刺葡萄VdERD6L15基因克隆及功能分析

【目的】探究VdERD6L15在刺葡萄果实生长发育中的功能,从湘刺1号中克隆VdERD6L15基因及其启动子,进行基因功能研究和启动子活性分析。【方法】克隆VdERD6L15基因CDS序列,并对CDS进行生物信息学分析;构建VdERD6L15表达载体,并通过瞬时转化烟草确定VdERD6L15基因编码蛋白的亚细胞定位;同时,通过在己糖缺陷型酵母菌株EBY.VW4000中异源表达VdERD6L15探究其功能;此外,通过启动子截短试验确定VdERD6L15启动子的核心区域。【结果】成功克隆刺葡萄VdERD6L15基因编码序列,该编码序列长1461 bp,可编码486个氨基酸,具有膜蛋白特征,属于单糖转运蛋白家族。亚细胞定位试验确认VdERD6L15蛋白主要定位于液泡膜上。通过在酵母菌株EBY.VW4000中进行异源表达,验证了VdERD6L15具有转运葡萄糖的能力。利用PlantCARE数据库对VdERD6L15启动子顺式作用元件进行分析,发现其主要包含光响应元件、干旱胁迫和激素响应元件。通过GUS染色分析,进一步确定候选基因VdERD6L15启动子的关键调控区域位于-500 bp到-1000 bp之间。【结论】VdERD6L15是一个定位在液泡膜上的糖转运蛋白,具有转运葡萄糖的功能;VdERD6L15启动子的核心元件位于ATG上游500~1000 bp之间。

玉米蔗糖转运蛋白基因ZmERD6cDNAs的克隆与逆境条件下的表达

在前期的研究中发现一个玉米苗期早期应答干旱的EST序列,与拟南芥ERD6序列同源性较高。本研究应用电子克隆与同源克隆技术分离出这个基因,并命名为ZmERD6。研究表明ZmERD6具有大小两个转录本,分别被命名为ZmERD6-L和ZmERD6-S。ZmERD6-L开放阅读框1515bp,编码505个氨基酸,ZmERD6-S开放阅读框1386bp,编码463个氨基酸。序列分析表明,ZmERD6-L和ZmERD6-S蛋白结构中含有两个MFS(major facilitator super-family)结构域,属于MFS家族的蔗糖转运子(sugar transporter)亚族。跨膜结构预测表明两个蛋白都具有多个跨膜区,ZmERD6-L蛋白含12个而ZmERD6-S含11个跨膜区。利用半定量RT-PCR分析ZmERD6在ABA、干旱、盐和冷胁迫处理以及不同组织中的表达情况,表明ZmERD6基因在不同胁迫下能被诱导表达,在不同组织中表达有差异。通过在玉米基因组数据库中的查询和比对获得ZmERD6基因上游2.5kb的序列,生物信息学预测表明该序列具有启动子的核心序列及上游增强子序列、抑制子序列,同时还具有冷、茉莉酸甲酯等激素调控序列。

厄贝沙坦对5/6肾切除及腹主动脉缩窄大鼠左心室肥厚及心肌尿素转运蛋白B表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦对5/6肾切除及腹主动脉缩窄大鼠左心室肥厚及心肌尿素转运蛋白B(UT-B)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、5/6肾切除组(肾衰组)、腹主动脉缩窄组(心衰组)、肾衰+心衰组及相应的厄贝沙坦干预组,每组8只。分组处理后,测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、B型利钠肽(BNP);取大鼠心脏,测定左心室质量与全心质量的比值(LVW/HW)、全心质量与体质量的比值(HW/BW)、左心室质量与体质量的比值(LVW/BW);RT-PCR和Western blotting检测心肌UT-B表达。结果与假手术组比较,肾衰组、心衰组及肾衰+心衰组大鼠出现心肌肥厚,LVW/HW、HW/BW、LVW/BW增大,血清AngⅡ和BNP水平增高,心肌组织UT-B mRNA和UT-B蛋白表达上调;肾衰组和肾衰+心衰组SCr、BUN水平升高。与肾衰组、心衰组及肾衰+心衰组比较,相应的厄贝沙坦干预组大鼠的心肌肥厚明显减轻,LVW/HW、HW/BW、LVW/BW降低,血清AngⅡ和BNP下降,心肌UT-B mRNA和UT-B蛋白表达下调。与肾衰组和肾衰+心衰组比较,相应的厄贝沙坦干预组大鼠SCr、BUN水平降低。结论 5/6肾切除及腹主动脉缩窄均可引起大鼠心功能明显下降,出现左心室肥厚,同时心肌UT-B表达增加;厄贝沙坦在改善心、肾功能的同时抑制心肌UT-B表达,UT-B可能在肾功能不全合并心力衰竭的发生中具有重要作用。

葡萄糖转运蛋白显像剂6-^(18)FDG的制备及在小鼠体内的分布

为了研究正电子核素18F标记的葡萄糖转运蛋白显像剂6-18氟-6-脱氧葡萄糖的制备及在小鼠体内的生物学分布,以D-葡萄糖为起始原料,经过丙酮和苯甲醛对1,2,3,5位羟基的定位保护,然后用对甲苯磺酰氯和6位的羟基反应得到能被18F-进攻的离去基团,最后用18F-离子通过亲核取代反应实现对葡萄糖6位的氟代标记;反应中间体用NMR和MS表征,最终产物用标准品6-19FDG在HPLC下对照确认,测定放化纯度,观察其在小鼠体内的生物学分布.6-18氟-6-脱氧葡萄糖的放射性标记过程需35min(从加速器轰击结束算起),放化产率70%±5%(校正后,n=5),放化纯度>95%.小鼠体内的生物学分布表明,各个器官在1.0min达到峰值,然后逐渐平衡.初步研究结果表明,6-18FDG是一种很有价值的葡萄糖转运蛋白显像剂,为以后的体内外研究及活体显像奠定了基础.

氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促癌功能研究

目的研究氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促进大肠癌细胞生长的作用。方法采用实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测35对大肠癌及癌旁组织中SLC6A14 mRNA的表达水平;Western印迹法检测SLC6A14在大肠癌细胞株HT-29和SW620中的蛋白表达;免疫组化法检测108例大肠癌组织中SLC6A14的蛋白表达并分析其表达强度与患者临床特征的相关性;MTT法和流式细胞术分别检测下调或抑制SLC6A14对大肠癌细胞生长及凋亡的影响。结果SLC6A14 mRNA在大肠癌组织中的表达水平是癌旁组织的(3.98±1.1)倍(P<0.05);SLC6A14在大肠癌细胞株HT-29和SW620中的蛋白表达明显高于肝癌细胞株Huh7,分别是其(4.31±1.46)倍和(3.14±0.93)倍,均P<0.05。免疫组化结果显示SLC6A14在Ⅳ期癌组织中的蛋白表达强度(135.36±24.28)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为42.87±26.50、75.67±30.25、101.32±32.47,均P<0.001),但其表达水平在不同年龄、性别和肿瘤大小中的表达差异未见统计学意义(P>0.05)。通过siRNA下调SLC6A14在HT-29和SW620中的表达或抑制剂α-MT后,MTT结果显示大肠癌细胞增殖明显减慢,流式细胞术检测Annexin-Ⅴ+/PI-细胞凋亡明显增加,P<0.05。结论SLC6A14在大肠癌组织和细胞株中表达增加并促进癌细胞生长,是大肠癌治疗的潜在靶点。

G6PD缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变

目的 :探讨葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变及影响因素 .方法 :利用测定细胞在等渗氯化铵溶液中的溶血t1/2 来揭示正常与异常红细胞阴离子转运功能的改变及巯基还原剂的修复 .结果 :G6PD缺乏红细胞 ,Band3蛋白阴离子转运活性较正常对照明显减弱 ,而DTT或巯基乙醇可恢复其阴离子转运活性 .结论 :氧化通过修饰G6PD缺乏红细胞膜蛋白巯基来降低阴离子转运活性 ,这可能成为红细胞溶血的一个重要机制 。

神经毒素6-OHDA干预后星形胶质细胞铁转运蛋白表达的变化（英文）

背景:前期的研究已经证实,在神经元和小胶质细胞中,神经毒素6-OHDA能够增加铁转入蛋白DMT1的表达,减少铁转出蛋白FPN1的表达,可能导致帕金森病黑质铁的沉积。然而,6-OHDA能否在星形胶质细胞中发挥不同的作用尚不明确。目的:观察6-OHDA作用于C6神经胶质瘤细胞(大鼠星形胶质细胞株)后,铁转运蛋白DMT1和FPN1表达变化。方法:培养大鼠星形胶质细胞C6细胞,加入10μmol/L 6-OHDA培养24 h,Western blots法检测6-OHDA干预后DMT1和FPN1蛋白表达。结果与结论:用10μmol/L 6-OHDA作用于大鼠C6星形胶质细胞24 h后,Western blots检测结果显示DMT1蛋白表达升高了2.5倍(P<0.01),FPN1蛋白表达升高了1倍(P<0.05)。提示,6-OHDA通过同时增加铁转运蛋白DMT1和FPN1表达促进铁运速率,星形胶质细胞对6-OHDA的反应与神经元和小胶质细胞不同。

YTHDC1介导ABCB6上调诱导AD小鼠神经元细胞铁死亡促进认知功能障碍机制的实验研究

目的研究ATP结合盒B亚家族转运蛋白6(ATP-binding cassette subfamily B transporter 6,ABCB6)对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠认知功能障碍的影响及其可能的潜在调控分子机制。方法通过注射β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)构建体内AD小鼠模型;采用水迷宫测试和Y迷宫测试评估大鼠学习与记忆能力、空间探索能力。通过神经元HT22细胞和Aβ构建体外AD细胞模型;采用RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)分析YTH结构域包含蛋白1(YTH domain containing proteins 1,YTHDC1)与ABCB6的结合关系;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测过表达和敲低转染效率;Western blot检测YTHDC1和ABCB6蛋白,以及铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]表达水平;CCK-8检测细胞活力;检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及Fe^(2+)含量。结果AD小鼠海马组织及Aβ诱导的HT22细胞中ABCB6 mRNA(3.51±0.17 vs 1.02±0.01,3.45±0.21 vs 1.02±0.01)和蛋白(3.25±0.14 vs 1.01±0.01,3.14±0.16vs 1.01±0.01)水平均显著上调,差异具有统计学意义(t=-46.238,-20.349;-50.468,-23.013,均P<0.001)。敲低ABCB6显著降低AD小鼠抵达平台的时间、到达平台距离,增加小鼠自发交替率和进入新异臂次数的比值(t=27.007,11.264,24.414,19.901,均P<0.001)。敲低ABCB6促进HT22细胞增殖,抑制Aβ诱导的MDA,Fe^(2+)水平上调和GSH水平下调,减少ROS生成,促进SLC7A11和GPX4蛋白表达(t=2.883~26.122,均P<0.05)。YTHDC1蛋白通过与ABCB6 mRNA结合促进其稳定性,上调ABCB6蛋白表达。敲低YTHDC1显著降低ABCB6蛋白水平(t=18.504,P<0.001),促进HT22细胞增殖,升高GSH含量及SLC7A11和GPX4蛋白水平,降低MDA和Fe^(2+)含量,抑制ROS生成(t=4.404~14.486,均P<0.05)。敲低YTHDC1可以改善AD小鼠学习与记忆能力和空间探索能力。过表达ABCB6可逆转敲低YTHDC1对HT22细胞铁死亡和AD小鼠认知功能障碍的影响。结论YTHDC1可能通过介导ABCB6上调,诱导神经元细胞铁死亡,进而促进AD小鼠的认知功能障碍发生。

新型钠磷转运蛋白抑制剂DZ1462在5/6肾切除高磷血症模型大鼠中的药效研究

目的探讨新型肠道钠磷转运蛋白小分子抑制剂DZ1462在大鼠5/6肾切除高磷血症动物模型中的降磷效果。方法首先随机选取156只Wistar大鼠,分为4组:第Ⅰ组6只为正常对照,饲喂正常饲料;第Ⅱ组60只,经过5/6肾切除后饲喂正常饲料;第Ⅲ组60只,经过5/6肾切除后饲喂高磷饲料;第Ⅳ组30只为假手术组,即只打开腹腔,不摘除肾脏,闭合伤口后饲喂高磷饲料。造模周期为10周。每两周检测各组大鼠血清磷含量,记录大鼠死亡数量,并进行HE染色观察肾脏病理变化,筛选高磷血症动物模型。选取符合入组标准的18只模型大鼠(均来源于第Ⅲ组),随机分为3组:模型对照组,记为G2组;DZ1462给药组(每次30 mg/kg,每日3次),记为G3组;商品化的降血磷药物碳酸司维拉姆片(Sevelamer)给药组(每次250 mg/kg,每日3次),记为G4组。每组6只,连续给药21 d。另外设正常对照组,记为G1组。运用无机磷检测试剂盒分析各组大鼠的血清磷水平变化。结果在手术建模后的第8周和第10周,5/6肾切除手术+高磷饲料饲喂的第Ⅲ组大鼠血清磷水平均明显高于正常对照第Ⅰ组(P<0.01);第Ⅲ组大鼠的肾脏出现了明显的肾小球硬化、肾小管萎缩、退化、间质炎症、纤维化和钙化,与人慢性肾病并发的高磷血症相似,提示肾性高磷血症动物模型建立成功。用药后,在各测量时间点上,DZ1462组大鼠的血清磷抑制率显著高于Sevelamer组(P<0.05)。结论DZ1462作为一种新型肠道钠磷转运蛋白小分子抑制剂,在大鼠高磷血症模型中能够有效抑制肠道磷离子的吸收,有望成为临床上治疗高磷血症的一种潜在有效药物。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白在L6骨骼肌细胞调节性体积增加中的作用(英文)

在许多类型的哺乳动物细胞中,细胞体积对介导胰岛素发挥其生理功能起关键作用.细胞体积调节机制在胰岛素的主要靶组织骨骼肌中尤为重要.为了解该组织中细胞体积调节的机制,对Na+K+2Cl-共转运蛋白在大鼠L6骨骼肌细胞中的表达及其在调节性体积增加中的作用进行了研究.应用免疫印迹法,在L6肌管细胞中检测到分子量为170kD的钠钾氯共转运蛋白.K+(86Rb+)输入实验结果表明,54%的86Rb+是通过钠钾氯共转运蛋白输入细胞的,而其余86Rb+的输入是通过钠钾三磷酸腺苷酶和其他未知转运蛋白实现的.当L6细胞被置于高渗透压溶液(420mosmolL)中,导致细胞体积减少40%,同时钠钾氯共转运蛋白的活性迅速增加(高达2倍).细胞体积在60min内恢复至正常,但在钠钾氯共转运蛋白抑制剂bumetanide存在时,这种调节性体积增加的过程被阻断.这些结果表明,L6肌管细胞表达具有生理活性的钠钾氯共转运蛋白;此转运蛋白被高渗透压诱导造成的细胞体积缩小激活的现象表明,它是细胞调节性体积增加(RVI)机制中的关键元素,在L6骨骼肌细胞体积的调节中起重要作用.

老年骨肉瘤术后组织中纤毛内转运蛋白20、癌胚抗原相关细胞黏附分子6和抑癌基因的表达及意义

目的应用免疫组化方法检测老年人骨肉瘤患者术后组织中纤毛内转运蛋白(IFT)20、癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM)6和抑癌基因PTEN(PTEN)的表达,研究三种蛋白在不同临床特征中的表达差别。方法病理确诊的69例老年人骨肉瘤术后组织作为观察组,选择50例外伤后切除的正常骨组织作为对照组,采用免疫组化SP法检测两组中IFT20、CEACAM6和PTEN的表达。结果两组中IFT20、CEACAM6和PTEN表达的阳性率差别显著,观察组中IFT20、CEACAM6和PTEN表达的阳性率均与肿瘤的最大径线、有无软组织浸润、有无转移及不同Ennecking分期有关。相关分析显示IFT20和PTEN的表达呈负相关。结论老年人骨肉瘤术后组织IFT20和CEACAM6高表达,PTEN低表达,三者异常表达可以促进肿瘤的发生和进展,IFT20可能通过调节抑癌基因PTEN的表达发挥生物学作用。

拟南芥MGT6调控高镁条件下Ca^(2+)/Mg^(2+)动态平衡的机制研究

镁是植物生长发育所必需的营养元素之一,在一系列生理生化过程起着重要的作用。高镁胁迫影响植物正常生长发育,但到目前为止有关植物响应高镁胁迫的机制报道较少。镁转运蛋白6(magnesium transporter 6,MGT6)是植物中第一个被报道定位于细胞质膜,并在低镁条件下介导植物根部吸收镁离子的蛋白质。本研究发现,MGT6的突变体和RNA干扰植株在高镁条件下出现叶片变黄、地上部分变小的表型,该表型能被一定浓度的钙离子拮抗。这暗示MGT6可能通过调控钙镁离子动态平衡来响应高镁胁迫。

饲粮n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对冬毛期北极狐生长性能及肝脏脂肪酸代谢相关蛋白基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮n-6/n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)比值对冬毛期北极狐生长性能、肝脏脂肪酸组成及肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)和脂肪酸转运蛋白(FATP)基因表达的影响。试验选取48只157日龄、平均体重为(5 658±47)g的健康雄性北极狐,随机分成4组,每组12个重复,每个重复1只。Ⅰ组饲粮中添加12.00%鱼油和2.00%豆油,n-6/n-3 PUFA比值为3.00;Ⅱ组饲粮中添加9.38%玉米油和4.62%豆油,n-6/n-3 PUFA比值为18.03;Ⅲ组饲粮中添加12.00%玉米油和2.00%豆油,n-6/n-3 PUFA比值为40.83;Ⅳ组饲粮中添加1.50%鱼油和12.50%玉米油,n-6/n-3 PUFA比值为136.36。各组饲粮除油脂组成和配比不同外,其他原料一致。预试期7 d,正试期40 d。结果表明:1)饲粮n-6/n-3 PUFA比值对冬毛期北极狐的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)有极显著影响(P<0.01)。Ⅰ和Ⅳ组的ADG极显著高于Ⅱ和Ⅲ组(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组的ADFI极显著高于Ⅲ组(P<0.01),Ⅳ组的F/G极显著低于Ⅱ和Ⅲ组(P<0.01)。2)饲粮n-6/n-3 PUFA比值对冬毛期北极狐肝脏单不饱和脂肪酸(MUFA)、PUFA、n-3 PUFA和n-6 PUFA的含量有显著或极显著影响(P<0.05或P<0.01),对肝脏饱和脂肪酸(SFA)含量无显著影响(P>0.05)。Ⅰ和Ⅳ组肝脏n-3 PUFA含量极显著高于Ⅱ和Ⅲ组(P<0.01),Ⅱ和Ⅲ组肝脏n-6 PUFA含量极显著高于Ⅰ和Ⅳ组(P<0.01)。3)饲粮n-6/n-3 PUFA比值对冬毛期北极狐肝脏L-FABP mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05),但极显著影响肝脏FATP mRNA相对表达量(P<0.01)。Ⅰ和Ⅳ组肝脏FATP mRNA相对表达量极显著高于Ⅱ和Ⅲ组(P<0.01)。由此可见,饲粮添加1.50%鱼油与12.50%玉米油的混合油脂,即饲粮n-6/n-3 PUFA比值为136.36时,上调了肝脏中FATP基因的表达,增加了肝脏长链脂肪酸的转运及利用效率,促进了冬毛期北极狐的生长。

锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布

目的研究游离锌离子和锌转运体6(zinc transporter 6,ZnT6)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法应用浸入式金属自显影技术(AMG)和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP),通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在老年斑内的定位,并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性。结果游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内。结论APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达,并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用。

6-羟基多巴胺损毁单侧内侧前脑束与单侧纹状体大鼠模型的病变早期比较

目的 比较6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁的单侧内侧前脑束(MFB)与单侧纹状体大鼠模型成模4周后多巴胺(DA)系统中神经递质功能变化。方法 选择62只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为4组:1位点模型组(n=18,1个位点纹状体损毁)、4位点模型组(n=18,4个位点纹状体损毁)、MFB模型组(n=18,MFB损毁)和假手术对照组(n=8)。运用免疫组织化学酪氨酸羟化酶(TH)染色方法统计阳性DA神经元脱失率,运用体外放射配体-受体结合实验、行为学实验和小动物正电子发射断层扫描(PET)检测四组模型DA转运蛋白(DAT)和D2受体的放射活性结合率的变化。结果 TH免疫组化染色结果显示,1、4位点模型组和MFB模型组病灶侧TH阳性细胞脱失率分别为19.1%、 84.7%、97.1%,提示模型制作成功。DAT和D2受体检测结果显示:与假手术对照组相比,1、4位点模型组及MFB模型组病侧DAT放射活性结合率均下降(P<0.05、P<0.05和P<0.01),且4位点模型组的下降程度明显高于1位点模型组(P<0.05),MFB模型组的下降程度明显高于1、4位点模型组(P<0.01);与假手术对照组相比,1、4位点模型组病侧D2受体放射活性结合率均下降(P<0.05),MFB模型组病侧D2受体放射活性结合率升高(P<0.05)而1、4位点模型组间的下降程度比较无统计学差异。DAT和D2受体在假手术对照组大鼠病侧与健侧的分布无差异。甲基苯丙胺可诱导3个模型组产生朝向病灶同侧的旋转,但3个模型组之间的旋转差异无统计学意义;溴隐亭可诱发1、4位点模型组产生朝向病灶同侧的旋转,但引发MFB模型组朝向病灶对侧的旋转,1、4位点模型组之间的旋转差异无统计学意义;步行实验结果显示,3个模型组病侧肢体运动启动时间明显长于健侧、步长长度明显短于健侧、步伐调整数明显少于健侧(P<0.001),但3个模型组间病侧的启动时间、步长长度和步伐调整数比较后差异无统计学意义。结论 纹状体和MFB两种单侧损毁模型DA神经递质功能及行为学方面表现出不同的病理生理过程。MFB损毁模型类似于人类原发性帕金森病,而纹状体损毁模型则类似于某些帕金森综合征。

跨膜丝氨酸蛋白酶6:一种新发现的铁调素调节子

跨膜丝氨酸蛋白酶6(TMPRSS6)是最近发现的一种丝氨酸蛋白激酶,它通过调节铁调素(hepcidin)的表达,进而影响生物机体的铁稳态.它的发现,不仅对进一步认识机体铁代谢的调控及其分子机制有重要的理论意义,还为揭示铁代谢相关疾病的病因和探索治疗的相关途径提供了新的思路.

高内涵成像仪检测生脉饮中的药味对葡萄糖转运蛋白4易位的影响

目的本研究将通过高内涵成像仪检测红参、麦冬、五味子的总提取物是否影响葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的易位和葡萄糖摄取,并且验证高内涵成像仪是否可以用于检测GLUT4易位。方法L6-GLUT4myc细胞经过给药和胰岛素刺激30 min后,检测GLUT4易位和葡萄糖摄取。结果红参、麦冬、五味子的提取物显著增加了GLUT4-myc的表达,并且同时也增加了葡萄糖的摄取。结论红参、麦冬、五味子的总提取物是通过增加了GLUT4的易位而增加了葡萄糖的代谢。此外本研究也证明L6-GLUT4myc细胞株可以结合高内涵成像系统进行针对刺激GLUT4易位的筛选研究。

miR-340对脑胶质瘤中GLUT1/6表达及细胞增殖、迁移的影响

目的探究脑胶质瘤微小核糖核酸microRNA-340(miR-340)与IDH1、P53、CD34、Ki-67表达的关系以及初步探索miR-340对胶质瘤细胞功能和葡萄糖转运蛋白1/6(glucose transporter 1/6,GLUT1/6)表达的影响.方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测脑胶质瘤组织标本及胶质瘤细胞系miR-340的表达水平;细胞功能试验检测miR-340对胶质瘤的影响;qRT-PCR、蛋白质免疫印迹检测转染miR-340对GLUT1/6表达的影响.结果miR-340在正常脑组织中高表达,胶质瘤组织中低表达(P<0.001);miR-340 mimics可以抑制U87、U251细胞增殖、增加凋亡、减弱迁移侵袭.miR-340 mimics可以显著抑制胶质瘤细胞中GLUT1/6的表达(P<0.001).结论胶质瘤miR-340水平降低,且与Ki-67表达呈明显负相关.miR-340通过降低胶质瘤中GLUT1/6表达从而影响胶质瘤葡萄糖转运以抑制增殖,降低恶性程度.

达格列净对2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者机体中性粒细胞与淋巴细胞比值、血小板与淋巴细胞比值、C反应蛋白、白介素6的影响

目的探究达格列净对2型糖尿病(T2DM)合并颈动脉粥样硬化患者机体中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)的影响。方法选取2019年8月~2020年1月郑州大学第二附属医院收治的100例T2DM合并动脉粥样硬化患者作为研究对象,按照随机数字表法将其分为Dap组与Con组,每组各50例。Con组患者采用原降糖方案,Dap组患者采用原降糖方案基础上加用达格列净,治疗20周。比较两组患者治疗前后的NLR、PLR、CRP、IL-6水平。结果治疗前两组患者的NLR、PLR、CRP及IL-6水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者的NLR、PLR、CRP及IL-6水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后Dap组患者的NLR、PLR、CRP及IL-6水平低于Con组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论达格列净可降低T2DM合并颈动脉粥样硬化患者NLR、PLR、CRP及IL-6水平,改善机体的低炎症反应状态。

新型DPP-4抑制剂LGT-6在Caco-2细胞单层模型中的转运特性研究

通过建立Caco-2细胞单层模型探究降糖化合物LGT-6的转运特性。采用MTS法测定LGT-6的安全浓度范围,通过测定跨膜电阻、碱性磷酸酶活力、高渗透性药物普莱洛尔与低渗透性药物荧光素钠通透性实验的表观渗透系数P_(app)(AP→BL)来验证Caco-2细胞单层模型的致密性。考察LGT-6在从Transwell顶端(AP)到底端(BL)及底端到顶端的转运特性,计算表观渗透系数和外排比。分析转运时间、给药浓度和P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对LGT-6转运特性的影响。Caco-2细胞单层模型建立成功,可用于LGT-6的转运特性研究。LGT-6的转运量随时间的延长及浓度的增大而增加,不同浓度的LGT-6在双向转运随浓度变化而变化,从AP→BL的P_(app)值为3.55×10^(-6)~5.64×10^(-6)cm/s,BL→AP的P_(app)为4.28×10^(-6)~8.76×10^(-6)cm/s,外排比(ER)均≥1.2。降糖化合物LGT-6在体外Caco-2细胞模型上的口服吸收较好,其转运方式主要以被动扩散为主,可能有P-糖蛋白参与其转运。