血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

非酒精性脂肪性肝病病人血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18水平与氧化应激指标、肝纤维化程度的相关性

目的 探究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)病人血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)与氧化应激指标及肝纤维化程度的相关性。方法 以儋州市人民医院2020年11月至2022年3月收治的92例NAFLD病人为NAFLD组,另选取同期健康体检志愿者90例为对照组。根据NAFLD肝纤维化(NFS)评分将NAFLD组病人分为排除晚期纤维化组(30例)、中间状态组(46例)、晚期纤维化组(16例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA HCG18表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测氧化应激指标水平;Pearson相关性分析NAFLD病人血清lncRNA HCG18与氧化应激指标的关系;Spearman相关性分析NAFLD病人血清lncRNA HCG18与NFS评分的关系。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA HCG18对NAFLD的诊断价值。结果 NAFLD组lncRNA HCG18(1.37±0.29比1.01±0.24)、丙二醛[(6.96±2.13)μmol/L比(4.17±1.04)μmol/L]水平明显高于对照组(P<0.001),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)[(72.39±11.26)U/mL比(98.25±13.92)U/mL]、超氧化物歧化酶(SOD)[(68.36±10.65)U/mL比(92.84±12.89)U/mL]水平明显低于对照组(t=9.11、11.19、13.79、13.98,P<0.001)。排除晚期纤维化组、中间状态组、晚期纤维化组lncRNA HCG18(1.20±0.25比1.39±0.30比1.65±0.35)、丙二醛[(5.64±1.88)μmol/L比(7.12±2.16)μmol/L比(8.99±2.51)μmol/L]水平依次显著升高(F=12.36、13.06,P<0.001),GSH-Px[(81.56±13.58)U/mL比(71.74±10.52)U/mL比(57.06±9.05)U/mL]、SOD[(81.45±12.52)U/mL比(66.52±10.25)U/mL比(49.13±8.29)U/mL]水平依次显著降低(F=24.27、48.42,P<0.001)。Pearson相关性分析显示,NAFLD组血清lncRNA HCG18水平与丙二醛呈正相关(r=0.59,P<0.001),与GSH-Px、SOD均呈负相关(r=-0.57、-0.62,P<0.001);Spearman相关性分析显示NAFLD组血清lncRNA HCG18水平与NFS评分呈正相关(r=0.69,P<0.001)。血清lncRNA HCG18诊断NAFLD的ROC曲线下面积(AUC)为0.85。结论 NAFLD病人血清lncRNA HCG18显著升高,与氧化应激指标及肝纤维化程度存在一定的相关性。

循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与糖尿病肾脏疾病患者血管钙化的相关性分析

目的分析血清循环长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(long non-coding RNA human leucocyte antigen complex group 18,LncRNA HCG18)、微小RNA-185-5p(microRNA-185-5p,miR-185-5p)水平与糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血管钙化的相关性。方法选取2018年10月至2021年9月于上海健康医学院附属崇明医院就诊的DKD患者145例,男性73例,女性72例,依据患者血管钙化情况分为钙化组70例,其中男性38例,女性32例,年龄范围46~78岁,年龄(57.14±14.27)岁;未钙化组75例,其中男性35例,女性40例,年龄范围44~77岁,年龄(59.47±15.06)岁。另选同期健康体检者70名为对照组。荧光定量PCR法检测血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平;采用全自动生化分析仪测定血钙、血磷、血肌酐(serum creatinine,Scr)水平;采用酶标仪测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity c-reactive protein,hs-CRP)及甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)水平;Pearson法分析DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平与血管钙化相关指标的相关性及血清LncRNA HCG18与miR-185-5p的相关性;受试者工作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平对DKD合并血管钙化的诊断价值。结果钙化组、未钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于对照组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于对照组(P<0.05);钙化组血清LncRNA HCG18、血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均高于未钙化组(P<0.05),血清miR-185-5p水平低于未钙化组(P<0.05)。DKD合并血管钙化患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p呈负相关(P<0.05),血清LncRNA HCG18与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈正相关(P<0.05),血清miR-185-5p与血钙、血磷、Scr、ALP、hs-CRP及PTH均呈负相关(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p水平及二者联合诊断DKD合并血管钙化的曲线下面积分别为0.820、0.758、0.880。结论DKD血管钙化患者血清LncRNA HCG18呈高表达、miR-185-5p呈低表达,二者均对DKD患者血管钙化有一定的诊断价值,联合检测诊断价值更高。

长链非编码RNA HCG18对肝癌细胞生物学活性的影响

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体(HCG18)在肝癌细胞中的表达及作用。方法选取23对来自郑州大学第一附属医院的肝癌、癌旁组织和购自中国科学院细胞库的人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97H和正常肝细胞LO2作为研究对象。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌和癌旁组织及肝癌细胞系和正常肝细胞中HCG18的表达。采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默MHCC97H和Hep3B细胞中HCG18的表达,同时分别设置阴性对照组,采用si-NC对其进行转染。采用克隆实验、Transwell体外迁移实验、流式细胞周期和凋亡实验检测细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡率。结果肝癌组织中HCG18表达量较癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.001),肝癌细胞系Hep3B、MHCC97H中HCG18表达量均较正常肝细胞LO2高,差异有统计学意义(均P<0.01)。转染HCG18 siRNA后,肝癌细胞MHCC97H和Hep3B的增殖、侵袭能力均低于转染si-NC的阴性对照组。HCG18 siRNA转染的MHCC97H和Hep3B细胞被阻滞在G_0/G_1期,凋亡率高于转染si-NC的阴性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 HCG18在肝癌细胞中高表达,其可促进肝癌细胞的增殖和侵袭,有望成为肝癌治疗的新靶点。

长链非编码RNA HCG18对人卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对人卵巢癌细胞SKOV3及顺铂耐药细胞SKOV3/DDP耐药性的影响及其作用机制。方法采用RT-PCR检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞中HCG18和miR-449的表达水平。采用HCG18 siRNA转染细胞,经12.5μg/ml顺铂处理48 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况及细胞周期,荧光素酶报告基因实验检测HCG18、miR-449和Wnt1基因之间的靶向作用。结果与人正常卵巢上皮细胞NOEC比较,SKOV3中HCG18表达明显增高(P<0.05),而miR-449的表达明显降低(P<0.05)。HCG18 siRNA转染后,顺铂处理后的SKOV3和SKOV3/DDP细胞活性均明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和G_(2)/M期细胞占比均明显高于对照组(P<0.05)。miR-449 inhibitor转染SKOV3及SKOV3/DDP细胞后,HCG18 siRNA对细胞活性、凋亡和细胞周期的不利影响均被部分逆转(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,HCG18可靶向结合miR-449的3'-UTR区,miR-449可靶向结合Wnt1基因的3'-UTR区。转染HCG18 siRNA可明显上调miR-449的表达水平(P<0.05)。单独转染HCG18 siRNA或miR-449 mimic均可明显下调Wnt1的mRNA表达水平(P<0.05)。结论下调HCG18可通过miR-449/Wnt1信号通路抑制人卵巢癌细胞活性,促进癌细胞凋亡,诱导细胞周期G_(2)/M期阻滞,进而提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及分子机制。方法诱导顺铂耐药胃癌细胞(AGS/DDP),设置pcDNA组、pcDNA-HCG18组、si-NC组、si-HCG18组、DDP+si-NC组、DDP+si-HCG18组、DDP+miR-NC组、DDP+miR-215-3p组、DDP+si-HCG18+anti-miR-NC组、DDP+si-HCG18+anti-miR-215-3p组。以噻唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率和细胞半数抑制浓度;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测HCG18和miR-215-3p表达水平;以荧光素酶报告实验检测HCG18和miR-215-3p的靶向关系;以Transwell检测细胞迁移和侵袭;以蛋白质印迹(Western blot)法检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 AGS/DDP细胞和AGS细胞中顺铂的半数抑制浓度分别为(155.80±9.33),(61.27±6.35)nmol·L^-1,HCG18表达分别为3.06±0.29,1.00±0.07,miR-215-3p表达分别为0.35±0.04,1.01±0.09。DDP+si-HCG18和DDP+si-NC细胞增殖抑制率分别为(42.15±4.13)%,(9.65±0.96)%,细胞迁移数量分别为(41.33±4.11),(86.22±8.38)个,侵袭数分别为(29.56±3.37),(68.33±6.46)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DDP+miR-215-3p组和DDP+miR-NC组细胞增殖抑制率分别为(36.58±3.21)%,(10.36±1.12)%,细胞迁移数量分别为(49.33±4.14)(89.22±8.16)个,侵袭分别为(37.33±3.77)(66.33±6.36)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制lncRNA HCG18表达可通过上调miR-215-3p抑制AGS/DDP细胞增殖、迁移和侵袭,降低其对顺铂耐药性。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18在人胃癌组织表达及其意义

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18（HCG18）在人胃癌组织表达及临床意义。方法收集人胃癌和配对正常胃黏膜组织，采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测组织中HCG18表达水平，分析其表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及脉管内有无癌栓等临床病理因素的关系。结果在108例胃癌组织中HCG18阳性率为77．78％（90／108），而正常胃组织HCG18阳性率为2．78％（3／108）。x^2=142．9，P=0．000，差异有统计学意义。进一步分析HCG18与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及脉管内有无癌栓等临床病理因素的关系。HCG18表达量与患者性别（r=1．122，P=0．289）、年龄（x^=2．233，P=0．135）、肿瘤位置（x^=0．302，P=0．960）、组织分化程度（x^2=1．218，P=0．544）均无明显相关，但与肿瘤直径（x^2=10．072，P=0．002）、肿瘤浸润深度（x^2=9．874，P=0．002）、淋巴结转移（x^2=5．214，P=0．022）、远处转移（x^2=4．800，P=0．028）、TNM分期（x^2=12．115，P=0．007）以及脉管内有无癌栓（x^2=7．902，P=0．005）均显著相关。结论检测HCG18有助于胃癌基因诊断。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

类风湿性关节炎患者滑膜组织lncRNA HCP5表达上调并与免疫细胞浸润相关

目的通过机器学习筛选类风湿性关节炎(RA)滑膜中潜在发病相关长链非编码RNA(lncRNA)及与各种免疫细胞浸润的相关性。方法通过基因表达数据集(GEO)数据库获取多个RA滑膜的基因芯片数据,归一化后通过多种机器学习方法筛选并取交集得到关键的lncRNA。使用估计已知RNA转录本的相对子集识别细胞类型(CIBER⁃SORT)算法计算滑膜中22种免疫细胞浸润情况,计算关键lncRNA与免疫细胞的相关性,最后通过实时定量PCR验证关键lncRNA在RA滑膜细胞中表达情况。结果筛选出RA关键lncRNA人类白细胞抗原复合物P5(lncRNA HCP5)。免疫浸润分析显示,在RA滑膜组织中,CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞比例升高而M2型巨噬细胞的比例减少。lncRNA HCP5的表达与CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞呈正相关。实时定量PCR结果显示在RA滑膜细胞lncRNA HCP5表达上调。结论lncRNA HCP5在RA滑膜细胞表达上调,可能与滑膜免疫细胞的浸润有关。

lncRNA HCG18调节miR-3619-5p/ITGB2轴对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)能否通过调控微小RNA(mi R)-3619-5p/整合素β2(ITGB2)轴参与乳腺癌细胞的迁移和侵袭。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系及人乳腺上皮MCF-10A细胞系,qRT-PCR和Westernblot检测lncRNAHCG18、miR-3619-5p、ITGB2的表达水平;Starbase数据库预测lncRNA HCG18、ITGB2与miR-3619-5p的结合位点;利用转染技术将MCF-7细胞分为Control组、si-NC组、siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组、si-HCG18+miR-3619-5p inhibitor组、miR-NC组、miR-3619-5p mimics组、miR-3619-5p mimics+pcDNA-NC组、miR-3619-5p mimics+ITGB2组,qRT-PCR和Western blot技术检测各组lncRNA HCG18、miR-3619-5p与ITGB2的表达水平,CCK-8、细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞增殖活力、迁移能力和侵袭能力。结果与MCF-10A组比较,MCF-7组细胞lncRNA HCG18、ITGB2表达水平升高,miR-3619-5p表达水平下降(P<0.05);lncRNA HCG18、ITGB2与miR-3619-5p具有结合位点;沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-3619-5p可抑制MCF-7细胞增殖活力、迁移和侵袭,抑制miR-3619-5p表达或过表达ITGB2可部分逆转沉默lncRNAHCG18表达或过表达miR-3619-5p对MCF-7细胞增殖活力、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论lncRNAHCG18在乳腺癌细胞中表达上调,沉默lncRNA HCG18的表达可能通过上调miR-3619-5p表达、下调ITGB2表达抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭。