锰超氧化物岐化酶在大肠癌中的表达及临床病理相关性分析

目的探讨锰超氧化物岐化酶(MnSOD)在大肠癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测25例大肠癌、大肠腺瘤、癌旁组织中MnSOD表达及细胞定位,比较大肠癌、癌旁组织、大肠腺瘤中MnSOD的阳性率;RT-PCR方法检测20例大肠癌及癌旁组织,10例大肠腺瘤中MnSOD的水平,比较大肠癌、癌旁组织和大肠腺瘤中MnSOD mRNA相对表达量,分析大肠癌组织中MnSOD表达水平与各临床参数之间的关系。结果大肠癌癌组织、大肠腺瘤组织及癌旁正常大肠组织中MnSOD表达率分别为76%、44%及16%,大肠癌中MnSOD表达率显著高于癌旁正常大肠组织和大肠腺瘤组织(P均<0.05)。MnSOD在大肠癌中的表达和组织分化程度有关(P<0.05),与其他临床病理因素无关(P>0.05)。结论 MnSOD可能在大肠癌发生、发展中发挥作用,有望成为大肠癌潜在的生物标志物。

十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因的克隆与表达

目的克隆十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶(AdMn-SOD)基因,并在大肠埃希菌中表达。方法用3′RACE及RT-PCR技术扩增获得AdMn-SOD全长cDNA编码序列;设计引物,克隆AdMn-SOD成熟肽编码序列,连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况,诱导表达的重组蛋白用Ni亲和层析进行纯化。结果成功克隆获得AdMn-SOD全长cDNA序列,推导编码的氨基酸序列具有Mn-SOD的保守结构特征;构建了pET32a/AdMn-SOD原核表达重组质粒,AdMn-SOD在大肠埃希菌中得到高效表达,表达的融合蛋白的分子质量单位约为40ku。结论成功克隆并表达了十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因,为进一步了解十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶的特性与功能奠定了基础。

锰型超氧化物岐化酶基因转染抑制SGC7901胃癌细胞增殖的机制

目的:我们已经报道锰型超氧化物岐化酶(MnSOD)高表达可明显抑制SGC7901胃癌细胞的增殖,本研究拟进一步探索其中所涉及的分子机制.方法:利用DCFH-DA荧光染色方法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的活性氧水平透射电镜下观察肿瘤细胞形态及细胞器结构改变.RT—PCR方法检测三者缺氧诱导因子HIF-1α的表达.结果:正义MnSOD-7901胃癌细胞胞内ROS下降,HIF-1α表达下调.反义组电镜下细胞形态明显小于正义组,正义组线粒体明显较反义组丰富,但两组线粒体均呈空泡状,缺少线粒体嵴.反义组核糖体明显较正义组丰富,内质网也略多.结论:MnSOD依赖的抑制胃癌细胞增殖途径与下调肿瘤的胞内ROS水平,下调HIF-1α的表达及改变细胞器的超微结构有关.

老年慢性心力衰竭病人锰超氧化物歧化酶Ala-9Val基因多态性与预后的相关性研究

目的探讨陕西地区汉族人群中,锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)Ala-9Val基因多态性与老年慢性心力衰竭(CHF)病人预后的关系。方法选择2015年1月至2017年6月于我科住院治疗的老年CHF病人280例纳入CHF组,另随机选择同期在我院体检的健康志愿者100例为对照组。采用PCR-限制性片段长度多态性法检测Mn-SOD Ala-9Val基因多态性,比较2组Mn-SOD Ala-9Val基因多态性差异。将CHF组病人分为Val/Val亚组和(Ala/Ala+Ala/Val)亚组,统计比较2个亚组随访3年内心源性死亡发生率,再根据随访3年内是否发生心源性死亡进一步分为死亡亚组与存活亚组,统计分析CHF病人3年内心源性死亡的危险因素。结果2组Mn-SOD基因Ala-9Val位点基因型和等位基因分布频率差异均无统计学意义(P均>0.05)。Val/Val亚组和Ala/Val+Ala/Ala亚组3年死亡率分别为31.86%和15.69%,差异具有统计学意义(P=0.003)。多因素Logistic回归分析结果显示,携带Val/Val基因型是老年CHF病人3年内心源性死亡的独立危险因素(OR=1.759,95%CI1.151~2.687,P=0.003)。结论陕西地区汉族人群中,Mn-SOD Ala-9Val基因多态性与老年CHF病人预后相关。

MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562/ADM细胞凋亡

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm),细胞色素C(Cytc)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体Δψm释放降低35%～52%;Cytc含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODmke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡.

西伯利亚蓼PsMnSOD基因的耐盐碱性鉴定及其在盐碱胁迫下的表达模式

植物的超氧化物歧化酶的活性与其在盐胁迫下的防御能力密切相关。本文分析了西伯利亚蓼PsMn-SOD基因在酵母中的表达对酵母耐盐碱性的影响以及西伯利亚蓼中PsMnSOD基因在盐碱胁迫下的表达模式。研究结果表明,PsMnSOD基因在酵母中的表达提高了酵母在盐碱胁迫下的SOD酶活性,并提高了酵母对盐碱胁迫的抗性。RT-PCR结果显示,3%NaHCO3胁迫条件下PsMnSOD基因在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,西伯利亚蓼PsMnSOD基因在茎和地下茎中的表达水平高于在叶中的表达水平,叶中PsMnSOD基因的表达水平随着NaHCO3浓度的增加而上升。本试验表明西伯利亚蓼PsMnSOD基因在抵御盐碱胁迫中起到非常重要的作用。

西伯利亚蓼中PsMnSOD基因的克隆及其抗逆性检测

采用RACE技术从西伯利亚蓼中克隆了锰超氧化物歧化酶基因PsMnSOD的cDNA(GenBank登录号FJ848572)。长为792bp的PsMnSODcDNA序列含有编码234个氨基酸的705bp的开放读码框、57bp的5'非翻译区和30bp的3'非翻译区。构建了PsMnSOD基因的酵母表达载体pYES2-PsMnSOD并将其转化到野生型酵母菌株中。分析PsMnSOD基因在酵母中的表达对酵母SOD酶活性的影响及其对盐胁迫、PEG胁迫、高温和低温胁迫下抗逆性影响的结果表明,PsMnSOD基因在酵母中表达后酵母SOD酶活性提高,酵母对盐渍、PEG、高温和低温等非生物胁迫的抗逆性也增强。