lincRNA-EPS/miR-24-3p/BMP2信号轴对牙釉质发育影响的体外实验研究

目的:在体外探究长链基因间非编码RNA-EPS(long intergenic non-coding RNA-EPS,lincRNA-EPS)/微小RNA(microRNA,miRNA)-24-3p/骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)信号轴对牙釉质发育的影响。方法:将lincRNA-EPS过表达质粒和miR-24-3p mimics转染至LS8细胞中,并通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分别检测其转染效率;应用RT-qPCR分别检测转染后成釉相关基因(AMELX、AMBN、AMTN、MMP20)和BMP2的mRNA相对表达水平;应用蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染后BMP2的蛋白表达水平;采用独立样本t检验进行组间定量比较。结果:显微镜下荧光图像、RT-qPCR结果显示,lincRNA-EPS过表达质粒和miR-24-3p mimics均转染成功;lincRNA-EPS过表达质粒转染后成釉相关基因(AMELX、AMBN、AMTN、MMP20)、BMP2的mRNA及蛋白表达均显著升高,miR-24-3p mimics转染后成釉相关基因、BMP2的mRNA及蛋白表达均显著降低,lincRNA-EPS能在一定程度上抑制miR-24-3p对BMP2的调控作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:牙釉质发育受lincRNA-EPS/miR-24-3p/BMP2信号轴的调控,lincRNA-EPS可以影响miR-24-3p对下游BMP2的表达抑制,从而促进釉质发育。

lincRNA ULK4P2对肝癌细胞生物学行为的影响

目的通过干扰肝癌细胞株中长链基因间非编码RNA ULK4P2(lincRNA ULK4P2的表达,初步观察lincRNA ULK4P2对肝癌细胞生物学行为的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lincRNA ULK4P2在不同肝癌细胞株和正常肝细胞株中的表达,根据RT-qPCR检测结果,选择肝癌细胞株HepG2进行后续干扰实验。将针对lincRNA ULK4P2的小干扰RNA(siRNA)序列,包括siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-mock(空白对照)、siRNA-Scramble(将目的 siRNA序列打乱后重新组合所得的阴性对照)转染HepG2细胞,根据转染序列siRNA后对HepG2细胞lincRNA ULK4P2的干扰效果,选择siRNA-2进行之后的功能检测。应用siRNA下调HepG2细胞中lincRNA ULK4P2的表达,运用CCK-8技术研究lincRNA ULK4P2表达下降对肝癌细胞增殖情况的影响,运用流式细胞仪检测lincRNA ULK4P2表达下降对肝癌细胞凋亡和细胞周期分布的影响。对CCK-8实验中siRNA-2组、siRNA-mock组和siRNA-Scramble组HepG2细胞增殖活性(吸光度)的比较采用单因素方差分析。对分别转染siRNA-2、siRNA-mock、siRNA-Scramble的HepG2细胞通过流式细胞仪检测所得细胞周期分布情况,采用单因素方差分析。结果 CCK-8实验显示,与siRNA-mock组和siRNA-Scramble组比较,siRNA-2组HepG2细胞在转染后72 h增殖活性明显下降,差异具有统计学意义(P <0.05)。下调HepG2细胞lincRNA ULK4P2的表达后,细胞各个周期时相中细胞数目无明显变化;siRNA-2组HepG2细胞中G2/M期细胞的比例(43.92%)相对于siRNA-mock组(7.81%)和siRNA-Scramble组(8.21%)明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 lincRNA ULK4P2可能参与了肝癌细胞增殖和细胞周期的分子调控过程。