蝎毒镇痛活性肽镇痛作用的研究

本文以行为及电生理反应方法研究了蝎毒镇痛活性肽（SAP）的镇痛作用。SAP是由东亚钳蝎毒经Sephadex柱层析反复分离纯化而成的多肽物物质。实验中利用大鼠光热甩尾法、小鼠热板法及扭体法证明SAP有很强的镇痛作用。SAP对大鼠三叉神经下颌分支刺激引起的皮层诱发电位N波有较强的抑制作用。对吗啡耐受的大鼠仍有较强的镇痛作用。

镇痛活性肽VRD突变体(S54A)的构建与表达以及对活性的影响

目的研究54位丝氨酸对镇痛活性肽(analgesic peptide,AGP)VRD生物活性的影响。方法利用一步聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),用Ala替代镇痛活性肽VRD第54位的Ser,从而构建突变体S54A。采用本实验室构建的pSYPU作为表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。通过金属离子螯合亲和柱色谱和阳离子交换柱色谱方法对重组蛋白进行分离纯化。小鼠扭体法测定重组蛋白的镇痛活性。结果重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过两步色谱方法获得了电泳纯样品。突变体S54A的镇痛活性明显低于AGP-VRD(P<0.05)。结论镇痛活性肽VRD中54位丝氨酸与其镇痛活性密切相关。

虎纹镇痛活性肽在毕赤酵母中的分泌表达

虎纹镇痛活性肽HWAP Ⅰ是从虎纹捕鸟蛛初毒中分离纯化 ,具有镇痛活性的多肽类神经毒素 .为了在P .pastoris中高效分泌表达HWAP Ⅰ ,依照RT PCR的结果 ,人工合成编码虎纹镇痛活性肽的基因片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,构建表达质粒pPIC9K HWAP Ⅰ .转化GS115宿主菌后 ,筛选出整合型His+ MutS 表达菌株 .经诱导培养后 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)证明HWAP Ⅰ在毕赤酵母中能有效分泌表达 ,产物的分子质量为 4ku左右 ,产量达 80mg/L .

蝎毒镇痛活性肽基因BmK AngM1的密码子优化及其真核表达分析

密码子的偏爱性是影响基因异源表达的重要因素,通过对外源基因的密码子序列进行优化可提高其表达水平。为了获得蝎毒镇痛活性肽基因BmK AngM1在毕赤酵母中的高效表达,根据毕赤酵母密码子偏爱性,将BmK AngM1基因中的毕赤酵母低利用率密码子突变为其高利用率简并密码子,克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达;重组蛋白表达量测定结果显示,优化后的BmK AngM1基因在毕赤酵母中的表达水平是优化前的3.7倍。研究结果表明,密码子优化能显著提高BmK AngM1基因在毕赤酵母中的表达水平。

毕赤酵母Muts与Mut＋重组子表达蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1水平比较

蝎毒镇痛活性肽Bm K Ang M1是从东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)蝎毒中分离得到的一种新型长链蝎毒素,其镇痛活性强且毒性低,有望开发成镇痛新药。本文将Bm K Ang M1基因转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到甲醇利用缓慢型(Muts)和快速型(Mut+)的重组子;采用实时荧光定量PCR方法,检测了Mut+重组子中Bm K Ang M1基因的拷贝数,筛选出含单拷贝Bm K Ang M1基因的Mut+重组子;在相同培养条件下,比较了含单拷贝Bm K Ang M1基因的Muts和Mut+重组子表达Bm K Ang M1的水平。结果表明,Muts重组子中Bm K Ang M1基因转录水平是Mut+重组子的2.7倍,Muts重组子中Bm K Ang M1蛋白表达量是Mut+重组子的1.5倍。因此,Muts重组子比Mut+重组子具有更强的Bm K Ang M1表达能力。

东亚钳蝎及蝎毒镇痛作用研究进展

目的综述东亚钳蝎及蝎毒的镇痛作用、蝎毒镇痛活性肽及其突变体的镇痛活性,为进一步研究蝎毒镇痛作用提供参考。方法参考国内外74篇文献,从全蝎和蝎毒的镇痛作用、蝎毒的镇痛成分、蝎镇痛活性肽及其突变体三个方面进行总结和综述。结果全蝎和蝎毒均具有较好镇痛效果,但临床直接应用会产生很大的毒副作用。为减少这种副作用,现已从蝎毒中分离纯化出11类单一的具有镇痛作用的活性成分。此外,国内许多研究者用蝎毒分离纯化出的9种蝎镇痛活性肽作为先导化合物进行修饰改造,并探究其突变体的镇痛活性以及影响镇痛效果的结构,为研发出新型镇痛药物提供了理论依据。结论蝎毒及其活性成分不仅对内脏痛、躯体痛、癌肿痛、神经痛等有较好的疗效,对多种急、慢性疼痛均有较强抑制作用,有助修复受损神经,而且镇痛效果强于吗啡,又无成瘾性,为开发出具有无成瘾性、持久性、安全性较高的新型镇痛药物提供了理论依据。

蝎及蝎毒抗肿瘤作用研究进展

目的介绍蝎、蝎毒及其中活性组分抗肿瘤作用研究进展。方法根据近年来国内外公开发表的有关文献,从蝎及蝎毒的抗肿瘤作用、蝎毒抗肿瘤成分及其生物学机制、全蝎及蝎毒抗肿瘤的临床应用等方面综述。结果与结论全蝎粗提物可使体外培养的人体子宫颈癌细胞全部死亡脱壁,全蝎的醇制剂在体外能显著抑制人肝癌细胞呼吸,并对结肠和人肝癌细胞的生长均有明显的抑制作用,蝎尾提取物对肿瘤兼有预防和治疗的双重作用;蝎毒粗毒对肿瘤有确切的抑制作用,且优于化疗药物;蝎毒中具有抗肿瘤活性的单组分活性肽为Chlorotoxin和东亚钳蝎镇痛抗肿瘤活性肽;Chlorotoxin特异性抑制神经胶质瘤细胞的迁移与浸润,而不影响正常脑细胞;东亚钳蝎镇痛抗肿瘤活性肽是Na+离子通道抑制剂,其抗肿瘤作用机理可能与Chlorotoxin不同。