金黄色葡萄球菌锰转运蛋白C的原核表达及小鼠免疫评价

目的在原核系统中表达金黄色葡萄球菌(金葡菌)锰转运蛋白C(manganese transporter C,MntC),对其免疫原性进行分析,为筛选金葡菌疫苗候选抗原提供参考.方法合成MntC基因,克隆至pET-22b(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b-mntc,转化至E.coli BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,镍柱纯化.将纯化产物进行免疫印迹法鉴定,再采用分子排阻高效液相色谱法进行纯度分析.将铝佐剂吸附重组MntC免疫BALB/c小鼠作为实验组,将铝佐剂免疫BALB/c小鼠作为对照组.经ELISA检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平、中性粒细胞呼吸爆发试验检测小鼠血清特异性抗体功能,再用细胞因子试剂盒检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液中抗原特异性细胞因子水平.免疫后小鼠用致死剂量金葡菌49521菌株攻毒,观察小鼠存活情况.结果经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒pET-22b-mntc构建正确.重组MntC相对分子质量约为34000,以可溶性形式表达,可与抗His单克隆抗体特异性结合,纯度大于95%.将铝佐剂吸附MntC免疫小鼠可诱导产生高滴度特异性IgG抗体;经MntC免疫的小鼠血清能明显增强中性粒细胞对49521菌株的呼吸爆发,实验组在60 min内发光值均值比对照组提高78%;实验组脾淋巴细胞培养上清液中抗原诱导的IFN-γ、IL-5和IL-17A浓度分别为对照组的5.8、9.9和62.8倍,均高于对照组且差异有统计学意义(t值分别为3.75、3.95和3.93,P值分别为0.004、0.003和0.003);MntC免疫小鼠后以致死剂量49521菌株攻毒,小鼠生存率从1/6提升至2/3.结论正确表达的重组MntC具有较好的免疫原性,可作为金葡菌疫苗的候选抗原组分.