟软化过程的转录呈动态变化,但均在软化初期上调,软化Ⅰ期和Ⅱ期下调,进入软化Ⅲ期后再次回升。果实中AdMSD1和AdMSD2的转录水平均在低温贮藏过程中下降。AdMSD1在脱落酸处理的第1和第5天表达上调,而AdMSD2在脱落酸处理后表达下调;AdMSD1在赤霉素处理后表达下调,而AdMSD2在赤霉素处理的第1天表达上调,之后下调。研究结果表明,AdMSDs基因参与猕猴桃果实的后熟软化和采后贮藏过程,为进一步研究SOD在猕猴桃果实采后品质调控中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猕猴桃 氧化物歧化酶基因 贮藏温度 激素处理 表达模式
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Effect of Nitric Oxide on Esophageal Cancer Cell Line TE-1
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作者 Guo-gui Sun Wan-ning Hu +2 位作者 Jun Zhang Cheng-lin Li Cong-rong Yang 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2013年第1期44-49,共6页
Objective To investigate the radiosensitizing effect of nitric oxide(NO) combined with radiation on esophageal cancer cell line TE-1.Methods Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to assess the effects of NO... Objective To investigate the radiosensitizing effect of nitric oxide(NO) combined with radiation on esophageal cancer cell line TE-1.Methods Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to assess the effects of NO and radiation on TE-1 cells regarding inhibition of cell proliferation.Flow cytometry was used to examine the effect of NO and radiation on cell apoptosis and cycle.Reverse transcription polymerase chine reaction and Western blot were used to evaluete the effect of NO on mRNA and protein expression of manganese superoxide dismutase(MnSOD).Results NO inhibited the proliferation of TE-1 cells while significantly enhancing their radiosensitivity.The application of NO combined with radiation significantly increased the apoptosis rate and G2/M phase proportion of TE-1 cells,with substantial decreases in the MnSOD mRNA and protein expression levels.Conclusions NO reduces the MnSOD mRNA and protein expression levels by affecting TE-1 cell cycle,further inhibiting the apoptosis of esophageal cancer cells and enhancing the killing effect of radiation on esophageal cancer cells. 展开更多
关键词 nitric oxide manganese superoxide dismutase esophagealcancer cells radio-sensitization enhancement
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医学遗传学
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《国外科技资料目录(医药卫生)》 2000年第6期53-56,共4页
0020517 从微切的细胞建造定向克隆cDNA 库的改进方法/Peterson L A∥CancerRes.-1998,58(23).-5326~5328 医科情0020518 评价珍珠鸡中遗传关系的任意扩增多态 DNA(RAPD)/Sharma D∥GenetAnal:Biomol Eng.-1998,14(4).-125~128 一军大... 0020517 从微切的细胞建造定向克隆cDNA 库的改进方法/Peterson L A∥CancerRes.-1998,58(23).-5326~5328 医科情0020518 评价珍珠鸡中遗传关系的任意扩增多态 DNA(RAPD)/Sharma D∥GenetAnal:Biomol Eng.-1998,14(4).-125~128 一军大0020519 一种粘连试验系统是以施奈德细胞为基础来确定突变 PO 蛋白表现型相关基因型/Bülent Ekici A∥Genet Anal:Biomol Eng.-1998,14(4).-117~119一军大0020520 展开更多
关键词 医科 转录因子 启动子 定向克隆 染色体定位 改进方法 遗传关系 氧化物歧化酶基因 试验系统 指纹印迹
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