中国沿海长蛸(Octopus variabilis)自然群体线粒体COI基因遗传多样性研究

对我国沿海5个自然群体长蛸的线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)部分序列进行了测定和分析,经比对获得658bp核苷酸片段,其中碱基T、C、A和G的平均含量分别为37.02%、18.46%、30.15%和14.35%,AT的含量明显高于GC的含量。5个自然群体的长蛸中共发现18个变异位点,得到15个单倍型,包括4个共享单倍型,其中青岛群体的核苷酸差异数K以及平均核苷酸多样性指数Pi最高,烟台群体最低;群体间,青岛群体在群体间核苷酸差异数K、群体间平均每位点核苷酸替代数Dxy和群体间每位点净核苷酸替代数Da三个指标上都表现出比其它群体之间较高的水平,说明青岛群体具有最为丰富的遗传多样性。MEGA3.1软件计算5个群体间的Kimura2-paramter遗传距离,大连群体和青岛群体之间的遗传距离最远为0.0077,而大连群体与烟台群体之间的遗传距离最低,为0.0029。AMOVA分析表明,五群体间总遗传分化系数Fst=0.17410(P<0.05),群体间遗传分化远小于群体内。NJ法和UPGMA法构建的分子进化树,5个地理群体的长蛸聚为两个族群,大连、烟台群体聚为一族群,青岛、连云港和舟山群体聚为另一族群。

长蛸Octopus variabilis自然群体生化遗传学研究

采用同工酶电泳技术,筛选了天冬氨酸转氨酶(AAT)、腺苷酸激酶(AK)、肌酸激酶(CK)、果糖二磷酸激酶(FBP)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)、6-磷酸葡萄糖异构酶(GPI)、谷胱甘肽还原酶(GRS)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、甘露糖-6-磷酸异构酶(MPI)和核苷磷酸化酶(NP)等10种同工酶,并以短蛸Octopus ocellatus和目乌贼Sepia aculeata为外群,研究了长蛸Octopus variabilis大连(DLC)、烟台(YTC)和莱州(LZC)3个自然群体的遗传结构和多样性水平。结果表明DLC、YTC、LZC 3个长蛸群体的多态位点比例较高,分别为20%,30%和30%(P0.99);群体平均杂合度观测值分别为0.014,0.153,0.092;平均有效等位基因数分别为1.2,1.4,1.3。烟台长蛸群体的遗传多样性较高。对3个种5个群体构建UPGMA系统树,并进行聚类分析。

基于线粒体DNA 12S rRNA和COⅢ基因序列研究中国沿海7个长蛸(Octopus variabilis)野生群体的遗传多样性

基于线粒体DNA的12S rRNA和COⅢ基因序列对我国沿海重要经济头足类长蛸不同群体(大连、烟台、青岛、连云港、舟山、温州、厦门)进行了遗传多样性和遗传结构的分析。由PCR扩增获得80个个体的12SrRNA基因416bp、COⅢ基因512bp的部分序列,两者多态性遗传参数统计显示,80个个体分别检出64(12S)和27(COⅢ)个单倍型,总群体单倍型多样性指数(Hd)分别为0.984(12S)和0.909(COⅢ),核苷酸多样性指数(Pi)分别为0.028(12S)和0.034(COⅢ),平均核苷酸差异数(K)分别为9.403(12S)和17.265(COⅢ),显示出较丰富的遗传多样性。两种基因遗传分析结果均显示厦门群体与其它群体的显著分化。初步分析长蛸各群体遗传分化的原因之一可能是洋流格局的形成阻隔了群体间的基因交流。

人工条件下长蛸(Octopus minor)繁殖习性及胚胎发育研究

于2009—2010年对山东荣成天鹅湖盛产的长蛸进行了人工繁育研究。采用显微观察和数码拍照等方法,观察其胚胎发育,详细描述各发育期的特征。结果表明,在室温21—25℃、盐度28—31等条件下,长蛸产卵量9—125粒,个体间差异较大。卵长径13—20mm,宽径4—6mm。雌体具护卵行为。胚胎发育期72—89d,分别历经卵裂期、囊胚期、原肠期、器官形成等20个时期。整个发育过程,胚胎发生两次翻转,第一次发生在第Ⅵ—Ⅶ期,约21d;第二次发生在第XIX期,约65d,少数个体也存在多次翻转现象。初孵幼体胴背长8.5—11.5mm,全长25—31mm,直接营底栖生活。

中国沿海7个长蛸(Octopus variabilis)群体COI基因的遗传变异研究

采用线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基I(COI)基因序列测定技术分析了中国沿海重要经济头足类长蛸7个野生群体的种群遗传结构及其变异。结果表明,我国长蛸资源存在相对丰富的遗传多样性,635bp长度的核苷酸片段共检测到74个多态位点,多态位点比例达11.7%,检测的108个个体中共获25个单倍型,单倍型多样性指数(H)达0.342—0.934,平均核苷酸多样性指数(Pi)达0.0008—0.0055,高于多数海洋头足类的遗传变异。对7个群体的遗传结构进行检测表明,我国的长蛸群体间存在显著的遗传分化(P<0.05),遗传结构基本符合脚踏石模型。7个群体可明显聚类为3个类群,类群间分化系数Fst达0.8858(P<0.01),基因流大大小于1;AMOVA检测和单倍型网络关系图也证实了上述类群的分化。遗传距离分析表明,由厦门群体组成的类群与其它2类群间的遗传距离达到0.086—0.098,可能达到了亚种的分化。

长蛸(Octopus variabilis)不同地理群体遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术获得长蛸的ISSR-PCR最优反应体系,并对大连、烟台、青岛、连云港、舟山、温州、厦门7个群体168个个体进行遗传多样性分析。结果表明,7个引物在7个群体中共扩增出118条重复性好且带型清晰的ISSR扩增带,其中多态条带为55条,多态性比例达46.61%。在物种水平上的Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为0.3145和0.4766,在群体水平上分别为0.1573和0.2355。7个群体可明显聚类为2个类群,AMOVA分子变异分析发现,长蛸54.64541%的变异发生在群体间,45.35459%的变异发生在群体内。群体间的遗传分化系数Gst为0.5067和由Gst估算的基因流Nm为0.4867<1。分析显示长蛸具有较高遗传多样性水平,但群体间已经出现了较大程度的遗传分化。

浙江北部沿海长蛸Octopus variabilis生态分布初步研究

浙江北部沿海长蛸Ｏｃｔｏｐｕｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ生态分布初步研究ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＹＯＦＥＣＯＬＯＧＩＣＡＬＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯＦＯＣＴＯＰＵＳＶＡＲＩＡＢＩＬＩＳＩＮＮＯＲＴＨＥＲＮＰＡＲＴＯＦＺＨＥＪＩＡＮＧＳＥＡ吴常文，吕...

四种不同饵料对真蛸(Octopus vulgaris)生长与肠道微生物影响的研究

本研究分析了不同饵料对真蛸(Octopus vulgaris)生长与肠道微生物的影响。实验采用4种饵料:蓝点马鲛(鱼组)、天津厚蟹(蟹组)、四角蛤蜊(贝组)和日本枪乌贼(鱿鱼组)分别投喂真蛸,分析了各实验组真蛸的日均摄食量、特定生长率、饵料转化率、经济效益比,以及饵料对肠道微生物菌群结构和多样性的影响。实验结果表明:在生长性能指标方面,贝组的日均摄食量最高,而饵料转化率低于鱼组与蟹组;鱼组与蟹组的日均摄食量差异不大,但蟹组真蛸的特定生长率和饵料转化率高于其他三组且经济效益最佳;鱿鱼组的日均摄食量、特定生长率、饵料转化率和经济效益比均低于其他三组。在真蛸肠道微生物群落的丰富度与多样性方面,鱼组均高于其他各组,而鱿鱼组的丰富度最低;在门水平上,软壁菌门、螺旋体门、变形菌门等10个门为真蛸的优势菌群;在属水平上,摄食率最大的贝组真蛸肠道菌群中的支原体、乳球菌等11种菌为优势菌群,特定生长率最大的蟹组中真蛸肠道菌群中的弧菌、小纺锤状菌等5种菌为优势菌群。综合不同饵料对真蛸生长性能指标和肠道菌群的影响,认为蟹类是真蛸理想的饵料。

基于Cyt b基因序列的中国沿海4个长蛸(Octopus variabilis)群体的种群遗传结构分析

采用线粒体Cytb基因测序技术研究了我国不同海域4个长蛸(Octopus variabilis)群体的种群遗传结构。结果表明,232bp的Cytb基因片段在4个群体90个个体中共检测到38个多态位点、12个单倍型,单倍型多样性指数H达0.854±0.015,核苷酸多样性指数Pi达0.059±0.005,平均核苷酸多样性指数K达13.526,显示出较高的遗传变异。种群遗传结构分析表明,4个群体间均存在极显著的遗传分化(P<0.01),除大连与青岛两群体间外,其它两两群体间的基因流均小于1。聚类分析表明,4个群体明显分化为三大类群,一个类群由大连和青岛群体组成,一个由温州群体组成,另一个由东山群体组成;遗传距离分析表明,东山类群与其它类群之间可能为亚种水平的分化,而其它类群之间仍为种内群体间分化。长蛸这种种群遗传结构形成原因可能与其较弱的种群扩散能力有关,另外冰川期地理历史因素及我国海域的洋流作用可能也参与了长蛸种群遗传结构的形成。

长蛸(Octopus minor)初孵幼体培育与生长研究

采用光滑河蓝蛤和菲律宾蛤仔两种双壳贝类培养长蛸幼体,分析其生长和存活情况。结果显示,长蛸初孵幼体无外卵黄,体表光滑,第一对腕(最长腕)约为胴长的2.9倍,腕吸盘两列,第1—4对腕平均吸盘数(n=3)分别为66±4.60、55±3.76、43±4.59和41±3.82;1—15d幼体投喂的是光滑河蓝蛤(壳长15.4—20.3mm),之后投喂菲律宾蛤仔(壳长33.2—39.3mm);幼体30d—70d总成活率由80.99%降至54.65%;整个培育过程中,幼体生长率与饵料效率呈极显著线性回归关系(P<0.01),y=1.452x-2.731(R2=0.865);1—80d胴长/全长比增幅高于腕长/全长,表明胴体增长快于腕的增长;各腕吸盘数变化不显著;幼体鲜重与培养天数呈指数函数关系,Wt=0.301e0.010t(R2=0.854,P<0.01);长蛸幼体最终生长率为122.05%,平均生长率为9.97%/10d。

不同浓度氨氮胁迫下长蛸(Octopus minor)的半致死浓度和急性毒性评估

作为重要的水质参数,高浓度的氨氮对水生动物产生有害影响。氨氮的安全浓度对海水养殖物种至关重要。本文采用静水法,在盐度30.0±1.0,pH 7.8±0.2,温度20.8±0.5℃条件下,以荣成月湖海区的长蛸(Octopus minor)成体为研究对象,分析了水体氨氮对其急性毒性作用。通过预实验获得长蛸成体可耐受的浓度范围,从中选取浓度0(对照)、87.0、124.5、143.5、180.3、204.0、242.5mg/L等7个浓度梯度测定长蛸成体耐受性,采用概率单位法、寇氏法和线性回归法分别计算48h、72h和96h的半致死浓度(LC50)。实验结果显示,氨氮毒性效应随着浓度和胁迫时间的增长而增加,氨氮胁迫48h、72h和96h的半致死浓度分别为187.93、154.61和124.92mg/L(χ^2检验P<0.05);显示氨氮对长蛸成体具有显著毒性作用。与其他水生动物相比,长蛸对于氨氮的耐受性较强,对氨氮毒性的自我调节能力较强,具体的调节机制有待进一步研究。

不同饥饿时间和再投喂对长蛸(Octopus minor)生长及肌肉脂肪酸含量的影响

在17.2—20.8oC条件下,对长蛸[初始鲜重(127.27±12.19)g,初始胴背长(67.23±6.12)mm]进行不同时间(0,3,6,9,12,15d)饥饿处理后再恢复投喂(15d)的实验,研究不同饥饿时间和再投喂对长蛸生长及肌肉脂肪酸含量的影响。结果表明,随饥饿时间的延长,长蛸的成活率、肝体比呈下降趋势,其中饥饿12d后成活率显著降低,饥饿0—3d期间肝体比下降最为显著。恢复投喂后,饥饿时间较长组(9,12,15d)长蛸的肝体比仍显著低于对照组。长蛸的体质量降低率呈现上升趋势,饥饿15d时达到最高值18.15%±4.46%。特定生长率值中,饥饿3d组显著高于对照组,饥饿6d、9d组与对照组差异不显著,饥饿12d、15d组均显著低于对照组。再投喂结束后3d、6d、9d组的鲜重与对照组差异不显著,12d、15d组显著低于对照组。长蛸肌肉脂肪酸中单不饱和脂肪酸(MUFA)的含量,自饥饿6d起随饥饿时间延长表现出显著上升趋势;再投喂后,饥饿12d、15d组饱和脂肪酸(SFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)的值显著高于对照组。综上说明,饥饿3d、6d、9d组长蛸具有完全补偿生长的能力,饥饿12d、15d组个体仅具有部分补偿生长的能力,主要通过增加摄食量来完成其补偿生长。因此,为保证长蛸人工养殖效果,应避免个体饥饿超过9d。

天鹅湖长蛸营养成分的分析及评价

对长蛸(Octopus minor)肌肉组织营养成分、营养价值进行了分析评定。结果表明:长蛸肌肉样品中,粗蛋白、粗脂肪、灰分的鲜质量分数和干质量分数分别为14.85%和71.80%、0.41%和2.0%、1.94%和9.36%,水的质量分数为79.30%;测得17种氨基酸,总质量比是651.7 mg/g,必需氨基酸质量比为256.5 mg/g,占氨基酸总量的39.36%;必需氨基酸中色氨酸得分最高为217,所有必需氨基酸均在53分以上,半胱氨酸+蛋氨酸为第一限制性氨基酸;共检测10种主要脂肪酸,其中EPA+DHA的总质量分数为31.23%(雌)、32.10%(雄);富含钠、钾、钙、镁、铁等11种矿物元素,微量矿物元素中锌质量比最高,为111.36 mg/g;维生素A、B含量丰富。

长蛸生殖系统的形态学与组织学观察

运用解剖学和组织学方法对长蛸(Octopus variabilis)生殖系统的形态结构进行了研究。结果表明,长蛸雌雄异体并异形,雄性右侧第三腕茎化。长蛸雌性生殖系统由一个卵巢、成对的输卵管及输卵管腺组成。卵巢壁上发出一条线状具分支的生殖索,米粒状的滤泡以卵柄连接至生殖索上。每个滤泡是由单层滤泡细胞围绕着一个卵母细胞构成。输卵管形成丰富的纵行褶皱,黏膜上皮具有纤毛。输卵管腺含有两种类型腺细胞。雄性生殖系统包括精巢、输精管前段、储精囊、摄护腺、盲囊、输精管后段和精荚囊。精巢内部被结缔组织分隔成许多精小叶,精原细胞由小叶壁中的生殖上皮产生,并向小叶腔中逐步分化成精子。输精管前段、盲囊和摄护腺所分泌的黏液物质共同参与精荚的形成。储精囊和输精管后段形成较多的纵行褶皱,输精管后段上皮游离面的纤毛可运输生殖细胞。精荚囊的作用则是贮存精荚,囊壁中的平滑肌利于长蛸交配时精荚的排出。

长蛸的盐度耐受性及盐度胁迫对其血细胞和体内酶活力的影响

通过控制暂养水体盐度,用盐度突变与盐度渐变2种方法测定长蛸的盐度耐受性.测定了长蛸血细胞密度、各类血细胞数量比例以及各种酶的活力几组数据,并分析其血细胞与体内酶活力的变化.结果表明：长蛸的生存盐度范围为7.0~30.3,适宜盐度范围为16.3~27.3,最适盐度范围为18.3~24.3,对盐度的适应范围较广,有利于长蛸大规模养殖的开展.在盐度胁迫下,长蛸血细胞密度,各种血细胞数量比例均发生显著改变,长蛸个体也随着胁迫加大变得越来越不适应,出现喷墨、休克、甚至死亡,这表明长蛸的免疫机能降低.无论在低盐度还是高盐度胁迫情况下,受渗透压的影响,长蛸肌体大量吸水和失水,呼吸作用减弱,体内供氧降低,导致长蛸体内有氧呼吸降低和无氧呼吸提高,于是催化有氧呼吸的LDH酶活力降低.同时,细胞内与免疫和消化相关的细胞器由于细胞吸水或失水作用功能受到影响,保护酶（SOD、POD、CAT）、磷酸酶（ACP、AKP）和消化酶（蛋白酶和脂肪酶）的活力均呈下降趋势.由此可见,盐度胁迫对长蛸的影响是显著的.

长蛸体尺与重量性状间相关关系的研究

为了解长蛸体尺和重量性状之间的相关关系。挑选同批采捕的体重在200g左右的长蛸95只,测量胴长、胴宽、头长、头宽、漏斗长、漏斗宽、(第一、二、三、四腕)的长、腕间膜、体积等12个体尺性状,以及体重、净肉重2个重量性状,采用相关分析,计算了各性状间的相关系数。结果表明:胴性状、头性状、漏斗性状间都存在极显著相关(P<0.01),各腕性状间也存在极显著相关(P<0.01),相关系数最大值出现在体重和净肉重之间(0.983),其次为体积与体重之间(0.979)。利用曲线回归建立了体重预测净肉重的最优模型:Wr=0.981Wt0.9843(R2=0.9706)。

3种饵料对暂养长蛸生长的影响

用缢蛏、凡纳滨对虾、弧边招潮蟹投喂暂养长蛸,通过测量长蛸的摄食率、质量增加率、特定生长率、饵料转化率,分析3种饵料对长蛸生长的影响。试验结果表明,投喂弧边招潮蟹的长蛸摄食稳定,生长快,特定生长率及饵料转化率高,活动力强;投喂凡纳滨对虾的长蛸开始摄食量较大,生长较快,饵料转化率较高,一段时间后生长减慢,最后几乎停止生长;投喂缢蛏的长蛸生长缓慢,一段时间后停止生长,饵料转化率最低。研究结果表明,在长蛸的暂养中蟹类是其较为理想的饵料。

长蛸唾液腺和消化腺的组织学与组织化学研究

以组织学和组织化学方法 ,研究了长蛸的唾液腺和消化腺。前唾液腺腺细胞含团状糖蛋白性质的分泌颗粒。后唾液腺有两种腺管 ,I型腺管由I型腺细胞和黏液细胞组成。I型腺细胞含团状分泌颗粒及丰富的RNA ,具脂酶活性;黏液细胞分泌酸性黏多糖。II型腺管的腺细胞内含一桃形丝状物。肝细胞含大量的分泌颗粒 ,呈现强的蛋白酶及弱的非特异性酯酶和脂酶活性。胰脏腺细胞呈非特异性酯酶和弱的蛋白酶和脂酶活性。

长蛸消化道的组织学与组织化学研究

用组织学和组织化学方法对长蛸消化道进行了研究 .长蛸消化道由口、食道、嗉囊、胃、胃盲囊、肠和直肠组成 .消化道管壁由 3层组成 :粘膜层、粘膜下层和肌层 .粘膜层为单层上皮 ,由柱状或立方细胞组成 ,在胃盲囊、肠和直肠还含有粘液细胞 .食道、嗉囊和胃粘膜上皮表面衬有护膜 .胃盲囊内壁形成长的侧褶 ,胃盲囊和肠柱状细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶和碱性磷酸酶活性 ,细胞表面有密集的微绒毛 ,是食物消化和吸收的主要部位 .胃盲囊粘膜下层还存在粘液腺 。