人血管抑制因子的原核表达、纯化及活性研究

目的 :利用大肠杆菌表达系统表达人血管抑制因子 ,并利用镍金属螯合层析法进行纯化 ,探讨其抑制血管内皮细胞增殖的活性。方法 :采用RT PCR技术从人肝脏组织中获取人血管抑制因子的cDNA ,将其克隆至原核表达载体pQE30中进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS PAGE分析 ,并利用镍金属螯合层析法进行纯化。3H TdR法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果 :利用pQE30表达载体表达的含 6个组氨酸尾的vasostatin蛋白 ,在SDS PAGE上表现出一条约 2 1kD的阳性条带 ,经镍金属螯合层析纯化后的蛋白经肽指纹图谱分析鉴定为目的蛋白 ,在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞的增殖。结论 :人血管抑制因子可在大肠杆菌中以包涵体形式高水平表达 ,并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性。