利用酵母双杂交筛选豌豆叶绿体镁离子螯合酶D亚基相互作用蛋白

植物叶绿体镁离子螯合酶是四吡咯化合物生物合成途径中合成叶绿素分支(镁分支)的第一个酶,它催化镁离子螯合到原卟啉IX中,形成镁原卟啉IX.镁离子螯合酶是1个由3个亚基H、D和I组成的多亚基酶,3个亚基均由细胞核编码,进入叶绿体发挥功能.该酶不仅控制着叶绿素的合成,其各个亚基还具有很多其它的功能:H亚基既是ABA受体,又参与叶绿体到细胞核的反向信号传导;D亚基也与叶绿体到细胞核的反向信号传导有关.本文利用酵母双杂交技术,将编码豌豆镁离子螯合酶D亚基的cDNA片段构建到诱饵载体pGBKT7中,分别用共转化的方法筛选豌豆叶片细胞核编码的均一化cDNA文库和用Mating的方法筛选豌豆叶片叶绿体编码的均一化cDNA文库,共得到121个候选克隆,其中有60个克隆共编码21个叶绿体蛋白质,19个来自于核基因编码,2个来自于叶绿体基因编码.这些候选蛋白参与叶绿素合成、卡尔文循环、叶绿体蛋白质翻译和叶绿体基因转录等多个代谢过程.酵母点对点和GST-pull down对其中的4个蛋白做了进一步的验证.这些结果将为D亚基的功能研究提供进一步的线索.

CHLH的ABA受体之争

镁螯合酶H亚基是叶绿素合成关键酶之一,自2006年在拟南芥上证明CHLH为ABA受体以来,有关CHLH与ABA信号传递的关系在大麦、甜樱桃、草莓、桃等方面已有报道,但不同研究结果对CHLH是否为ABA受体仍然存有争议。全面评述CHLH与ABA信号传递的关系研究进展概况,重点介绍CHLH是否为ABA受体以及CHLH对ABA信号感知和向下游转导的研究进展。

二倍体草莓匍匐茎遗传转化体系的建立

【目的】为了建立一种可行的草莓稳定遗传转化体系。【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca,‘Hawaii-4’)匍匐茎的茎段为外植体,利用农杆菌介导法进行侵染,并对农杆菌侵染液的浓度、真空渗透时间、暗培养时间和抗生素浓度对草莓茎段转化体系进行了探讨。【结果】以镁离子螯合酶H亚基为操纵基因研究表明,农杆菌侵染液浓度OD600=1,真空渗透时间20 min,暗培养3 d,卡那霉素筛选浓度为35 mg/L为二倍体草莓匍匐茎茎段的最佳遗传转化条件,转化效率达到8%以上。【结论】利用草莓匍匐茎为外植体建立了一种稳定有效的遗传转化转基因体系,为今后草莓的基因改良提供技术支撑。