长柄石杉中石杉碱甲的含量测定

[目的]建立HPLC法测定长柄石杉中石杉碱甲的含量。[方法]色谱条件:色谱柱为ZORBAX Extend-C18(150 mm×4.6 mm,4.5μm),流动相为乙腈-浓度0.02 mol/L磷酸二氢钾(8∶92,V/V),检测波长为310 nm,柱温为25℃,流速为1 ml/min,进样量为10μl。[结果]石杉碱甲在0.046～0.460μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(R=0.999 9),平均回收率为97.45%,RSD为2.70%,平均含量为0.025%。[结论]该方法简单、易行,可用于长柄石杉中石杉碱甲的含量测定。

长柄石杉ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

长柄石杉ISSR反应体系的建立能为利用ISSR标记技术进行长柄石杉品种鉴别、分类、种质资源遗传多样性分析奠定良好基础。利用正交试验设计的方法,从dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和Mg2+浓度4种因素,对长柄石杉ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度进行梯度检测。结果表明,20μLISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为1×PCRbuffer、300μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、2.0mmol/LMg2+、1.75UTaqDNA聚合酶、40ng模板DNA。该优化体系的建立为下一步进行长柄石杉ISSR分子标记奠定了基础。

长柄石杉中Serratene三萜成分的研究

目的对长柄石杉中Serratene三萜成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、制备性薄层层析分离化学成分,根据波谱数据及理化常数进行结构鉴定。结果分离鉴定了7个化合物,分别为(β-sitosterol)(Ⅰ)s,erratenediol-3-acetate(Ⅱ)s,erratenediol(Ⅲ)2,1-epi-serratenediol(Ⅳ)l,ycoclavanol(Ⅴ),3α,21β,24-trihydroxyserrat-14-en-16-one(Ⅵ)1,6-oxo-3α-hydroxyserrat-14-en-21β-ol(Ⅶ)。结论 7个化合物均首次从该植物中分离得到。

长柄石杉种质资源圃建设与原生境扦插实验初报

石杉科植物药用价值高,由于过度开采加之难以人工繁殖,导致资源危机。在石杉科植物种质资源圃建设的基础上,进行了长柄石杉原生境林下扦插试验研究,结果表明:原生境土壤是最合适长柄石杉扦插繁殖的基质,其次是全沙基质;春季、秋季对长柄石杉原生境(林下)扦插实验效果的影响不明显;IBA 3个浓度梯度处理中2×10-3处理的效果为最好,生根率、死亡率和平均生根量(条/插穗)表现明显优于其他处理小组;带茎尖的插穗扦插指标大部分优于茎段插穗组,说明带茎尖的插穗应该是长柄石杉扦插育苗插穗首选。

长柄石杉中石杉碱甲的提取工艺研究

目的:考察4种长柄石杉中石杉碱甲的提取工艺,选择出最适宜提取工艺和工艺条件。方法:以石杉碱甲得率为考察指标,分别优化了酸浸取、微波协助酸浸取、超声协助酸浸取、索氏提取4种提取工艺,并对4种提取工艺进行综合比较。结果:石杉碱甲的最适宜提取工艺为超声协助酸浸取工艺,该工艺最佳提取条件为:采用1.5%酒石酸为浸泡剂,固液比为20,浸泡时间24h后超声10min。结论:采用该提取工艺测得三明两地长柄石杉中石杉碱甲的含量分别为:0.0458%,0.0369%,加标回收率在97.6%～103.6%之间,RSD(n=6)在0.53%～1.69%之间。该工艺方法可行,且简便、快捷、重现性好。

福建闽江源国家级自然保护区长柄石杉群落结构与物种多样性分析

对福建闽江源国家级自然保护区长柄石杉群落的植物组成、生活型谱、垂直结构和物种多样性进行了调查分析,结果表明:群落有维管植物83科154属198种,生活型谱显示群落包括藤本在内的高位芽植物占总种数的66.67%,其中以小高位芽和矮高位芽植物占优势;地下芽也占一定比例,达14.14%,且以蕨类植物为主。群落垂直结构分化明显,分为乔木层、灌木层、草本层。物种丰富度指数、Simpson指数、Shannon-Wiener指数和Pielou均匀度指数分析表明:群落草本层与灌木层的物种丰富度、物种多样性指数明显大于乔木层与层外层,而群落各层次的均匀度无显著差异。

福建三明地区长柄石杉群落药用植物资源研究

在对三明地区长柄石杉群落51个样方,共计5 100 m2面积调查的基础上,对该群落内的药用植物资源进行统计分析,结果表明:三明地区长柄石杉群落有药用植物95科203属279种。其中蕨类植物16科21属33种,裸子植物3科4属4种,被子植物76科178属244种;全株和根及根状茎的药用植物最多,占74.56%,长柄石杉群落中出现频度高的药用植物有69种,并对该群落药用植物资源的开发利用提出建议。

长柄石杉中黄酮类物质的提取研究

以甲醇为溶剂,采用索氏提取法研究长柄石杉中黄酮类物质的提取工艺,考察了提取温度、提取时间及溶剂浓度对提取效果的影响。经正交试验结果表明,长柄石杉中黄酮类物质的提取条件为甲醇浓度100%、提取温度80℃、提取时间8 h时提取量较高,在此条件下黄酮提取量为23.15 mg/g。

长柄石杉与有柄马尾杉内生真菌的分离与初步鉴定

对长柄石杉和有柄马尾杉的内生真菌进行分离与鉴定。共分离纯化到17株真菌,其中从长柄石杉植株内分离出12株真菌,有柄马尾杉植株内纯化分离出5株真菌,分别隶属于青霉属、被孢霉属、木霉属、枝氯霉属、生赤壳属、曲霉属、希金氏指行霉、肉座菌属、赤霉属、球座菌属等10个属,其中长柄石杉与有柄马尾杉二者共有的为青霉属。

三明地区长柄石杉中石杉碱甲的提取和测定

寻找超声提取长柄石杉中石杉碱甲的最佳工艺条件和石杉碱甲含量的测定方法。通过正交实验对工艺参数进行优化,并采用HPLC法加以测定。提取最佳工艺条件为:固液比为20∶1(W/V),酸浓度为2.0%,超声时间10 min;测得两地长柄石杉中石杉碱甲的含量分别为0.0263%,0.0445%。以最佳工艺条件提取石杉碱甲并测定其含量的实验方法可行,且简便、快捷、重现性好。

福建省不同居群长柄石杉石杉碱甲含量的研究

实地采集标本并用改进的HPLC法测定了福建省不同地区16个居群间长柄石杉的石杉碱甲(Hup A)含量。结果显示,石杉碱甲在长柄石杉福建省不同居群间均有分布,其中以梁野山和新罗区黄连盂两个居群含量较高,分别为0.047 7%和0.046 4%;从区域上看,龙岩地区含量最高,平均为0.041 6%,三明地区含量次之,平均为0.041 4%,宁德地区含量最低,平均为0.019 7%。结果表明,福建地区拥有良好的石杉碱甲植物资源。

长柄石杉居群遗传多样性和遗传结构的AFLP分析

石杉科植物因所含石杉碱甲(Huperzine A)对中老年痴呆等具有良好疗效,近年来倍受关注.利用AFLP分子标记对武夷山脉广布种长柄石杉[Huperzia serrata(Thunb.ex Murray)Trev.var.longipetiolata(Spring)H.M.Chang]7个居群112株个体进行遗传多样性和居群遗传结构分析.选用多态性高、分辨力强的8对选择性扩增引物组合共获得675个位点,其中多态位点比例为69.38%.居群内观测等位基因数(Na)为1.633,有效等位基因数(Ne)1.493;Nei’s基因多样性指数(He)与Shannon多态性信息指数(I)的平均值分别为0.272和0.392,多样性最高为地处武夷山脉中段的泰宁居群和建宁居群,最低为山脉北段的光泽居群.居群总基因多样性(Ht)为0.327 3,居群内基因多样性(Hs)为0.272 2,居群间的遗传分化系数(Gst)为0.168 1,表明居群内变异是长柄石杉遗传多样性的主要来源.由Gst估计,武夷山脉长柄石杉自然居群的基因流(Nm)为2.474 0.邻接树分析表明居群间遗传亲缘关系与地理位置相关.武夷山脉长柄石杉较高的遗传多样性和基因流水平表明其仍然具有相当的适应(生存)能力和进化潜力,这可能与其生物学(异交水平)、生态学特性及武夷山脉相对良好的生境条件有关.

长柄石杉不同地理居群叶绿体DNA trnL-trnF序列变异与聚类分析

采用直接测序法,对石杉科广布种长柄石杉(Huperzia serrata var.longipetiolata)21个居群(福建省19个居群和江西省2个居群)共计126株个体的叶绿体DNA trnL-trnF序列进行测序,用Clustal X和MEGA5.0软件进行序列分析,UPGMA法构建聚类图,以期了解序列变异与地理分布的关系,为长柄石杉资源的保护及开发利用提供参考依据.扩增获得的序列全长在928-967 bp之间,经排序后两端切平,序列长925 bp,G+C平均含量为34.05%;21个长柄石杉居群的cpDNA trnL-trnF序列存在20个变异位点,5个信息位点.UPGMA聚类结果显示,福建省居群与江西居群存在较大遗传距离,分聚为不同分支;福建省内19个居群再分聚为3个分支,其中11个居群间的遗传距离为零.研究结果表明长柄石杉居群间存在较明显的遗传分化和一定强度的基因流,居群间的叶绿体DNA trnL-trnF序列变异与地理分布尤其是山脉形成的隔离和屏障有关,较高的遗传多样性和基因流水平有利于长柄石杉种群的生存与进化.

中药千层塔原植物的研究

本文采用石松植物的最新分类方法对中药千层塔的学名进行了订正。鉴于各书记载不一,植物名称比较混乱,文中建议采用千层塔为正品名,蛇足石松、蛇足石杉、蛇足草为别名。并根据对全国主要标本室标本的鉴定和对福建、广东等地药店收购的千层塔原植物的调查发现其原植物包括以下三种植物:1、千层塔Huperzia serrata(Thunb.)Trev.,(Lycopodium serratum),(Orostachys serratus).2.皱边石杉Huperzia crispata Ching.3.长柄石杉Huperzia longipetiolata(Spring)C.Y.Yang,(Lycopodium serratum Var.longipetipetiolata),(Lycopobium serratum Var.javanicum),(Lycopodium javanicum),(Huperzia serrata f.longipetiolata).