黄芪多糖在长期骨髓细胞培养中支持体外造血的作用

目的:研究黄芪多糖(APS)在长期骨髓细胞培养中是否能刺激或支持体外造血作用及刺激基质细胞的增殖.方法:采用长期骨髓细胞培养法,研究APS对骨髓细胞的影响.结果:在APS作用下,培养体系中的非贴壁细胞数在5～8周增加19～168倍.第6周时,在APS处理的培养体系中,97% 非贴壁细胞为成熟中性粒细胞,而对照仅为8%.实验结束即第17周时,APS使贴壁细胞数从每瓶2.2×105增加到4.1×105.结论:黄芪多糖在长期培养骨髓细胞(LTBMC)中可支持体外造血作用.

长期骨髓细胞培养净化白血病细胞与临床疗效关系的研究

应用Dexter长期培养体系进行了17急性非淋巴细胞白血病例(ANLL)骨髓的长期培养,按照培养4周后基质细胞CFU-ANLL和CFU-GM的生长情况,将其分为3型:Ⅰ型(11/17例)为培养净化有效型;Ⅱ型(3/17例)为部分净化有效或需4周以上培养观察其净化效果的类型;Ⅲ型基质细胞缺陷。体外培养中各种类型细胞均同步死亡。Ⅰ型病人化疗有效率较Ⅱ、Ⅲ型高。该结果提示临床应用Dexter体系净化进行自体骨髓移植(ABMT)时,应按其体外生长类型选择病人。比分类与所处临床状态无关,其净化作用可能与临床化疗之间无选择性交叉抗肿瘤关系。

干扰素α联合体外长期液体培养净化慢性髓细胞白血病骨髓的实验研究

用干扰素α(IFN-α)联合体外长期骨髓液体培养(LTBMC)净化16例慢性期Ph^+慢性髓细胞白血病(CML)的骨髓,研究结果为:IFN-α1000IU/ml和2×10~6MNC/ml对LTBMC中CML和正常骨髓的非贴壁层细胞数无明显影响,对CML培养3周后和正常骨髓培养第2—3周的非贴壁层CFU-GM有抑制作用,对CML和正常骨髓在LTBMC中的基质细胞层形成均有一定影响。在有完整染色体资料的13例患者中,加IFN-α组培养4周后有8例Ph^+染色体完全消失,2例Ph^+<50％,1例Ph^60％,2例无变化,而对照组中只有5例完全消失,3例Ph^+<50％,1例Ph^+65％,4例无变化,而且加IFN-α组Ph染色体的消失或减少时间较对照组提前1周。结论:IFN-α1000U/ml与LTBMC联合对CML骨髓的净化有协同效应,两者联合可用于临床净化慢性期CML骨髓。

长期培养的急性粒细胞白血病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的高水平表达

在人骨髓细胞长期培养中,观察造血细胞与基质细胞的关系,检测不同类型的白血病患者及其他非血液病患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因的mRNA表达水平。基质细胞培养采用人骨髓细胞长期培养的方法,mRNA表达的检测采用地高辛标记cDNA探针和细胞原位斑点杂交法。培养4-6周时,部分急性粒细胞白血病(AML),慢性粒细胞白血病(CML)及骨髓增生异常综合征(MDS)患者的造血细胞获得独立生长的能力。与对照组相比,AML患者骨髓贴壁细胞中src原癌基因表达明显增高(P<0.05)。src原癌基因的高表达,提示在白血病发病中有造血微环境异常。

骨髓体外长期培养的研究进展

长期骨髓培养（ＬｏｎｇＴｅｒｍＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＣｕｌｔｕｒｅ，ＬＴＢＭＣ）是一种骨髓细胞体外液相培养法。ＬＴＢＭＣ体系可视为体外模拟的造血微环境。它为造血微环境、细胞因子和造血干／祖细胞等造血调控理论的研究提供了一个重要手段；在再生障碍性贫血等血液病发病机理的研究、白血病骨髓净化以及早期造血细胞的体外扩增中也具有重要作用。

重组人血小板生成素促进急性放射病小鼠长期造血功能恢复的作用及相关机制研究

目的:研究重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)促进急性放射病小鼠长期造血功能恢复的作用与机制。方法:小鼠经^(60)Coγ射线(6.5 Gy照射)全身照射后2 h肌肉注射rhTPO(100μg/kg),于照射后6个月检测小鼠外周血象、骨髓造血干细胞(HSC)比例、竞争移植受体小鼠存活率及嵌合率、c-kit^(+)HSC衰老阳性率、以及c-kit^(+)HSC衰老相关基因p16、p38 mRNA表达变化。结果:经6.5 Gy(63.01 cGy/min)γ射线照射后6个月,正常对照组、照射对照组和rhTPO给药组小鼠的外周血白细胞、红细胞、血小板、中性粒细胞和骨髓有核细胞数均未见明显差异(P>0.05);照射后小鼠骨髓造血干细胞和多能祖细胞比例较正常对照组显著下降,但rhTPO组无明显改变(P>0.05);照射对照组小鼠CFU-MK和BFU-E的数量显著低于正常对照组,rhTPO给药后明显改善;小鼠骨髓细胞竞争移植后,正常对照组和rhTPO给药组受体小鼠70 d存活率均为100%,照射对照组受体小鼠全部死亡;正常对照、照射对照和rhTPO给药组照射后6个月小鼠c-kit^(+)HSC衰老阳性率分别为6.11%、9.54%、6.01%(P<0.01);照射对照组小鼠的c-kit^(+)HSC p16、p38 mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.01),rhTPO给药后降低明显(P<0.01)。结论:6.5 Gyγ射线全身照射后6个月小鼠造血功能仍有所下降,提示存在长期损伤。应用rhTPO大剂量给药对其有明显改善作用,通过p38-p16通路减轻照射后长期HSC衰老,可能是rhTPO改善急性放射病小鼠造血功能长期损伤的机制之一。

骨髓细胞体外长期培养前后特性比较及其临床意义

目的通过体外骨髓细胞的培养，观察其细胞特征，为临床治疗疾病提供新的帮助。方法对10例急性白血病患者和5例正常人进行体外长期骨髓细胞培养：结果获得了3株与基质细胞共生的有长期生存力的造血细胞，其形态原始，这些细胞均有造血干细胞标记，其细胞化学、细胞表面免疫标记及超微结构与培养前细胞相比均发生了很大的变化，其中1例急性白血病原有核型异常者经培养后只出现正常核型。这些细胞在体外可以增殖，培养3个月足够达到骨髓移植所需细胞数。结论初步分析这些细胞为正常造血细胞，可用于目前所进行的造血干细胞移植，为今后造血干细胞移植开创一个新的方法。

再生障碍性贫血骨髓细胞体外长期培养

骨髓细胞体外长期培养(long-term marrow culture,LTMC)可了解基质细胞及其分子产物对造血干细胞分化全过程中各阶段的调节作用。本文报道利用长期液体培养,观察再生障碍性贫血(下称再障)患者骨髓细胞体外生长规律及其临床意义,证实正常骨髓培养3～4周后皆形成基质细胞层,而再障患者中,9/11例培养后虽然可形成基质细胞层,但“鹅卵石”样区域较少且形态亦较小。2例培养后一直未形成基质细胞层。计数上清液中未粘附细胞及CFU-GM总数,发现正常对照及再障骨髓培养一周后非粘附细胞即渐下降,两者的下降率类似。正常对照骨髓平均接种CFU-GM为415/10~6MNC,随培养时间延长CFU-GM数亦渐减少,但可维持5周以上。再障患者骨髓的CFU-GM生长极少,7/11例从接种起一直未见CFU-GM生长,而1例初治慢性、2例经治疗好转和1例复发病人的骨髓接种时含有一定量的CFU-GM,在培养过程中亦可维持2～4周。认为LTMC更适于对再障发病机理的分析,从而对指导临床治疗有重要意义。

急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制。方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量。结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05)。结论急性白血病存在造血微环境异常。

IDA对白血病骨髓基质培养体系中HL-60细胞杀伤效应的观察

目的 :研究细胞毒药物对体外残留白血病模型中HL 6 0细胞的杀伤效应。方法 :采用Dexter型骨髓培养体系形成白血病骨髓基质细胞贴壁层 ,接种HL 6 0细胞共培养 ,用去甲氧基柔红霉素 (IDA)处理后 ,动态观察HL 6 0细胞的活性变化。结果 :随着IDA剂量的增加及培养时间的延长 ,HL 6 0细胞活力逐渐减弱 ,去甲氧基柔红霉素 (IDA)与骨髓基质细胞层或单纯的培养基体外孵育对HL 6 0细胞杀伤能力减弱。结论 :急性白血病骨髓基质有助于HL 6 0细胞逃避化疗药物杀伤 ,对残留白血病的形成具有重要作用。

MIP-1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响

目的 :探讨MIP - 1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响。方法 :在骨髓长期培养的第 3、4、5周 ,分别加入MIP - 1β ,每周半换液时换出上清进行细胞计数 ,做CFU -GM培养。第 6周做3HTdR自杀实验 ,检测CFU -HPP。结果 :加MIP - 1β组上清中有核细胞数 ,CFU -GM数较对照组略有增加 ,但无显著差异(P >0 .0 5 ) ;第 6周MIP - 1β组造血祖细胞3HTdR自杀率较对照组明显增高。 (P <0 .0 5 )。CFU -HPP与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :MIP - 1β可解除骨髓基质层的内源性抑制活性 。

骨髓基质细胞及其与造血细胞的关系研究工作取得进展

很多血液病与骨髓造血功能的改变有密切关系,而造血功能又与造血微环境的改变有密切关系。1970年国外有学者提出一个多能造血干细胞之所以分化成为粒细胞、红细胞或巨核细胞是由它所处的造血微环境决定的。有的学者提出部分再生障碍性贫血可能是造血微环境的病变引起的。但造血过程中造血干细胞在发育中与造血微环境的关系如何,形态学基础是什么,还不清楚。

急性白血病患者骨髓基质造血微环境的某些异常<英文>

为了探索人白血病骨髓造血微环境的异常所在,本实验采用胶体金标记及银增染的免疫电镜方法,检测了急性白血病患者及正常人骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子、粘附分子及细胞外基质的表达情况。结果表明,急性白血病患者长期培养的基质细胞表达的GM-CSF(粒-巨噬系集落刺激因子)较对照组高,淋巴细胞归巢相关粘附分子(HCAM),血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)较对照组低,纤连蛋白(Fn)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)与对照组无差别。结论提示急性白血病患者骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子和粘附分子表达异常。

细胞因子诱导的杀伤细胞对慢性髓性白血病细胞的体外净化作用

在长期骨髓培养(LTBMC)7—9天的基础上,配对比较观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)+白细胞介素2(IL-2)或淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)+IL-2或IL-2活化的骨髓细胞或单纯LTBMC对慢性髓性白血病(CML)患者骨髓Ph^+细胞的净化作用。结果为LTBMC+CIK+IL-2组(n=8)细胞的Ph^+百分率明显低于单纯LTBMC组(n=8,P<0.001),也低于LTBMC+LAN+IL-2组(n=3)或单纯IL-2(n=3)。结论:CIK+IL-2与LTBMC对CML患者骨髓Ph^+细胞的净化有明显的协同作用。