极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例基因突变分析

目的对1例极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)病儿进行可疑致病基因突变分析,并探讨基因突变与该疾病表型的关系。方法选择1例VLCADD病儿为实验组,200例健康者为对照组,采用串联质谱法检测VLCADD的酰基肉碱谱,全部外显子测序技术(WES)进行突变筛查,与gnomAD和1000Genomes数据库中的人类基因组序列进行比对,寻找可疑基因突变位点,并在病儿及其父母中进行Sanger测序验证。结果病儿串联质谱结果显示,VLCADD相关特征性指标十四烯酰基肉碱(C14∶1)升高,尤其是升高值>1.0μmol/L可明确诊断。WES发现病儿ACADVL基因存在复合杂合突变,第8外显子c.664G>A和第13外显子c.1276G>A。Sanger测序验证c.664G>A来源于母亲,c.1276G>A来源于父亲。200例正常对照者中未发现该突变。结论ACADVL基因c.664G>A和c.1276G>A复合杂合突变可能是VLCADD的致病突变,串联质谱检测结合高通量基因测序可为VLCADD的临床早期筛查和诊断提供重要依据。

长链酰基辅酶A合成酶家族的功能及在肿瘤中的研究进展

脂肪酸是维持人体正常生理功能的必需营养物质,在体内需被相关酶激活后才可以进入正常代谢途径,脂肪酸代谢失调与肿瘤发生密切相关。长链酰基辅酶A合成酶(ACSLs)负责激活长链脂肪酸,ACSLs家族包括5个成员,分别为ACSL1、ACSL3、ACSL4、ACSL5、ACSL6,不同亚型具有不同细胞定位及功能,可以催化不同脂类并影响其代谢去路。ACSLs通过调节脂肪酸代谢,广泛参与内质网应激、铁死亡、耐药和肿瘤炎症微环境,ACSLs在肿瘤中经常去调控,可以影响脂肪酸代谢,而脂肪酸可以通过激活多种转录因子与基因反应原件结合激活不同的ACSLs,肿瘤细胞和蛋白泛素化可以调节ACSLs基因的表达,从而导致肿瘤发生代谢紊乱和其他代谢性疾病的发生。Triacsin C是一种ACSLs抑制剂,对开发抗肿瘤药物有巨大潜力。本文就ACSLs在细胞中的表达与定位、生理作用、在肿瘤中的功能、分子机制进行综述,结果表明,ACSLs与肿瘤中的炎症反应、脂质代谢紊乱、肿瘤侵袭与转移相关,对肿瘤发生、发展具有重要意义,可能成为肿瘤治疗有价值的生物标志物和治疗靶点。

油菜长链酰基辅酶A合成酶基因(LACS4)的电子克隆和表达分析

长链酰基辅酶A合成酶(LACSs)把游离脂肪酸活化成为酰基辅酶A硫脂,在油脂的合成和降解途径中发挥着重要的作用。通过电子克隆的方法,发现了1个油菜(Brassica napus)LACS基因。该基因长2270 bp,包含2004 bp的开放阅读框,预测编码1个含有667个氨基酸残基的蛋白质,命名该蛋白为BnLACS4,序列分析显示,BnLACS4具有典型的LACS分子特征。表达分析显示BnLACS4在成熟油菜的根、茎、叶和花中都有表达。在授粉后(DAP)35 d,不同含油量的角果皮和种子中,BnLACS4的表达也存在差异。表达谱说明,BnLACS4可能参与油脂的生物合成以及油菜种子中的油脂积累。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例病例报告及文献复习

探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床表现、基因型特点及治疗,提高对极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的认识。方法 总结 1 例 VLCADD 患儿的临床表现、诊断及治疗过程,并进行基因型分析。结果 患儿,男,6月7天,因“呕吐3+天,发热4+小时,惊厥5次”入院,入院不到24小时即抢救无效死亡。其血浆酰基肉碱谱提示多种肉碱值较参考值升高。经基因检测发现患者ACADVL 基因存在 2 个杂合变异,ACADVL 基因型为 c.480C>A/c.1077+5G>C。患儿最终诊断为极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症。结论 极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症基因突变谱具有明显异质性,缺乏特异性临床表现,易被误诊、漏诊,需早期诊断及治疗。

早发型极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症3例临床及遗传学分析

目的 探索早发型极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)的临床与遗传特征,提高对该疾病的认识。方法 回顾性分析2017年9月至2020年4月在上海交通大学医学院附属新华医院新生儿监护室诊治的3例早发型VLCADD患儿的基因型、临床表型及其预后情况。结果 3例经分子诊断的早发型VLCADD患儿中男2例,女1例,均无阳性家族史。3例患儿均在新生儿期以代谢危象或消化道症状起病。新生儿筛查2例C14:1增高,1例未行筛查。3例患儿均存在ACADVL基因变异,都为复合杂合子,变异来自父母,其中c. 1615 C> T、c. 231-232 insAATG未见报道。1例患儿生后母乳喂养,2日龄呼吸心跳骤停;另2例患儿因新生儿筛查异常,诊断后立即开始富含中链三酰甘油的特殊奶粉喂养,分别于3月龄、4月龄发生猝死。结论 早发型VLCADD为新生儿期、婴儿期潜在猝死性疾病之一,尽管积极开展早期诊断与治疗,但总体预后仍不佳,因此对先证者家系进行产前诊断、避免患儿出生至关重要。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症误诊为肝糖原累积症1例

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD,OMIM 201475)是一种是由于极长链酰基辅酶A脱氢酶(VLCAD)的编码基因ACADVL(OMIM609575)先天缺陷导致长链脂肪酸氧化障碍的一种常染色体隐性遗传病,是发病率居第二位的先天性脂肪酸氧化障碍性疾病[1]。VLCAD是线粒体内脂肪酸β氧化中的第一步关键酶,催化含14~18个碳的脂酰基辅酶A脱氢[2],其缺陷导致脂肪酸β氧化过程受阻.

花生长链酰基辅酶A合成酶6基因(LACS6)的克隆、鉴定与组织表达

长链酰基辅酶A合成酶（long chain acyl-CoA synthetase：LACS）是油脂代谢的重要催化酶。为揭示花生脂肪酸代谢机理,采用RT-PCR技术,首次从花生Arachis hypogaea L.克隆到LACS6（GenBank登录号：KU301860）,分析该基因的结构组成,预测编码氨基酸与其他植物的同源性,采用Real-Time PCR技术对LACS6的组织表达进行研究。结果显示,花生LACS6基因全长2 116bp,包含2 088bp的ORF,编码695个氨基酸,有23个外显子和22个内含子。氨基酸序列比对显示花生LACS6有真核生物酰基辅酶A合成酶保守结构域,并含有保守的激活位点和绑定位点。同源性分析发现花生LACS6与鹰嘴豆、绿豆、大豆、梅等13种物种的氨基酸一致性在79%～87%,进化树分析显示,花生LACS6与鹰嘴豆等豆科植物亲缘较近。实时荧光PCR分析表明,花生LACS6在花生根、茎、叶、子房柄、仁和花等组织均有表达,且差异明显。子房柄和花的表达量极高,与根、茎、叶和仁等组织有极显著差异,花生LACS6组织的表达量大小排序为花〉子房柄〉叶〉仁〉茎〉根。本研究结果为揭示花生脂肪酸代谢和品质改良提供理论依据。

酰基辅酶A合成酶长链家族成员4介导的脂质过氧化导致乳腺癌细胞发生铁死亡

目的探讨酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的敲除和过表达对乳腺癌细胞MBA-MD-231细胞发生铁死亡的影响。方法用CRISPR-Cas9技术敲除ACSL4,PLVX-puro质粒过表达ACSL4;用MTT实验检测铁死亡诱导剂处理WT、ACSL4-KO和ACSL4-OE细胞后的生存率;用流式分析技术检测铁死亡诱导剂RSL3处理细胞后脂质过氧化物的变化;用脂质氧化试剂盒检测铁死亡诱导剂RSL3处理细胞后丙二醛(MDA)变化。结果与WT细胞相比,ACSL4-KO细胞对铁死亡诱导剂的抗性增加,ACSL4-OE细胞对铁死亡诱导剂的敏感性增加;铁死亡诱导剂RSL3处理后,ACSL4-KO细胞脂质过氧化物含量低于ACSL4-OE细胞,ACSL4-KO细胞MDA含量低于WT细胞,ACSL4-OE细胞MDA含量高于WT细胞。结论ACSL4的敲除和过表达会改变MDA-MB-231细胞对铁死亡诱导剂的敏感性,ACSL4可能作为乳腺癌细胞铁死亡的关键因子。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例报告并文献复习

目的提高对极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)临床特征的认识。方法总结1例VLCADD患儿的临床表现、诊断和治疗过程,并综合文献进行分析。结果患儿,女,7个月,表现为频繁发作的呕吐、呕血、双眼凝视,窦性心动过速,低血糖,肝功能及心肌酶异常,最终因症状频繁发作,放弃治疗而死亡。血尿串联质谱分析证实患儿为VLCADD,未行基因检测。结论 VLCADD为婴儿期潜在猝死性疾病之一,需要早期诊断与治疗。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症16例临床及基因型分析

目的:探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)的临床表现、实验室检查、诊治转归以及临床类型与基因型之间的关系。方法:选取2013年6月至2019年6月在我院通过新生儿筛查与临床确诊的VLCADD患儿共16例,回顾性分析患儿临床表现、实验室检查和基因型。结果:16例患儿中男5例,女11例,年龄7个月~10岁。临床类型:心肌型3例(18.75%),肝型5例(31.25%),肌型7例(43.75%),1例失访。心肌型患儿3例均死亡,肝型患儿2例死亡,肌型目前无死亡病例。16例患儿共检出28种不同的基因型,12种为未报道新的突变。28种基因型中点突变24种,小片段缺失3种,单碱基插入1种。结论:VLCADD重型患儿起病早而危重,即使新生儿筛查早期诊断也难以扭转结局。基因型中至少带1个无效等位基因或引起框移的的突变提示临床类型可能偏重。

玉米长链酰基辅酶A合成酶1基因鉴定及其蛋白磷酸化位点检测

【目的】对玉米中长链酰基辅酶A合成酶1(ZmLACS1)基因及其蛋白磷酸化位点进行鉴定,为研究玉米脂肪酸的降解及其利用机制奠定基础。【方法】通过结构域分析查找质谱鉴定到蛋白中的长链酰基辅酶A合成酶1,通过系统发育树分析判断玉米中长链酰基辅酶A合成酶1与拟南芥超家族中长链酰基辅酶A合成酶的同源性,通过质谱分析鉴定该蛋白的磷酸化修饰位点。通过3D建模模拟长链酰基辅酶A合成酶1的结构以及磷酸化位点所在位置。【结果】玉米长链酰基辅酶A合成酶1(ZmLACS1)与拟南芥中的长链酰基辅酶A合成酶1(AtLACS1)具有高度同源性;通过质谱分析鉴定到3个该蛋白的磷酸化位点分别为S360、Y365和S366,同时鉴定到的磷酸化位点位于长链酰基辅酶A合成酶的保守结构域(AMP-binding domain)中,3个磷酸化位点位置一致,位于两个α螺旋中间,处于蛋白结构的关键位置。【结论】磷酸化修饰可能是调节长链酰基辅酶A合成酶1功能的关键性方式之一,ZmLACS1可能与AtLACS1在功能上具有相似性。

以运动后反复血尿起病的极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例报告

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(very long chain acyl-Co A dehydrogenase deficiency,VLCADD)(OMIM#201475)是一种罕见的常染色体隐性遗传病。因发病率低,临床缺乏特异性,往往易漏诊误诊。本研究报道2019年10月南京医科大学附属儿童医院收治的1例运动后反复血尿起病的VLCADD临床资料和基因检测结果,总结该病临床特点并文献复习已报道的病例资料,以提高临床医师对该病的认识,为早期诊断和治疗、遗传咨询提供依据。

长链酰基辅酶A合成酶1介导的脂肪酸活化及相关恶性肿瘤研究进展

哺乳动物长链酰基辅酶A合成酶(ACSL)1是ACSLs第一个被发现的亚型,含量最为丰富。不同组织或细胞定位的ACSL1通过介导脂肪酸活化参与脂质合成或分解代谢,进而调节细胞信号通路和维持细胞生物学活性。脂质代谢重编程可以为肿瘤细胞提供能量、适应微环境和传递细胞信号,而ACSL1可以通过脂质合成和(或)分解途径影响恶性肿瘤发生发展,但是具体机制有待进一步明确。因此,深入探究ACSL1调控恶性肿瘤进展的机制,有望为ACSL1相关恶性肿瘤的诊治提供更多途径。

1例以猝死为表现的极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症报告

为深入学习新生儿早发型极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)的临床特征,为患儿早期得到诊断、干预赢得宝贵的时间,特对本辖区医疗机构1例早发型VLCADD的临床表现、抢救、诊断过程进行总结分析。

儿童极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症诊疗新进展

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)是线粒体脂肪酸β氧化初始阶段酶的缺陷所致脂肪酸代谢障碍疾病。发生在从出生到青春期的任意阶段,临床表型存在异质性,其严重程度和时间具有显著特征。常见的确诊方法是血浆酰基肉碱谱和ACADVL基因分子检测,亦可通过酶学检测、脂肪酸氧化流量分析、二代测序(NGS)、体外探针测定、免疫印迹法等辅助诊断。治疗应避免长时间禁食,补充中链三酰甘油(MCT)、低长链脂肪酸、高碳水化合物饮食,应用提高残余酶活性药物、补充三羧酸循环中间代谢产物等方式改善代谢异常。因此通过早期积极筛查及诊断,指导临床医生对疾病认识并早期干预治疗,可极大地降低患儿的病死率。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿1例护理

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(very long-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency,VLCADD)主要是由于线粒体内脂肪酸β氧化中的关键酶(极长链酰基辅酶A脱氢酶)基因先天缺陷所致,是一种较罕见的常染色体隐性遗传性疾病[1]。VLCADD最早于1993年由Bertrand等[2]报道,目前诊断VLCADD的主要方法是基因分析,85%~93%的患儿可以被检测出基因突变[3]。VLCADD一般包括心肌病型、肝病型、肌病型3种表现类型,但常被误诊为婴儿肝炎综合征、瑞氏综合征、消化系统疾病等[1]。2019年12月,浙江大学医学院附属儿童医院内分泌科收治1例VLCADD患儿,现将护理体会报道如下。

探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症新生儿的临床特征、基因变异及其基因型—表型的关系

目的:探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)的基因型与表型的相关性、实验室检查特点以及临床表现。方法:对2013年6月—2019年6月在我医院收治的7例VLCADD患儿的诊治、基因型、实验室检查、临床表现、预后等进行分析。7例就诊患儿年龄2d~14岁,男4例、女3例,诊断主要依靠应用ACADVL基因突变分析、尿气相质谱有机酸分析(GC-MS)及血串联质谱分析(LC-MS/MS)综合分析。结果:7例患儿均有血十四烯酰基肉碱(C14:1)明显升高,可伴有c10降低,C14、C14:2、C16等升高,同时尿气相质谱有机酸分析可发现二羧酸尿。4例为心肌病型,2例为肝型,1例为肌病型。其中3例心肌病型早期死亡,目前存活的1例心肌病型患儿是通过新生儿疾病筛查得以早期诊断和治疗。7例患儿ACADVL基因突变分析示不同位点均可出现突变,以错义突变为主,ACADVL基因突变谱高度异质。结论:7例VLCADD发病年龄、临床表现和实验室检查结果均有明显差异,血LC-MS/MS和尿GC/MS测定为本病诊断首要实验依据,ACADVL基因为本病基因诊断依据。心肌病型患者早期死亡率极高,肝病型症状较轻,肌病型发病较晚,早期的诊断和治疗对患者的预后有重要意义。

干扰素基因刺激因子对脓毒症状态下小鼠树突状细胞内酰基辅酶A合成酶长链家族成员4介导铁死亡的影响

目的探讨干扰素基因刺激因子(STING)对脓毒症状态下小鼠树突状细胞(DC)内酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)介导铁死亡的影响,为改善由创面感染等因素引发的脓毒症免疫应答失调提供依据。方法该研究为实验研究。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4,按随机数字表法(分组方法下同)分为内毒素/脂多糖(LPS)刺激0 h(不刺激)组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激18 h组和LPS刺激24 h组,用1μg/mL LPS(浓度下同)培养相应时间后,采用蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化STING(p-STING)、STING和ACSL4的蛋白表达;将成功转染含STING基因小干扰RNA(下称siSTING)慢病毒的DC2.4分为siSTING+磷酸盐缓冲液(PBS)组、siSTING+LPS组,将成功转染空载慢病毒的DC2.4分为空载体+PBS组、空载体+LPS组,给予PBS或LPS刺激并培养24 h,同前检测细胞中p-STING、STING和ACSL4的蛋白表达,采用脂质过氧化检测试剂盒观察细胞脂质过氧化程度,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。以上细胞实验中样本数均为3。将80只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠分为假手术+生理盐水组、盲肠结扎穿孔(CLP)+生理盐水组、假手术+C-176组、CLP+C-176组,每组20只。对2个C-176组小鼠先经腹腔注射C-176、2个生理盐水组小鼠先经腹腔注射等量生理盐水,1 h后对2个假手术组小鼠行假手术、对2个CLP组小鼠行CLP术构建脓毒症模型。术后24 h,将每组10只小鼠处死后提取脾脏DC,同前行蛋白表达、脂质过氧化程度、凋亡率检测(样本数均为3);另行苏木精-伊红染色观察小鼠心、肝、肺、肾病理组织损伤。观察各组剩余10只小鼠术后7 d内存活情况。结果LPS刺激24 h组DC2.4中p-STING、STING、ACSL4的蛋白表达及p-STING/STING比值均明显高于LPS刺激0 h组(P<0.05)。培养24 h后,siSTING+LPS组和空载体+PBS组DC2.4中p-STING、STING和ACSL4的蛋白表达均明显低于空载体+LPS组(P<0.05);siSTING+LPS组和空载体+PBS组DC2.4脂质过氧化程度均弱于空载体+LPS组;空载体+PBS组、空载体+LPS组、siSTING+PBS组与siSTING+LPS组DC2.4凋亡率分别为(15.7±3.0)%、(37.8±2.9)%、(13.1±2.1)%与(20.6±1.8)%,其中空载体+PBS组、siSTING+LPS组DC2.4凋亡率均明显低于空载体+LPS组(P<0.05)。术后24 h,CLP+生理盐水组小鼠脾脏DC中p-STING、ACSL4的蛋白表达及p-STING/STING比值均明显高于假手术+生理盐水组和CLP+C-176组(P<0.05),CLP+生理盐水组小鼠脾脏DC中STING的蛋白表达明显高于假手术+生理盐水组(P<0.05);CLP+C-176组和假手术+生理盐水组小鼠脾脏DC脂质过氧化程度均弱于CLP+生理盐水组;假手术+生理盐水组、CLP+C-176组小鼠脾脏DC凋亡率均明显低于CLP+生理盐水组(P<0.05),CLP+C-176组小鼠脾脏DC凋亡率明显高于假手术+C-176组(P<0.05);CLP+生理盐水组小鼠心、肝、肺、肾病理组织损伤均较假手术+生理盐水组明显加重,CLP+C-176组小鼠各脏器上述病理组织损伤均较CLP+生理盐水组明显减轻。CLP+生理盐水组小鼠术后7 d内存活比明显低于假手术+生理盐水组(χ^(2)=8.30,P<0.05)。结论脓毒症状态下,小鼠DC内STING显著活化,ACSL4介导的铁死亡增强;抑制STING活化能够显著降低脓毒症时小鼠DC内ACSL4介导的铁死亡水平,从而改善脓毒症小鼠存活情况。

脂质代谢性肌病一例:极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症

患者女性，16岁。主因反复肌无力伴酸痛发作3年余，于2012年2月24日入院。患者自2008年9月至人院时共计6次出现肌无力伴酸痛感，每次发作前均有劳累或受凉史。主要表现为四肢和抬头无力，伴肌肉酸痛感，休息后症状与体征可完全缓解，发作后间歇性“酱油”尿。外院检查血清肌酸激酶（CK）水平显著升高，最高时达30×103IU／L（25～190IU／L）。2岁时曾出现“抽搐”发作，伴高热，5岁时有类似发作，经丙戊酸钠（德巴金）治疗（具体剂量不详）3年无发作，自行停药。患者外祖父母为近亲结婚，其兄2岁夭折（具体不详）。