粪肠球菌噬菌体IME-EF3的分离及其治疗优势的发掘

目的利用医院污水分离到临床耐药粪肠球菌的噬菌体IME-EF3，分析其生物学特性，发掘其治疗特性，为噬菌体制剂个体化治疗耐药粪肠球菌感染及利用噬菌体消除耐药粪肠球菌污染提供应用基础。方法利用医院污水,经污水富集法分离噬菌体,以粪肠球菌临床耐药分离株为宿主菌。经双层平板法确定噬菌斑形态及大小，纯化后测定其宿主谱范围、最佳感染复数（MOI）、一步生长曲线，并检测温度、紫外线照射对IME-EF3活性的影响。取适量噬菌体液，利用蛋白酶K俗DS法提取其基因组,对其进行酶切处理．确定其遗传物质的组成及形态。用酶切法进行了随机克隆，测序结果进行在线Blastx，并构建系统进化树分析与已知噬菌体的进化关系。结果成功分离到一株噬菌体斑．边缘清晰，斑体透明的裂解性粪肠球菌噬菌体IME-EF3热稳定性较好．对紫外线敏感。一步生长曲线显示IME-EF3的潜伏期为10～20min，呈爆发性增长，裂解量为75。其遗传物质为双链DNA,通过Blastx结果初步确定IME-EF3为尾病毒目，长尾噬菌体科。通过系统进化树可看出IME—EF3与其他噬菌体的亲缘关系较远。结论从医院废水成功分离到裂解性噬菌体IME-EF3，其爆发力强、潜伏期短、高裂解性、较好的热稳定性、与已知噬菌体远缘性等一系列的优良特点，为其噬菌体个体化治疗及与药物的联合使用提供了依据。

一株短乳杆菌烈性噬菌体的分离鉴定与生化特性研究

短乳杆菌是应用于食品发酵中的重要菌株,噬菌体污染是导致发酵失败的主要因素之一,对食品发酵生产有着巨大的危害。从发酵泡菜水中分离纯化短乳杆菌烈性噬菌体,研究其生物学性质。利用双层平板法分离和纯化噬菌体,通过负染色电镜形态和核酸类型鉴定。采用核酸内切酶处理后电泳鉴定核酸类型、基因组大小和包装机制。通过双层平板法测定噬菌体效价,实验测定最佳感染复数、一步生长曲线、温度和pH等物理化学因素及常见消毒剂对其存活的影响。分离纯化到1株烈性噬菌体,命名为φB23。其由多面体结构的头部和弯曲的长尾构成,φB23基因组为双链DNA,大小约为52.4 kb,包装机制为黏末端连接。最佳感染复数为0.001,潜伏期为30 min,裂解期为90 min,裂解量为(103.2±9.0)pfu/cell。常用的巴氏灭菌温度为63℃和72℃,分别处理10 min和5 min能较好地灭活;在pH 3.0~8.0保持稳定,75%乙醇处理10 min能使其丧失活性,500 mg/L次氯酸钠处理5 min能完全灭活。φB23鉴定为尾噬菌体目(Caudovirales)长尾噬菌体科(Siphoviridae)的噬菌体,表征并分析了φB23的生化特性。实验结果为进一步阐明短乳杆菌噬菌体侵染机制和制定有效的噬菌体防治方法提供了基础。