Candida cloacae长链脂肪酸醇氧化酶基因的克隆与表达

The cDNA encoding long-chain fatty-acid alcohol oxidase(FAO) was isolated by using RT-PCR method from Candida cloacae grown in a medium containing oleic acid. The cDNA of fatty-acid alcohol oxidase was cloned into expression plasmid pET17b under T7 promoter and then transformed into E.coli BL21/DE3. The molecular weight of the expressed protein was estimated to be approximately 64 kD by SDS-PAGE. The expressed protein had a specific catalytic activity of fatty-acid alcohol oxidase and its activity was 1090±116 U/ml medium. Northern blotting revealed that there was high expression of fao mRNA in Candida cloacae yeast grown in a medium containing oleic acid.

Candida Cloacae长链脂肪酸醇氧化酶的结构域谱分析(英文)

目的 分析酵母CandidaCloacae中长链脂肪酸醇氧化酶的酶活性结构域。方法 利用RT PCR技术 ,从酵母Candidacloacae细胞中克隆长链脂肪酸醇氧化酶的 5个不同长度的cDNA片段。扩增这些片段的上游引物5’端引入了NheI限制性内切酶位点和起始密码ATG ,下游引物 5’端引入了NheI限制性内切酶位点。扩增产物经NheI消化后 ,被克隆进T7启动子控制下的表达质粒pET 17b中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)菌株。结果 转化大肠杆菌BL2 1(DE3)菌株表达出 5个不同长度的长链脂肪酸醇氧化酶的羧基端肽段 ,其氨基酸残基数分别为5 35AA(5 0KD)、4 73AA(43KD)、4 11AA(38KD)、30 6AA(2 6KD)和 2 16AA(18KD)。与完整的长链脂肪酸醇氧化酶(6 97AA)相比较 ,相当于它们分别从氨基端被切除 16 2、2 2 4、2 88、391和 4 81个氨基酸 ,其酶活性分别下降了 18.8%、2 0 .6 %、88.6 %、91.4 %和 99.7%。结论 结果表明随着长链脂肪酸醇氧化酶的氨基端被切除的氨基酸数增加 ,其酶活性下降 ,尤其是切除 2 2 4 2 88氨基酸序时 ,酶活性下降更明显 。

长链脂肪酸醇氧化酶基因在油菜不同组织中的表达

目的 研究长链脂肪酸醇氧化酶基因在油菜不同组织中的表达水平。方法 利用RT PCR方法从油菜RNA中扩增长链脂肪酸醇氧化酶基因的cDNA ,并用 [α 3 2 P]dCTP标记该cDNA作为探针 ,应用Northernblot杂交技术分析长链脂肪酸醇氧化酶基因在油菜根、茎、叶及花等组织中的表达水平。结果 Northernblot杂交所检测的油菜根、茎、叶及花组织中均有位于 2 .4kb处的杂交带 ,但表达水平有差异 ,在油菜叶中表达量最高。结论 长链脂肪酸醇氧化酶基因表达于所有被检测的油菜组织中 ,可能为一种组成性表达的基因。