ICP-MS测定注射用重组人凝血因子Ⅷ-Fc融合蛋白中7个元素的迁移量

目的:建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定注射用重组人凝血因子Ⅷ-Fc融合蛋白中钴(Co)、砷(As)、溴(Br)、镉(Cd)、锑(Sb)、钡(Ba)、铅(Pb)的迁移量,并对相容性长期放置的样品进行定量分析。方法:样品加纯化水0.75 mL,倒置复溶4 h后,用纯化水定容至5 mL,采用标准加入法测定待测溶液中7个元素的含量。ICP-MS工作参数:射频功率为1550 W,采样深度为10.0 mm,载气(氩气)流量为0.50 L·min^(-1),雾化器泵速为0.30 r·s^(-1),雾化室温度为2℃,稀释气流量为0.74 L·min^(-1),重复取样次数3次,分析模式为全定量。结果:各元素在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好,元素加标回收率在92.0%~101.8%,应用于各加速放置点样品的检测时,除Br元素含量略有增长(增长迁移量分别为43.2、68.7、66.8 ng·mL^(-1))外,其余6个元素含量均远小于规定限度。结论:经方法学验证,本方法结果可靠,可用于注射用重组人凝血因子Ⅷ-Fc融合蛋白样品中7个元素的迁移量测定。

A型血友病替代治疗药物凝血因子Ⅷ的临床研究进展

A型血友病(hemophilia A,HA)是一种罕见的X染色体连锁隐性遗传性出血性疾病,因血液中凝血因子Ⅷ(factor Ⅷ,FⅧ)缺乏或者功能障碍所致。其发病率低,治疗费用高,且目前暂无有效的根治方法,按需替代治疗仍然是我国治疗HA最有效的方式。但目前HA患者需要终身用药,现有的药物半衰期短、注射频次高,易产生FⅧ抑制物,且患者的生存质量差。针对这种未被满足的临床需求,该文主要综述血源性人FⅧ、重组人FⅧ及长效重组人FⅧ-Fc融合蛋白3种替代治疗药物的临床研究进展,为后期药物研发及临床治疗提供新的思路和依据。

长效重组人凝血因子Ⅷ细胞培养条件的优化

优化国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,为后续研究提供实验依据。采用分批补料培养方式,将长效重组人凝血因子Ⅷ细胞接种至1 L发酵罐中进行培养,分析在不同补料培养基浓度(2%Cell Boost 2,3%Cell Boost 2,5%Cell Boost 2,补料培养基为Cell Boost 2和细胞培养基按照W/V比配制的培养基)、不同细胞培养pH(pH=6.9、pH=7.0、pH=7.1)、不同培养基(CDM4 PERMAb、CD11V、Veros),培养基补加Cu^(2+)的情况下,细胞密度、细胞活率、细胞代谢以及发酵液中蛋白活性的变化,从而确定最优培养条件。最佳培养条件:补料浓度2%Cell Boost 2,细胞培养pH 7.0,培养基为添加40μmol/L Cu^(2+)的CD11V,整个细胞培养周期17 d,细胞培养液收获体积是初始培养体积的2.6倍;细胞密度峰值达2375×10^(4)cells/mL,在收获时活率高于90%;在蛋白表达最高时,乳酸仅为0.3 mmol/L,蛋白活性高达2443.94 IU/mL,是同等条件下CDM4 PERMAb培养基(1182.17 IU/mL)的2.1倍。该研究优化了国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,提高了目的蛋白的活性,延长了整个培养周期,提升了目的蛋白的产量,对国产长效重组人凝血因子Ⅷ的产业化具有促进意义。

长效重组人凝血因子Ⅷ研究现状及进展

重组凝血因子Ⅷ(rFⅧ)替代疗法是目前临床上治疗A型血友病最为有效的方法。过去十几年的临床试验已经验证了rFⅧ替代疗法的安全性和有效性,但由于FⅧ的半衰期较短,患者需要隔天或者每周3次进行静脉注射治疗。长期频繁静脉注射治疗不仅给患者带来肉体上的痛苦,还容易产生FⅧ抗体,严重影响治疗效果。以下就目前长效型重组凝血因子Ⅷ的研究进展及存在的主要问题进行了综述。

重组人凝血因子Ⅷ结构改造的研究进展

血源凝血因子Ⅷ是血液凝固过程中关键因子,为治疗甲型血友病的特效药,但存在价格昂贵、给药频率高和潜在的病毒污染风险等缺点;且由于血液制品来源有限,凝血因子Ⅷ类药物在国内供不应求。随着基因工程技术的发展,药用重组人凝血因子Ⅷ得以实现,在此基础上大量针对重组人凝血因子Ⅷ的结构改造研究不断涌现,部分产品已投放市场。文章主要对哺乳动物细胞表达的各类改构重组人凝血因子Ⅷ的原理和研究进展进行综述。由于存在提高蛋白质稳定性及延长药物半衰期等优势,结构改造将是重组人凝血因子Ⅷ类药物未来的技术发展方向。