超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬汁类及其饮料中22种镰刀菌属毒素

目的建立果蔬汁类及其饮料中22种镰刀菌属毒素的超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测的分析方法。方法样品经水和乙腈提取,QuEChERS净化,氮吹至近干,1mL80%乙腈水(体积分数)复溶,采用WatersACQUITYUPLCCSH Phenyl-Hexyl反相色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)梯度分离,以乙腈和0.1%甲酸水(2 mmol/L甲酸铵)为流动相进行梯度洗脱,UPLC-MS/MS在正、负离子模式下多反应监测,基质配制外标法定量。结果22种镰刀菌属毒素在线性范围内,线性关系良好,决定系数(R2)均大于等于0.985,回收率在60.1%~119.7%之间,相对标准偏差在2.64%~15.53%之间。结论该分析方法具有前处理方式简单、分析时间短、灵敏度好、准确度高、杂质干扰小等特点,可以用于果蔬汁类及其饮料中22种镰刀菌属毒素的检测。

拟石莲花属‘碧桃’腐烂病病原菌的鉴定及其主要致病物质的测定

采用组织分离法和单孢子纯化法,从拟石莲花属多肉植物品种‘碧桃’(Echeveria cv.‘Peach Pride’)疑似腐烂病的叶片组织获得病原菌,通过形态学和分子序列特征的鉴定以及致病性测定,明确病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。测定尖孢镰刀菌的主要致病物质,发现该病原菌具有较强的细胞壁降解酶活性,并具有一定的产毒素(镰刀菌酸)能力,说明细胞壁降解酶类和毒素是该病原菌侵入、定殖和致病的主要因素。

宁夏镰刀菌属(Fusarium Link)真菌的研究

[目的]鉴定宁夏镰刀菌属真菌。[方法]采用实地考察、采集和分离培养鉴定的方法,研究了宁夏镰刀菌属真菌的种类、分布及其引起的植物病害。[结果]共鉴定出镰刀菌属真菌9种,分别为燕麦镰刀菌、同色镰刀菌、黄色镰刀菌、禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、雪腐镰刀菌、尖孢镰刀菌、茄类镰刀菌以及未定名镰刀菌属1种,它们分布于宁夏全区各地,引起30多种植物病害。[结论]宁夏镰刀菌属真菌种类较多,分布无地域特征,均为植物病原菌。

枯草芽孢杆菌OLR3-9对拟石莲属多肉植物黑腐病的生防效果

由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的黑腐病是拟石莲属(Echeveria)多肉植物生产和家庭种植中的重要病害.为控制该病害,研究从长雄野生稻(Oryza longistaminata)根部分离并鉴定出一株内生枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)OLR3-9菌株.通过体外抑菌活性、温室防效和定殖情况的测定,结果表明,OLR3-9菌株对2种拟石莲属多肉植物品种‘血色罗密欧’(E.agavoides)和‘静夜’(E.derenbergii)的黑腐病具有较好的生物防治效果.该菌株对‘血色罗密欧’和‘静夜’黑腐病的病菌菌丝抑制率分别为63.45%和66.60%,菌体抑制率分别达到78.74%和76.45%,在盆栽条件下的防治效果分别为65.55%和73.13%.与该生防菌拮抗互作后,2种拟石莲属多肉植物黑腐病菌菌丝畸形,产孢量减少,并能在2种拟石莲属多肉植物的根、茎和叶部组织稳定定殖,阻止黑腐病病菌的侵入与蔓延.因此,枯草芽孢杆菌OLR3-9菌株对拟石莲属多肉植物黑腐病具有良好防效,是一株具有良好开发潜力的生防菌.

烟草镰刀菌根腐病病原生物学特性及其优势种的代谢表型特征

为明确烟草镰刀菌根腐病(tobacco Fusarium root rot)病原生物学特性和代谢表型特征,采用菌丝生长速率法和活体接种法分别测定了3种烟草镰刀菌根腐病病原[腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、木贼镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)]在不同温度、光照条件下的生长速率和致病力,同时采用Biolog代谢表型技术测定其优势种腐皮镰刀菌的碳氮源、渗透压和pH值下的代谢表型。结果表明,3种病原菌菌丝生长适宜温度均为25~30℃,木贼镰刀菌M417菌丝生长速率最快,可达10.71 mm/d;腐皮镰刀菌F421产孢量最高,可达9.15×10^(6)个/cm^(2);连续黑暗条件均有利于菌丝生长和产孢。尖孢镰刀菌J419和腐皮镰刀菌F503致病力较强,7 d时的病斑面积分别为1.05 cm^(2)和1.35 cm^(2)。代谢表型结果表明,腐皮镰刀菌碳氮源代谢能力强,可高效代谢丙三醇、D-甘露醇、D-松二糖等54种碳源,以及L-鸟氨酸a-氨基-N-戊酸、L-鸟氨酸等大部分氮源;其pH值适应范围为3.5~8.5,最适pH值为6,表现出强脱羧酶活性和弱脱氨酶活性;在1%~5.5%NaCl、5%~10%乙二醇、1%甲酸钠、2%~3%尿素、7%~9%乳酸钠、10~50 mmol/L硫酸铵(pH值=8)、10~100 mmol/L硝酸钠、10~40 mmol/L亚硝酸钠等环境下均可正常生长。研究结果揭示了3种镰刀菌属根腐病病原的生物学特性,发现优势种腐皮镰刀菌的营养需求广、具有较强的渗透压和pH值环境适应能力,为镰刀菌根腐病灾变规律的研究提供了参考。

镰刀菌真菌毒素的分类与研究

镰刀菌是甘蔗梢腐病的病原菌,它所产生的真菌毒素导致的病害,是当今世界上的一大生产防治难题。其中,玉米赤霉烯酮(Zearalenone),单端孢霉烯族毒素(Trichothecenes)、伏马菌素(Fumonisin)是当前研究中最受关注、影响极为广泛的三种镰刀菌毒素。本文阐述了甘蔗梢腐病病原镰刀菌所产毒素的主要种类、危害及相关研究,并探讨了未来可能的研究方向,为甘蔗真菌性病害研究提供相应的参考与借鉴。

解淀粉芽孢杆菌OMR1-7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果

【目的】明确解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)对拟石莲花属(Echeveria)多肉植物黑腐病病原菌——尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的生防效果。【方法】从小粒野生稻(Oryza minuta)根部分离和鉴定了1株内生解淀粉芽孢杆菌OMR1-7菌株,测定其对拟石莲花属多肉植物品种血色罗密欧黑腐病菌F.oxysporum KMEARM-2菌株和静夜黑腐病菌F.oxysporum KMJY6菌株的拮抗效果、产铁载体和生物膜能力、定殖能力以及温室防效。【结果】OMR1-7菌株对2种黑腐病菌菌丝抑制率分别为57.15%和74.29%,菌体抑制率分别为84.82%和86.15%。该菌株可造成2种黑腐病菌的侵染结构畸形,产孢量减少。该菌株产铁载体相对量为80.98%,具有较强的铁元素竞争能力,且能够产生生物膜,在血色罗密欧和静夜植株的根、茎、叶内稳定定殖,预防黑腐病菌的侵入和蔓延。OMR1-7菌株对血色罗密欧和静夜黑腐病具有良好的生防效果,温室防效分别为80.08%和78.89%。【结论】研究结果将为拟石莲花属多肉植物黑腐病的生物防治提供微生物菌种资源,为相关生防菌剂及制剂研发提供参考。

3株非致病性镰刀菌Fusarium oxysporum菌株对番茄枯萎病的生物防治效果

对3株非致病镰刀菌Fusariumoxysporum菌株IF 23、251/2和MSA35对于番茄枯萎病的生物防治效果进行了初步研究。温室盆栽试验表明:3株菌株对番茄枯萎病均有一定的抑制作用,其中105CFU/g浓度的IF 23菌株的防治效果最好;基质灭菌对于番茄枯萎病也有一定的抑制作用。

镰刀菌属真菌毒素的毒性研究进展

镰刀属真菌毒素是非常重要的一类真菌毒素,其种类繁多,污染率高,性质差异大,毒性也较强。本综述总结了较为常见的28种镰刀属真菌毒素(T-2毒素、HT-2毒素、蛇形毒素、新茄病镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、镰刀菌烯酮、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B_1、B_2、B_3、串珠镰刀菌素、白僵菌素以及恩镰孢菌素等)近40年来体内、体外毒性研究资料,主要涵盖急性毒性、慢性毒性的致癌性、生长生殖毒性、致突变和基因毒性、免疫毒性、神经毒性、细胞毒性及血液毒性。同时对伏马毒素B_1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其他几种常见毒素间的协同毒性作用进行概述。体内毒性实验研究中主要采用口服和腹腔注射的给药方式;而最常用的实验动物为鸡、小鼠、大鼠和猪。体外毒性实验研究用细胞为:鼠伤寒沙门氏菌菌株、人类巨核红细胞祖细胞以及动物肾脏上皮细胞等。对此类真菌毒素毒性的总结,可进一步加深对毒素的认识,并为食品、饲料及中药安全性方面相关的法律法规制订提供重要依据。

生物质炭和石灰氮削弱温室土壤镰刀菌与真菌群落关联度

【目的】了解不同农艺措施对温室土壤真菌多样性及土壤真菌与镰刀菌菌群的相互关系的影响,探寻设施农业土壤质量提升的绿色改良措施。【方法】通过培养试验研究了单施或混合施入生物质炭和石灰氮对土壤理化、真菌群落结构和镰刀菌属丰度差异及关系。【结果】与对照相比,单施生物质炭显著提高了土壤pH值和速效钾(P<0.05);单施石灰氮有利于土壤pH值、铵态氮和硝态氮的提高(P<0.05);生物质炭和石灰氮混合施入显著提高土壤pH值、电导率、铵态氮、硝态氮量和速效钾量(P<0.05)。与对照相比,单施生物质炭或生物质炭与石灰氮的混合施入均显著降低土壤真菌群落香农多样性指数(P<0.05)。各处理真菌群落优势菌门相对丰度差异不显著。生物质炭与石灰氮混合施入后土壤镰刀菌属的相对丰度显著低于对照(P<0.05)。土壤镰刀菌属真菌多样性与土壤电导率、铵态氮量、真菌群落香农多样性指数均呈显著正相关(P<0.05)。基于网络分析结果表明,与对照相比,单施或混施生物质炭和石灰氮均能降低镰刀菌群与真菌菌群关系的复杂性。【结论】生物质炭与石灰氮的混合施入增强了镰刀菌菌群与真菌菌群的竞争关系,是一种有利于缓解温室土壤病害的较好措施。

河南省花生果腐病病原菌的分离及鉴定

花生果腐病又称烂果病,是河南省乃至全国花生主产区日趋严重的重要病害。为明确河南省花生果腐病的病原菌,采用组织分离法对2019和2020年采自河南省各花生产区的92份花生果腐病样进行了菌株分离。结合形态学和分子生物学鉴定方法并依据柯赫氏法则进行验证,确定了引起河南省花生果腐病的病原菌包括镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium. oxysporum)、腐皮镰刀菌(F. solani)、层出镰刀菌(F. proliferatum)和厚垣镰刀菌(F. chlamydosporum)、曲霉属黑曲霉菌(Aspergillus niger)和黄曲霉菌(A. flavus)、可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)、齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)以及侵管新赤壳菌(Neocosmospora vasinfecta)共计5属9种,其中以镰刀菌属的尖孢和腐皮镰刀菌为优势种。本研究进一步确定了花生果腐病是由多种病原菌复合侵染所致,研究结果可为花生果腐病的有效防治提供重要依据。

中国沿海地区镰刀菌属口岸截获时空分布格局分析

生物入侵形势愈加严峻,口岸检疫作为维护生物安全的第一线,分析口岸截获时空格局对于物种入侵防控具有重要意义。从口岸点和市域单元两个尺度结合时空局部异常值分析和空间自相关分析方法,揭示2009—2018年我国沿海地区镰刀菌属入侵截获时空分布格局,并引入地理探测器模型探寻影响其分布格局的因素。结果表明:(1)镰刀菌属截获口岸数与截获频次在时间和空间上大致呈现先增后减趋势,在时空异常值分析中以长三角、珠三角一带口岸的强时空聚类与多模式状态为主。(2)镰刀菌属市域入侵截获具有显著的空间自相关性(P<0.05),空间集聚特征先增强后减弱,局部空间关联结构中空间分异性逐渐减小,高-高值区域的集聚规律明显,且逐渐集中在江苏省境内。(3)镰刀菌属市域入侵截获空间格局的最主要影响因素是进口商品总额,其次是市域内口岸数、入境人数和邮政业务总量,且双因子间的交互作用对其分布格局均具有显著的增强效果。综上,我国沿海地区镰刀菌属入侵截获受进口贸易影响具有明显的时空分异格局特征。

青海省蕨麻根腐病调查及病原真菌分离鉴定

蕨麻是我国青藏高原特有的植物资源,近年来根腐病对蕨麻生产构成了一定威胁。2019-2021年6~7月,分别对青海西宁市、海北藏族自治州和黄南藏族自治州等地成株期蕨麻根腐病进行调查,对具有典型症状特征的病样,采用组织分离法和单孢分离法获得病原真菌,以柯赫氏法则对其致病性进行验证;通过形态学和分子生物学等方法对蕨麻根腐病病原真菌进行鉴定。结果表明:蕨麻根腐病具有典型症状特征(黑斑、褐变、软化、腐烂、附着菌丝),病害多发生于蕨麻块根膨大期及收获期;蕨麻根腐病病情分级标准可分为0-5个等级;不同种植年限、不同地区蕨麻根腐病病情存在一定的差异,株发病率和病情指数与种植年限均呈正相关;分离鉴定发现病原真菌均为镰刀菌属(Fusarium),包含锐顶镰刀菌(F.acuminatum)、三线镰刀菌(F.tricinctum)、变红镰刀菌(F.incarnatum)、燕麦镰刀菌(F.avenaceum)、木贼镰刀菌(F.equiseti)和念珠镰刀菌(F.torulosum)。该研究为蕨麻根腐病的诊断及防控提供了基础理论依据。

一株呕吐毒素高效降解菌的筛选鉴定和降解特性表征

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是一种广泛存在于自然界中的生物毒素污染物.本文利用富集培养的方法和微生物纯化分离技术,通过添加辅助因子吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone disodium salt,PQQ),从黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫的排泄物中分离得到1株可高效降解DON的菌株.该菌在30℃,pH 7.0的条件下,72 h内对浓度为50μg·mL^(−1)的DON降解率高达100%,降解产物为3-keto-DON.通过形态学鉴定和基于16S rDNA序列构建的系统发育树分析,该菌的分类地位归属为德沃斯氏菌属(Devosia sp.).对该菌在不同温度、pH、PQQ浓度和不同脱毒方式下进行降解性质表征,发现该菌静息细胞在好氧或者静置,30℃、pH 7.0—9.0、PQQ浓度为0.01—10μmol·L^(−1)的条件下具有良好的DON降解能力.为了确定该菌降解的活性物质,取未处理、加热处理和SDS处理的菌悬液和菌体细胞裂解上清液分别对DON进行降解,结果显示该菌利用自身产生的酶对DON进行降解.

中性粒细胞减少儿童的弥散性镰刀菌属感染2例

Disseminated fusariosis in children is a rare and serious fungal infection, that occurs especially in neutropenic immunosuppressed patients, treated for malignant hemopathy, or bone marrow transplant recipient. Treatment is difficult and mortality is estimated between 50 and 70%in adult patients. Case report 1. -A ten-year-old boy, treated for an acute lymphoblastic leukemia in second relapse, presented a disseminated fusarium spp infection, that occurred during neutropenia. He died due to fusariosis infection in spite of amphotericin B treatment. Case report 2. -A ten-year-old neutropenic girl, treated for an acute myeld leukemia, presented disseminated fusariosis, uncontrolled by amphotericin B. Recovery was observed after voriconazole introduction and resolution of neutropenia. Ten months later, she presented a leukemia’s relapse, treated by new intensive chemotherapy with secondary prophylaxis by voriconazole, without fusariosis’s recurrence. Conclusion. -Voriconazole, a new triazole agent, seems to be an alternative antifungal agent to amphotericin B for disseminated fusarium infection, either at the acute phase or for secondary prophylaxis.

韩国动物饲料中出现镰刀菌（霉）属的白僵菌素

研究的目的是确定镰刀菌毒素白僵菌在动物饲料中出现和污染的程度。2006-2007年，对整个韩国的143个饲料化合物样本和52个饲料原料样本采用高效液相色谱法进行白僵菌素水平分析。

新疆阿勒泰地区大豆镰刀菌根腐病病原鉴定及致病性测定

通过对2007和2008连续两年自新疆阿勒泰地区采集分离到的大量大豆镰刀菌根腐病分离物进行的种的鉴定,结果表明分离所得253个镰刀菌属菌株分属于5个种和1个变种,分别为尖孢镰刀菌、茄腐镰刀菌、禾谷镰刀菌、茄腐镰刀菌蓝色变种、燕麦镰刀菌和节状镰刀菌。各个种或变种所占的菌株比例分别为46.6%、24.1%、11.8%、9.8%、7.5%和0.8%。以黑河5号大豆品种为接种材料进行的致病性测定结果显示除节状镰刀菌无致病性外,其余4个种和1个变种对大豆有不同程度的致病性,其中尖孢镰刀菌为大豆镰刀菌根腐病病原菌中出现频率最大且致病性最强的优势致病种,茄腐镰刀菌次之。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响

目的 :探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响。方法 :以动物实验、形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术方法研究了不同剂量DON对小鼠胸腺细胞凋亡和增殖的影响及其量效关系。结果 :FCM检测结果表明 ,不同浓度DON均能诱导并促进体内小鼠胸腺细胞凋亡 ,DON 0 5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg组胸腺细胞的平均凋亡百分率分别为 6 35 %± 1 30 %、8 30 %± 1 33%、8 89%± 2 15 %、10 70 %± 0 6 2 %和 12 5 4 %± 2 0 8% ,在 0 5mg/kg到 8mg/kg的浓度范围内 ,随DON浓度的增高 ,胸腺细胞的凋亡率也相应增高 ,两者呈显著正相关 (r=0 788,P <0 0 1)。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示 ,大剂量 (8mg/kg和 4mg/kg)DON处理组小鼠胸腺细胞出现了凋亡特有的梯状条带。超微结构观察可见DON处理组小鼠胸腺部分细胞出现核染色质固缩凝聚、胞芽等细胞凋亡的超微结构特征表现。大剂量 (8mg/kg和 4mg/kg)DON可明显降低小鼠胸腺细胞增殖活性 (用PI表示 ,P <0 0 1)。结论 :脱氧雪腐镰刀菌烯醇可剂量依赖地诱导并促进小鼠胸腺细胞的凋亡和抑制其增殖。

黄绿木霉诱变菌株对大豆根腐病镰刀菌的拮抗

以黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)为出发菌株,孢子经紫外线照射,亚硝酸及氯化锂复合处理后获得一株酶活增强的突变株。通过对峙培养与发酵液处理病原菌研究了该诱变株对大豆根腐病几种镰刀菌(Fusagium spp.)的拮抗作用。诱变株经传代30代后,其产酶活性仍保持增强,生防能力有所提高。拮抗试验结果明确了黄绿木霉诱变株对镰刀菌的拮抗机理以生存竞争和接触后对病原菌菌丝破坏的溶菌作用为主,且诱变株产孢速度快,分生孢子梗空间竞争优势强于原始菌株。酶活测定结果表明,诱变株的滤纸酶活提高85.7%,CMC—Na酶活提高26.7%,β- 葡萄糖苷酶活提高130.3%。