浙江眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒镇痛多肽的分离纯化及其性质的研究

研究浙江眼镜蛇 (Najanajaatra)蛇毒的镇痛活性组分 ,为寻找镇痛效果好 ,而无成瘾性的新型镇痛药奠定基础。采用CM Sephadex离子交换色谱和SephadexG 5 0凝胶过滤色谱对浙江产眼镜蛇蛇毒中的镇痛活性组分进行分离纯化。采用PAGE IEF及HPLC等实验方法对产物纯度进行鉴定。采用SDS PAGE法和HPLC法测定产物的分子质量 ,用IEF法测定产物的等电点 ,用小鼠热板法与醋酸扭体法考察产物的镇痛活性。结果表明眼镜蛇毒经 3次柱色谱后 ,产物AAP经鉴定为单一组分。AAP经SDS PAGE法和HPLC法测定的分子质量分别是 7 2 8Mr 和 7 2 5Mr,等电点是 9 5 8。AAP的痛阈提高百分率和扭体抑制率分别为 91 3% ,77 2 %。眼镜蛇毒经

新型镇痛多肽Eb1.6的含量及有关物质检测

目的:建立一种适用于新型alpha芋螺镇痛多肽Eb1.6含量及有关物质的分析方法,以及其水分和乙酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定Eb1.6原料药中Eb1.6的含量。使用Zorbax XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为含0.1%三氟乙酸(TFA)的水,流动相B为含0.1%TFA的乙腈,梯度洗脱,流速1 m L·min-1,检测波长214 nm,柱温25℃;采用卡尔菲休库仑滴定法及高效液相色谱法测定样品中水分及乙酸含量。结果:3批Eb1.6原料药中Eb1.6含量范围在(98.85±0.63)%^(99.04±0.33)%之间(按无水物计算),总有关物质含量在0.45%~0.84%之间,样品中水分含量在(1.23±0.32)%^(2.23±0.23)%之间,乙酸含量在(11.16±0.08)%^(12.66±0.03)%之间。结论:该方法快速简便,结果准确可靠,可用于Eb1.6的质量分析。

应用仿生亲和层析从广东产舟山眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒中分离纯化镇痛多肽

研究眼镜蛇毒镇痛组分的分离纯化方法,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药物,在合成出可用于亲和吸附眼镜蛇毒心脏毒素层析介质的基础上,结合阳离子交换UND SphereTMS,凝胶过滤Sehpadex G-50,疏水层析Phenyl SepharoseTM CL-4B,从广东产舟山眼镜蛇毒中分离出镇痛多肽。此外,将凝胶过滤Sehpadex G-50应用于仿生亲和层析之前检测分离效果。得出在一步仿生亲和层析后,用疏水层析的方法分离效果更佳,仿生亲和层析适于第一步分离。

镇痛多肽类分子研究进展

疼痛是机体的一种正常保护性机制,也是许多临床疾病的常见症状。但常用药物吗啡,作为镇痛药存在着不可避免的副作用,因此寻找无瘾性镇痛药已成为该领域一大研究热点。来源于生物毒素的镇痛多肽,具有无成瘾性、持久性、安全性较高等显著优势,有望开发成新型镇痛药物。以镇痛多肽的作用机制为出发点,从离子通道类、阿片受体类、激酶类和其他类4个方面综述镇痛多肽的研究进展,重点讨论其来源、氨基酸序列、活性位点和作用机制,旨在为此类多肽的应用提供参考信息。

一种具有镇痛作用的新蝎毒多肽的分离纯化研究

目的从蝎毒中寻找一种新的镇痛多肽,考察其分离纯化的最佳条件,并对其生物活性进行研究。方法通过应用Superdex 75凝胶层析预装柱,对样品的不同处理方法、洗脱流速、不同洗脱液以及样品浓度对分离条件进行考察,采用SDS-PAGE电泳鉴定各组分纯度以及分子量。热板法和醋酸扭体法检测生物活性。结果蝎毒溶解后直接低温离心,过滤,上层析柱;样品浓度为10 mg/ml,以0.05 M PBS p H=7.2缓冲液洗脱,洗脱流速为1.0 ml/min,为其最佳分离、纯化条件。分离纯化所得的5号组分,具有很好的镇痛作用,SDS-PAGE电泳显示其呈单一条带。分子量大致为10KDa-15KDa之间。结论选用Superdex 75凝胶层析预装柱可获得一种新的具有镇痛作用的蝎毒多肽,具有良好的开发应用前景。

信息

壳聚糖酶生产菌及低聚壳聚糖的生产方法；一种制造新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖的方法；一种海洋芽孢杆菌生产抗真菌抗生素的发酵方法；海藻中提取铁超氧化物歧化酶的方法；一种海洋绿藻两步法生物光解水制氢方法；深海远古生物基因免疫调控酒及其生产方法；海洋芋螺镇痛多肽的制备方法。

人源化抗ROR1抗体及其AGAP偶联物对卵巢癌生物学特性的影响

目的:制备酪氨酸激酶样孤儿受体1(tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1)的全分子抗体(ROR1-IgG1)及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体(fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP),检测ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法:以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S),收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)等评估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫学活性。通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮细胞-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达,评估ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:成功制备出ROR1-IgG1和IgG1-AGAP,且能够与ROR1蛋白特异性结合;IgG1-AGAP与ROR1-IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且IgG1-AGAP组的抑制作用显著高于ROR1-IgG1组,而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明,在空白对照组、ROR1-IgG1组和IgG1-AGAP组中,Snail的表达量呈现递减趋势,而E-cadherin表达量递增,提示ROR1-IgG1和IgG1-AGAP可通过调控Snail和E-cadherin而抑制HO8910细胞发生EMT,进而抑制其迁移和侵袭能力。结论:IgG1-AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞,并具有显著的抗肿瘤活性,IgG1-AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。

人源抗c-Met抗体与rAGAP偶联物对卵巢癌细胞生物学特性的影响

目的:制备人源抗c-Met的全分子抗体(c-Met-IgG1)及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)偶联的新型抗体(c-Met-IgG1-rAGAP),分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法:以本实验室保存的人源抗c-Met抗体基因为模板,构建c-Met-IgG1-rAGAP真核表达载体并转染真核细胞,表达并纯化抗体偶联物。通过亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法,评估c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP的生物学特性。通过CCK-8、划痕实验、Transwell侵袭实验检测抗体对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:成功制备出能够与c-Met蛋白特异性结合的c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP两种抗体;一系列实验证明了c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP均可抑制c-Met阳性的卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且c-Met-IgG1-rAGAP对卵巢癌细胞的抑制作用要强于c-Met-IgG1,而在c-Met阴性的IOSE386细胞中并未观察到这些作用。结论:研究结果表明c-Met-IgG1-rAGAP可靶向作用于c-Met阳性的卵巢癌细胞并具有抗肿瘤活性,可为探索卵巢癌的分子靶向治疗奠定研究基础。