基于镉特异性功能化核酸适配体测定痕量镉的共振光散射新方法

镉特异性功能化核酸适配体(FA_(Cd))在无镉体系中能阻碍金纳米(GNPs)与罗丹明6G(Rh6G)聚集,体系共振光散射强度较低。当体系中存在镉离子时,FACd与之特异性结合,从RNA位点处断裂产生适配体片段(FAF),FAF与GNPs和Rh6G形成GNPs-FAF-Rh6G聚合物,共振光散射强度大幅增加,共振光散射强度值(I_(RLS))与镉的浓度(cCd^(2+))在0.28~11.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%~101.4%。

癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选

目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。

基于重氮功能化直立碳纳米管阵列的核酸适配体传感器的制备及其应用于凝血酶的检测

核酸适配体（aptamer）是一类通过SELEX技术从DNA或RNA库中筛选出来的新型的单链寡核苷酸片段，利用其与目标分子的特异性结合，广泛应用于分子识别领域。近年来学者们都努力寻找与某些疾病相关的蛋白质能特异性结合的核酸适配体，以期加强相应疾病的诊断和治疗。凝血酶（thrombin）作为血液中的一种蛋白酶，在血液凝固、创伤和炎症等生理和病变过程中都发挥着重要作用。

细胞特异性核酸适配体在疾病治疗中的应用

核酸适配体是由20-100个核苷酸组成的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)或核糖核酸(RNA),一般是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)进行筛选。核酸适配体可以与多种靶标物质特异性结合,包括毒素、金属离子、生物大分子、微生物等,已被广泛应用于食品检测、医疗诊断等领域。细胞作为人体最基本的组成单位是大多数疾病病理机制和治疗策略的研究重心。近年来,核酸疗法以更安全更高效的优势成为疾病治疗领域的研究重心,研究人员认识到核酸适配体的靶向结合能力可以应用到细胞的靶向治疗中。因此,开发出Cell-SELEX技术用于筛选可以靶向细胞标志物的核酸适配体。细胞特异性核酸适配体与传统的核酸适配体的区别,在于它们的特异性靶标是细胞成分,它们可以直接结合与细胞生长和代谢相关的物质影响细胞生理活动,也可以作为靶向递送工具递送药物,在疾病的精准治疗中具有突破性影响。因此,细胞特异性核酸适配体引发了广泛关注。本文对细胞特异性核酸适配体在多种疾病治疗中的研究进展进行了综述,以期为其在人类疾病治疗中的应用提供参考。

特异性检测卵形鲳鲹源哈维氏弧菌的核酸适配体的筛选与鉴定

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水养殖动物常见的主要致病菌之一,严重危害着我国华南沿海地区水产养殖业的健康可持续发展。针对哈维氏弧菌的快速检测诊断技术和抑菌技术等方面进行系统研究,并开发具有市场发展潜力的快速检测试剂盒和抗菌功能产品,对控制哈维氏弧菌的危害极其重要。为此,本研究以哈维氏弧菌为靶标,利用指数富集的配基系统进化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)技术,筛选特异性识别哈维氏弧菌的核酸适配体,并对核酸适配体的性质进行系统性研究。结果显示,核酸适配体H10、H13能高特异性和高亲和性地识别哈维氏弧菌,并且无毒副作用。同时,靶标性质分析表明核酸适配体(H10,H13)的靶标可能是细胞膜蛋白或膜蛋白相关成分。本研究运用SELEX技术筛选获得的ssDNA核酸适配体H10和H13,具有高特异性和亲和性,可用于研发操作便捷、灵敏度高的哈维氏弧菌快速检测技术。

基于核酸适配体的差减荧光法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum)

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鳗鲡、虹鳟和大菱鲆等多种水产动物,是水产养殖中的一种重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的前提和基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体之间有较强的亲和特异性,首次建立了一种基于核酸适配体的可定量检测鳗弧菌的差减荧光法。该方法对鳗弧菌有较好的特异性,对鳗弧菌的检测荧光值是其他菌(溶藻弧菌、哈维氏弧菌、铜绿假单胞菌、变形假单胞菌、嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和大肠杆菌)的4~11倍,对鳗弧菌的最低检测限为102CFU/mL,可用于102~108CFU/mL的范围内的定量检测。通过对不同盐度海水和鱼体组织样品进行加标回收检测,结果表明,回收率和相对标准偏差等指标均符合相应的标准,说明该检测方法可用于海水样品和水产动物组织中鳗弧菌的检测。

基于核酸适配体的胶体金比色法检测鳗弧菌

目的鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可引起鲑鱼、鳗鲡、鲈鱼和牙鲆等多种水产养殖动物的疾病,是水产养殖中的一种重要病原菌,对其进行快速检测是确保水产养殖安全和食品安全所必需的。方法本文利用鳗弧菌与其核酸适配体之间较强的亲和力,通过鳗弧菌夺取胶体金颗粒表面的核酸适配体,使胶体金溶液的吸光度发生变化,从而建立一种可定量检测鳗弧菌的方法。结果该方法对鳗弧菌的吸光度值显著高于对溶藻弧菌、铜绿假单胞菌、变形假单胞菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌等非目标菌的吸光度值(P<0.01),并在1~105CFU/ml的检测范围内呈现较好的线性关系。用该方法对不同盐度和鱼体组织样品进行加标回收检测,结果显示回收率和相对标准偏差等指标都符合相应检测标准。结论该检测方法对鳗弧菌有较好的特异性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。

基于核酸适配体Q5的石斑鱼虹彩病毒快速检测技术

石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus,SGIV)在不同鱼群之间迅速传播,其致死率极高,严重制约了我国海水石斑鱼(Epinephelus tauvina)养殖业健康可持续发展。为了及早发现和鉴定出病原,降低经济损失,促进渔业发展,开发方便快捷的石斑鱼虹彩病毒检测技术已迫在眉睫。本研究基于核酸适配体Q5,研发出一种核酸适配体Q5荧光分子探针(Aptamer Q5 based fluorescent molecular probe,Q5-AFMP),并且对Q5-AFMP检测感染石斑鱼虹彩病毒的特异性,以及Q5-AFMP在细胞水平和组织水平检测石斑鱼虹彩病毒感染的灵敏度进行分析。研究结果表明:Q5-AFMP能够在细胞水平和组织水平高特异性检测出石斑鱼虹彩病毒的感染,而且具有较高的灵敏度。因此Q5-AFMP能够用于石斑鱼虹彩病毒的快速检测和诊断。

核酸适配体筛选技术 快速检测重金属超标

传统方法对金属离子的检测，需要借助质谱等大型仪器设备，成本高昂、费时费力、难以普及。如何摆脱对大型仪器的依赖，实现对金属离子的快速实时检测，关键就是找寻能够特异性识别并结合特定金属离子的“亲和物质”。

基于酶辅助的比率型电化学适配体传感器用于前列腺特异性抗原检测

基于核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)辅助靶标循环策略,构建了比率型电化学适配体传感器,并用于前列腺特异性抗原(PSA)的检测。利用亚甲基蓝(MB)作为内置参考信号,当PSA存在时,发夹探针1(HP1)的适配体序列与PSA特异性结合,引起ExoⅢ的2次切割过程,从而实现2次循环扩增反应,导致电极上更多的MB标记的发夹探针3(MB-HP3)被切割;再加入二茂铁(Fc)标记的DNA链(Fc-DNA)与MB-HP3酶切后的片段进行杂交;最终,Fc的信号(I_(Fc))增加,而MB的信号(I_(MB))基本保持不变。在最佳条件下,I_(Fc)/I_(MB)与PSA浓度的对数值在0.001~100 ng/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.24 pg/mL。该传感器在临床实际样品检测中具有较好的应用前景。

核酸适配体对纤溶酶原Kringle 5抗血管生成功能的影响

目的研究核酸适配体K-a2ct与纤溶酶原Kringle 5(K5)的特异性结合对K5抑制血管内皮细胞增殖和迁移以及促进血管内皮细胞凋亡功能的影响。方法利用原核系统对重组K5蛋白进行克隆和表达,并采用亲和层析法对表达的K5蛋白进行分离纯化;使用等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)和酶联寡核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide adsorption assay,ELONA)对K-a2ct与K5的亲和特异性进行验证;采用CCK-8、细胞划痕试验观察K-a2ct对K5抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖和迁移功能的影响;采用激光共聚焦显微镜观察Hoechst 33342染色的HUVEC细胞凋亡形态,并采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测K-a2ct对K5促进HUVEC细胞凋亡功能的影响。结果重组蛋白K5在大肠杆菌中实现了高效表达,经亲和层析纯化的重组K5相对分子质量为12 kDa,浓度为0.32 mg·mL^(−1);ITC、ELONA结果显示K-a2ct对K5的亲和性强,且具有良好的选择性,具备典型核酸适配体的亲和特异性;CCK-8、细胞划痕试验结果表明,K-a2ct能够抑制K5的抗血管内皮细胞增殖和迁移的作用,且抑制程度与K-a2ct呈剂量依赖关系;激光共聚焦和流式细胞术结果表明,K-a2ct对K5促HUVEC细胞凋亡的功能有一定抑制作用,且主要影响K5作用的HUVEC细胞晚期凋亡,对早期凋亡影响不大。结论核酸适配体K-a2ct以高亲和力和特异性结合K5,并以剂量依赖性方式抑制K5的抗血管生成功能,在靶向调节K5在体内的浓度和功能以及促进血管新生方面具有很大潜力。

核酸适配体靶向药物的“导航仪”研究

靶向药物指的是在细胞分子水平上能够识别肿瘤组织,从而使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及其他正常细胞的智能型药物,因此靶向药物又称为'生物导弹'[1]。为了精准地定位肿瘤细胞,靶向药物上往往需要配备能够特定地识别肿瘤位点的'导航仪',而'导航仪'的研发很大程度上决定了靶向药物的研究进展[2]。核酸适配体（Aptamer）是一类通过体外筛选技术——配体指数级富集系统进化（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）筛选出来的,能够特异性识别目标物的寡核苷酸序列[3]。

引言

核酸适配体特指具有分子识别功能的短序列的单链核酸,也被称为＂化学抗体＂。它既有可与抗体相当的亲和力和特异性,又有明显优于抗体的特点：可通过化学合成制备,无需动物免疫,成本低;分子性质稳定,能可逆变性与复性,易储存运输;分子量小,易穿过细胞膜,免疫原性低,无明显的毒副作用;靶标范围广泛,包括金属离子、小分子、蛋白质、细胞和微生物等。

核

核酸适配体（Aptamer）是一类新型的识别分子，由一段单链核酸通过分子内碱基堆积、疏水作用、氢键和静电作用折叠形成独特的三维结构，从而与靶分子高亲和力、高特异性结合。

基于多孔框架及贵金属纳米材料高灵敏生物传感器的设计与应用研究

基于抗体或核酸适配体作为识别元件的生物传感器,可将样品中目标物与识别元件之间发生特异性识别反应产生的生物信号转换成与浓度相关的电信号或光信号,具有特异性强、所需仪器简单、操作方便和分析快速等优良特点,目前已广泛应用于临床诊断、环境分析等多个领域,可对疾病标记物、有毒有害物质以及生物分子进行分析检测.尽管此类与疾病标记物及毒品毒素相关的生物传感器可以实现特异性检测.