山羊重组促卵泡素长效类似物基因在毕赤酵母中表达

为了获得长效FSH制剂,利用重叠PCR技术将山羊FSH的α,β亚单位,通过hCGβ亚单位羧基末端延长肽(CTP)基因序列的连接,构建成单链长效类似物基因FSHβ-CTP-α。将其克隆至表达载体pPIC9K,重组载体线性化处理后电转化至毕赤酵母GS115中,经判型和G418筛选后获得高拷贝菌株His+Mut+。经甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析表明:重组FSHβ-CTP-α的转化子可以正确有效地表达目的蛋白,分子量约为29kD。放射免疫分析法(RIA)测定表达上清,高拷贝转化子的平均表达量为91.849mIU/mL,显著高于低拷贝转化子的平均37.419mIU/mL的表达量,为FSH的结构研究和长效FSH制剂的生产奠定了基础。

山羊FSH及其长效类似物基因在小鼠乳腺中的暂态表达

应用山羊促卵泡素长效类似物基因构建其乳腺暂态表达载体pcDNAFSH-βCTP、pcDNAFSH-βCTP-α及构建报告基因pcDNAEGFP,测序后通过脂质体转染至怀孕末期的小鼠乳腺组织。结果表明,构建的乳腺暂态表达载体在小鼠乳腺中获得了表达,表达量分别为pcDNAFSHα,β(7.933±2.074)IU/L,pcDNAFSHα,-βCTP(9.311±2.995)IU/L,pcDNAFSH-βCTP-α(11.059±4.107)IU/L。