海南长春花小叶病植原体16S rDNA基因片段的比较分析

从海南儋州地区的长春花上采集了表现小叶症状,疑似植原体感染的病样,利用植原体16S rDNA通用引物对Rl6mF2/Rl6mR1,应用PCR技术从该样品的总DNA提取物中扩增到预期大小的特异片段(约1.4kb),该片段的序列分析及系统关系树构建的结果表明,该片段与16Sr I组中的植原体同源率均达到99%以上,而与其它组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于96%,与16SrⅠ组植原体缬草黄化、翠菊黄化、桑萎缩和玉米丛矮等在同一条进化枝上。故初步认为引起海南长春花小叶病的植原体应归属于16Sr I组,将其暂命名为长春花小叶植原体海南株系(Periwinkle little leaf phytopla smastrain Hainan,PLL-Hn)。

长春花小叶病植原体质粒DNA克隆及其分子特征

为了测定长春花小叶病植原体质粒及分析其分子特征,扩增长春花小叶病植原体质粒片段,然后进行反向扩增,拼接得到质粒全序列,且预测质粒编码蛋白的跨膜区、亚细胞定位等。结果表明,获得的质粒全长为4 102 bp,A+T含量为75.18%,编码5个蛋白,且将该质粒命名为pPLLHn-1。其中ORF的2、3、4编码蛋白分别含有2、1、2个跨膜区,ORF3的信号肽(Singnal peptide,SP)的信号值为0.948,ORF3编码的氨基酸序列与洋葱黄化植原体质粒EcOYW1参与质粒拷贝数控制的蛋白(Copy number control protein)具有97%的同源性。此结果说明长春花小叶病植原体质粒pPLLHn-1编码的5个蛋白中,除与质粒复制有关的RepA和SSB外,另外3个均为跨膜蛋白,根据分泌蛋白的特征分析初步推断ORF3蛋白为分泌蛋白。