基于ORAI1/NFAT信号轴探讨镇心安神方对1-氯-2,4-二硝基苯诱导特应性皮炎小鼠的作用及机制

目的基于钙通道调节分子1(ORAI1)/T细胞核因子(NFAT)信号轴探讨镇心安神方(龙骨、牡蛎、淡竹叶、骨碎补、茯苓)对特应性皮炎(AD)小鼠的作用及机制。方法将36只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、西替利嗪组(1.3 mg·kg^(-1))及镇心安神方组(36.36 g·kg^(-1)),每组9只。采用1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)诱导建立AD小鼠模型。灌胃给药,每日1次,连续给药2周。给药结束后,测定皮损面积,并对皮损严重程度进行评分;测定脾脏质量,计算脾脏指数;采用HE染色法观察皮损组织病理变化;ELISA法检测血清中白细胞介素4(IL-4)、IL-13及胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的含量;Western Blot法检测皮损组织中ORAI1、钙调磷酸酶A(CaN)、T细胞核因子2(NFAT2)蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组小鼠的皮损评分显著升高(P<0.01),皮损面积显著扩大(P<0.01);表皮层及真皮层厚度显著增加(P<0.01),表皮过度角化,棘层肥厚,真皮层可见嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润;脾脏指数及血清IL-4、IL-13、TSLP水平显著升高(P<0.01);皮损组织中CaN、NFAT2、ORAI1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,镇心安神方组小鼠的皮损评分显著降低(P<0.01),皮损面积显著缩小(P<0.01);表皮层及真皮层厚度显著降低(P<0.01),表皮过度角化减轻,棘层轻度肥厚,真皮层有少量炎性细胞浸润;脾脏指数及血清IL-4、IL-13、TSLP水平显著降低(P<0.01);皮损组织中CaN、NFAT2、ORAI1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论镇心安神方能够改善DNCB诱导AD小鼠的皮肤病理损伤,可能与其抑制ORAI1、CaN及NFAT2蛋白表达,降低血清TSLP、IL-4、IL-13等2型炎症因子水平,通过免疫调节改善皮肤炎症及瘙痒有关。

镇心安神方对辣椒素诱导的背根神经节细胞瞬时受体电位通道蛋白及自噬蛋白表达的影响

目的观察镇心安神方含药血清对辣椒素诱导的小鼠背根神经节(DRG)细胞瞬时受体电位(TRP)通道蛋白及自噬蛋白表达的影响,探讨其改善瘙痒的机制。方法雄性SD大鼠分别予蒸馏水、镇心安神方颗粒水溶液灌胃7 d,腹主动脉采血制备空白血清及镇心安神方含药血清。分离并培养小鼠DRG细胞,免疫荧光染色鉴定DRG细胞,采用辣椒素刺激DRG细胞建立慢性瘙痒模型,将细胞分为对照组、模型组、镇心安神方含药血清组和辣椒平组,Western blot检测细胞TRPV1、TRPA1、TRPM8蛋白及自噬蛋白LC3表达。结果与对照组比较,模型组细胞TRPV1、TRPA1、TRPM8蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,镇心安神方含药血清组和辣椒平组细胞TRPV1、TRPA1蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(P<0.05);与辣椒平组比较,镇心安神方含药血清组细胞TRPA1蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.05)。结论镇心安神方含药血清能下调辣椒素诱导的DRG细胞TRPV1、TRPA1及自噬蛋白LC3表达,可能是该方降低神经细胞兴奋性进而改善瘙痒的分子机制之一。

镇心安神方对DNCB致敏诱导特应性皮炎小鼠皮肤组织TRPs表达的影响

目的观察镇心安神方对1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)致敏诱导特应性皮炎(AD)小鼠皮肤组织瞬时电压感受受体(TRPs)表达的影响。方法 SPF级雌性BALB/c小鼠24只随机分为4组(正常对照组、模型组、阳性对照组及中药组),每组6只,采用DNCB诱发皮炎法制备AD模型,自造模后第14天起,中药组每天按镇心安神方生药量为18.18 g/kg颗粒水溶液灌胃,阳性对照组每天给予西替利嗪1.3 mg/kg灌胃,模型组及正常对照组每天给予0.1 mL/10 g生理盐水灌胃。连续灌胃14天。于造模第1、4、14、28天分别观模型小鼠皮损评分和搔抓频率变化,HE染色观察皮损组织病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光定量技术(RT-PCR)检测皮损中TRPV1、TRPA1、TRPM8蛋白及mRNA相对表达量。结果与正常对照组比较,造模第14天各组小鼠搔抓次数明显增加(P<0.01),出现红斑、水肿、糜烂、结痂、干燥等AD样表现,皮肤组织病理学表现为表皮增生明显,棘层肥厚,海绵水肿,真皮层大量炎性细胞浸润;与模型组比较,造模第28天中药组及阳性对照组搔抓次数及皮损评分均降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组TRPA1、TRPV1、TRPM8蛋白及mRNA表达均升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、阳性对照组TRPA1、TRPV1、TRPM8蛋白及mRNA表达均降低(P<0.01),中药组TRPA1表达高于阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论镇心安神方可以改善模型小鼠AD样皮损及瘙痒,抑制TRPs表达可能是其作用机制,值得深入探索。

镇心安神方对特应性皮炎样动物模型维生素D及丝聚蛋白表达的影响

目的探讨镇心安神方(ZXASF)对特应性皮炎(AD)样小鼠模型血清及皮肤组织1,25(OH)2-D3、维生素D受体及Filaggrin表达的影响。方法采用1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)反复刺激BALB/c小鼠背部皮肤,建立AD样动物模型。54只小鼠随机分为6组(正常对照组、模型组、维生素D组、ZXASF低、中、高剂量组),每组9只。造模14 d后,ZXASF低、中、高剂量组分别按含ZXASF生药量9.9 g/(kg·d)、18.18 g/(kg·d)及36.36 g/(kg·d)的颗粒水溶液灌胃,维生素D组灌服维生素D滴剂2000 IU/(kg·d),模型组及正常对照组灌服生理盐水0.1 mL/(10g·d),共治疗14 d,观察各组模型小鼠皮损面积及皮炎评分,ELISA检测模型动物血清1,25(OH)2-D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量,HE染色观察皮损组织病理学变化,免疫组织化学检测皮肤组织FLG的表达。结果末次给药后模型组皮炎评分、皮炎面积均高于正常对照组(P<0.01),模型组皮肤组织病理学表现为角化过度、棘层肥厚、海绵形成、真皮层炎性细胞浸润,ZXASF低、中、高剂量组及维生素D组小鼠背部皮损的红斑、糜烂、渗液及结痂减轻,皮炎评分及皮损面积均低于模型组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组血清1,25(OH)2D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,ZXASF中剂量组血清1,25(OH)2D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin含量升高(P<0.05),ZXASF低、高剂量组血清1,25(OH)2D3含量低于维生素D组(P<0.05),ZXASF中剂量组血清VDR含量高于维生素D组(P<0.05)。结论ZXASF可以改善AD样动物模型皮损,上调动物模型血清1,25(OH)2-D3、维生素D受体及皮肤组织Filaggrin的表达,以中剂量组作用最为显著。