大米镉结合蛋白的分离纯化及纯度鉴定

采用石墨炉原子吸收光谱法(graphite furnace atomic absorption spectrometry,GFAAS)测定不同品种、不同加工精度大米及大米4种蛋白质中的镉含量。选用镉含量较高的大米为实验原料,采用Osborne分级法提取大米中的4种蛋白质(清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白),以及超滤、离子交换色谱从镉含量较高的大米蛋白中分离纯化出均一纯度的大米镉结合蛋白(rice Cd-binding protein,RCBP),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定RCBP的纯度及测定分子质量。结果表明:籼米中镉含量高于糯米及粳米;随着加工精度的增加,同种大米中的镉含量依次降低。4种大米蛋白中的镉含量分别为0.66、0.31、0.63、0.23μg/g,清蛋白中镉含量最高。超滤分离大米清蛋白(rice albumin,RA)得到大米超滤清蛋白(rice ultrafiltration albumin,RUA),离子交换色谱纯化RUA得到目标镉结合蛋白(组分c),SDS-PAGE鉴定组分c为单一条带,分子质量为14 k D。

大米镉结合蛋白的分离及理化特性

本实验选用一种镉含量较高的大米为原料,采用碱法提取大米蛋白(alkali-extractable protein,AP),依次用热变性和乙醇沉淀分离AP,制备大米镉结合蛋白(rice Cd-binding protein,RCBP),并分析了RCBP的紫外吸收特征、氨基酸组成、分子质量及二级结构。结果显示:AP、热变性蛋白(thermally denaturated protein,TP)和乙醇沉淀蛋白(ethanol-precipitated protein,EP)均在210 nm波长处有最大吸收峰,氨基酸组成类似;热变性去除了分子质量为94 k D的蛋白质,分子质量为5 094 k D的蛋白质含量减少,乙醇沉淀进一步减少了分子质量分别为50 k D和14 k D的蛋白质。AP的二级结构主要为α-螺旋和β-转角,有少量β-折叠;TP的二级结构只含有β-折叠和β-转角,且以β-折叠为主;EP的二级结构主要为β-折叠和β-转角,还含有少量α-螺旋和无规卷曲。表明热变性和乙醇沉淀使得AP中的镉结合蛋白得到分离,可以作为一种分离RCBP的方法。

大米镉结合蛋白的凝胶层析纯化及生化性质

目的研究大米镉结合蛋白(rice cadmum-binding protein,RCBP)的纯化及生化性质,探讨RCBP的形成机制。方法采用Sephedex G-75凝胶层析从乙醇沉淀的大米蛋白(Ethanol precipitation protein,EP)中纯化RCBP,SDS-PAGE鉴定RCBP的纯度及测定分子质量,氨基酸自动分析仪、FTIR分析RCBP的氨基酸组成及二级结构。结果凝胶层析纯化得到组分b(目标RCBP),组分b为纯度均一的RCBP,分子质量约为32 kDa。组分b中疏水性氨基酸占56.76%、芳香族氨基酸占19.41%,是一类富含疏水性氨基酸和芳香族氨基酸的镉结合蛋白。组分b中N-H相对于C=O以反式构型存在,二级结构只含有β-折叠和β-转角。结论镉通过疏水氨基酸或芳香族氨基酸的特征基团与大米蛋白结合形成RCBP。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术测定香菇中镉结合蛋白的方法研究

采用高效液相色谱(HPLC)和电感耦合等离子体质谱(ICP﹣MS)联用技术建立了香菇中镉结合蛋白的分析方法。采用SE﹣HPLC提取纯化样品,HPLC﹣ICP﹣MS测定香菇中镉结合蛋白,实验结果表明这一方法准确性好、精密度高,样品前处理方法简便,适用于香菇中镉结合蛋白的测定。

总镉和非蛋白结合镉致大鼠肾脂质过氧化作用的研究

目的 探讨非蛋白结合镉、总镉致肾脂质过氧化的作用。方法 利用染镉动物模型和凝胶渗透层析技术 ,观察非蛋白结合镉、总镉在肾脂质过氧化时的作用。结果 镉染毒组谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐下降 ,谷胱甘肽 (GSH)、丙二醛 (MDA)含量逐渐增加 ;总镉、非蛋白结合镉与肾GSH之间存在着明显的正相关关系 (r分别为 0 898、0 751 ) ,与肾SOD之间存在着明显的负相关关系 (r分别为 - 0 896、- 0 767) ,此外总镉还与肾GSH Px存在着明显的负相关关系 (r=- 0 756)。结论 总镉、非蛋白结合镉均能引起肾脂质过氧化 ,但总镉比非蛋白结合镉可能具有更重要的意义。

用HpLC反相柱层析纯化玉米根镉结合蛋白

本研究建立了纯化玉米根镉结合蛋白的有效方法.其步骤为用加热处理由CdCl_2诱导形成的玉米根的粗提物,经过离子交换柱层析后的Cd结合复合物,连续用HpLC反相柱层析,获得了纯的蛋白.该蛋白质的分子量为3200D;半胱氨酸含量为29.6％;每个蛋白质分子结合大约3个Cd原子;Cd与半胱氨酸的比值为1:2.3.根据其特性说明它可能是植物类金属硫蛋白.

非蛋白结合镉、总镉与肾脂质过氧化的关系

目的 探讨非蛋白结合镉、总镉与肾脂质过氧化的关系。方法 利用染镉动物和凝胶渗透层析技术 ,观察非蛋白结合镉、总镉在肾脂质过氧化时的作用。结果 总镉、非蛋白结合镉与肾GSH之间呈明显的正相关 ,而与肾SOD之间呈明显的负相关。此外总镉还与肾GSH -Px有明显的负相关关系。结论 总镉、非蛋白结合镉均能引起肾脂质过氧化 ,但总镉比非蛋白结合镉可能具有更重要的意义。

金属硫蛋白的生物学效应

由于金属硫蛋白的结构特点及多种生物学功能，目前已引起广泛的研究及重视。本文从其结构特征、代谢、诱导因素及生物学效应加以综述。