卵巢癌组织中长链非编码RNA生长阻滞特异性抑制物5、微小RNA-205的表达及意义

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性抑制物5(GAS5)、微小RNA-205(miR-205)在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法前瞻性收集2019年1月至2020年6月收治的初诊卵巢癌患者于术中取其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>2cm);采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA GAS5、miR-205表达情况;问卷调查法统计患者临床病理资料;术后随访2年(截止时间至2022年6月),统计患者生存时间。比较癌组织和癌旁组织lncRNA GAS5、miR-205表达,并采用Pearson相关分析lncRNA GAS5与miR-205的关系;以癌组织lncRNA GAS5、miR-205表达的中位数将卵巢癌患者分为lncRNA GAS5与miR-205高表达组和低表达组,比较不同病理特征卵巢癌患者lncRNA GAS5、miR-205高表达、低表达情况;比较不同lncRNA GAS5、miR-205表达情况的卵巢癌患者生存时间。结果共82例卵巢癌患者纳入本次研究,其中2例失访,最终80例患者进入本次研究。卵巢癌组织lncRNA GAS5相对表达量小于癌旁正常组织,miR-205相对表达量大于癌旁正常组织(P<0.05);Pearson相关分析显示,卵巢癌组织中lncRNA GAS5相对表达量与miR-205相对表达量呈负相关(r=-0.606,P<0.001)。lncRNA GAS5高表达45例,低表达35例;miR-205高表达40例,低表达40例。Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中lncRNA GAS5低表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢组织中miR-205高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05)。lncRNA GAS5低表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.50±0.89)个月,低于高表达患者(23.89±0.09)个月(χ2=5.150,P=0.023)。miR-205高表达量卵巢癌患者2年生存时间(21.71±0.79)个月,低于低表达患者(23.98±0.03)个月(χ2=6.337,P=0.012)。结论lncRNA GAS5、miR-205在卵巢癌组织表达存在一定的差异,其中lncRNA GAS5低表达,miR-205高表达,并影响卵巢癌患者的临床病理特征和预后。

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA和蛋白表达。结果在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达(P<0.05)。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达(P<0.05)。转染si-lncRNA XIST后,lncRNA XIST水平、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);共转染si-lncRNA XIST和miR-340-5p inhibitor后上述指标均得到逆转(P<0.05)。结论lncRNA XIST通过下调miR-340-5p促进卵巢癌细胞EMT。

长链非编码RNA RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞和永生化胃上皮细胞GES-1中RP11-497E19.1表达水平,筛选表达最高的细胞进行后续实验。将HS-746T细胞分为si-NC组和si-RP11-497E19.1组,分别转染阴性对照寡核苷酸或RP11-497E19.1小干扰RNA。集落形成实验和Transwell实验分析转染HS-746T细胞的增殖、侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证RP11-497E19.1与微小RNA(miR)-545-5p的靶向关系。RT-qPCR检测转染HS-746T细胞miR-545-5p的表达。Western blot检测转染HS-746T细胞间质表皮转化因子(c-Met)/胆绿素还原酶(BVR)/活化复制因子2(ATF-2)分子通路相关蛋白的表达。结果:与GES-1细胞比较,HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞中RP11-497E19.1表达水平均上升,且HS-746T细胞RP11-497E19.1表达水平最高(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞活力和细胞侵袭数降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-497E19.1靶向结合miR-545-5p,可负向调控miR-545-5p表达(P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞c-Met/BVR/ATF-2分子通路蛋白c-Met、BVR、p-ATF-2、锌指蛋白1(Snail1)、锌指蛋白2(Snail2)表达降低(均P<0.05)。结论:胃癌细胞中RP11-497E19.1呈高表达,沉默RP11-497E19.1通过靶向miR-545-5p/c-Met/BVR/ATF-2分子通路抑制胃癌HS-746T细胞的增殖及侵袭。

长链非编码RNA X染色体失活特异转录物和微小RNA-146-5p在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)、微小RNA-146-5p(miR-146-5p)的表达及其诊断价值。方法选取甲状腺癌患者92例为研究对象,均行手术切除术,术中收集甲状腺癌组织和癌旁正常组织。分析LncRNA XIST、miR-146-5p水平与患者临床病理特征之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LncRNA XIST、miR-146-5p单独及联合对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达水平为(0.65±0.17),低于癌旁组织的(1.02±0.18),miR-146-5p表达水平为(2.56±0.87),高于癌旁组织的(1.07±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者肿瘤组织中LncRNA XIST表达水平低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,miR-146-5p表达水平高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA XIST、miR-146-5p二者联合诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)大于LncRNA XIST、miR-146-5p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达下调,miR-146-5p表达上调,二者与临床分期、颈部淋巴结转移有关,并对甲状腺癌有一定的诊断价值。

长链非编码RNA生长抑制特异因子5调控微小RNA-137对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)调控微小RNA(miR)-137对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法实验分为对照(control)组、Aβ组、Aβ+si-NC组、Aβ+siGAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组,每组10只。Y迷宫法检测大鼠学习记忆力;实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-qPCR)检测海马CAI区GAS5、miR-137水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测海马CAI区B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白水平;尼氏染色观察神经元形态;Tunel染色观察大鼠神经元凋亡情况;双荧光素酶鉴定miR-137与GAS5的靶向关系。结果与对照组相比,Aβ组、Aβ+si-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05);分别与Aβ组、Aβ+si-NC组相比,Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率降低(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平升高(P<0.05);分别与Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组相比,Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组海马CAI区GAS5mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P<0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P<0.05)。经验证,miR-137与GAS5之间存在靶位点。结论干扰GAS5可上调miR-137从而保护Aβ诱导的大鼠海马神经元损伤,缓解神经元凋亡过程;而进一步下调miR-137可逆转上述过程。

宫颈癌组织长链非编码RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表达变化及其意义

目的观察宫颈癌组织长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表达变化,并探讨其临床意义。方法选取91例宫颈癌患者的宫颈癌组织标本为观察组,癌旁正常组织(距离宫颈癌组织>5cm且经病例检查证实为正常组织)标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组标本中的XIST、miR-101-3p表达,并分析其与宫颈癌临床病理参数的关系。结果观察组、对照组XIST表达量分别为8.97±3.56、7.01±3.82,miR-101-3p表达量分别为8.24±4.22、10.15±3.97。观察组XIST表达量高于对照组(P<0.05),miR-101-3p表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达量呈负相关性(r=-0.716,P<0.05)。肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p表达量分别低于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织(P均<0.05),XIST表达量分别高于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌组织(P均<0.05)。结论宫颈癌组织XIST表达升高、miR-101-3p表达降低。检测宫颈组织XIST、miR-101-3p有助于宫颈癌的病情判断。

宫颈癌DExH-box解旋酶9抑制转录本来源的长链非编码RNA在高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤过程中的作用及其机制

目的探讨宫颈癌DExH-box解旋酶9抑制转录本来源的长链非编码RNA(lnc-CCDST)对高糖诱导的新生小鼠心肌细胞(NMC)中活性氧(ROS)生成和细胞凋亡的影响,以及微RNA-339-5p(miR-339-5p)负向调节lnc-CCDST的机制。方法①构建小鼠1型糖尿病模型后,检测其心肌细胞lnc-CCDST表达,体外实验采用高浓度葡萄糖(35 mmol/L)培养基刺激NMC后测定细胞内lnc-CCDST表达;②小干扰RNA(siRNA)抑制NMC中lnc-CCDST表达再予高糖刺激24 h,测定细胞内ROS含量、胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性,以及DNA片段(DNA fragmentation);③过表达和抑制miR-339-5p,验证其参与lnc-CCDST的调节;④过表达miR-339-5p后再予高糖刺激,检测细胞内ROS生成、caspase-3活性,以及DNA fragmentation;⑤过表达lnc-CCDST和(或)miR-339-5p,分析miR-339-5p对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。结果糖尿病小鼠心肌组织中和高糖诱导后的NMC中lnc-CCDST的表达分别较相应的对照组均显著增加(P值均<0.01);高糖诱导后NMC的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation均显著增加(P值均<0.05),而抑制lnc-CCDST表达可减少高糖诱导的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation增加(P值均<0.05)。在NMC中过表达miR-339-5p,可显著抑制lnc-CCDST表达;抑制miR-339-5p可促进lnc-CCDST表达(P值均<0.05)。此外,过表达miR-339-5p能够显著抑制高糖诱导的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation增加(P值均<0.05),而此作用可被过表达lnc-CCDST所抵消。结论lnc-CCDST参与高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤过程,而这一作用受miR-339-5p负向调节。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

lncRNA DSCAM-AS1通过miR-144-5p/IRS2轴对甲状腺乳头状癌细胞的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)唐氏综合征细胞黏附分子反义1(DSCAM-AS1)通过微小RNA(miR)-144-5p/胰岛素受体底物2(IRS2)轴促进甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生长和侵袭的作用。方法:将PTC细胞株TPC-1随机分为对照组(Control组,完全培养基正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染si-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+inhibitor NC组(si-DSCAM-AS1与inhibitor NC共转染)、si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组(si-DSCAM-AS1与miR-144-5p inhibitor共转染)。RT-qPCR法检测DSCAM-AS1、miR-144-5p和IRS2 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;Western blot检测IRS2蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。结果:与Control组相比,si-DSCAM-AS1组TPC-1细胞DSCAM-AS1表达、吸光度(A450)值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著降低(P<0.05),miR-144-5p表达显著升高(P<0.05)。与si-DSCAM-AS1组相比,si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组A450值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著升高(P<0.05),miR-144-5p表达显著降低(P<0.05)。DSCAM-AS1靶向负调控miR-144-5p表达,miR-144-5p靶向负调控IRS2表达。结论:沉默DSCAM-AS1可能通过上调miR-144-5p来抑制IRS2蛋白的表达,从而抑制PTC细胞生长和侵袭。

慢性心力衰竭患者血清LncRNA生长抑制特异性转录本5表达与心肌重构及心功能的相关性研究

目的:探究长链非编码RNA生长抑制特异性转录本5(LncRNA GAS5)在慢性心力衰竭(CHF)患者的表达水平及与心肌重构、心功能的相关性。方法:选择本院2018年9月至2020年7月,收治的141例CHF患者为心力衰竭组;并以本院同时间段内的149例健康体检者为对照组。分析两组一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清中LncRNA GAS5表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α、IL-10水平;比较两组心肌重构指标左心室重量(LVM)、LVEF水平;分析CHF患者血清LncRNA GAS5水平、LVM、LVEF与TNF-α、IL-10及LncRNA GAS5水平与LVM、LVEF的关系;Logistic回归分析CHF的影响因素。结果:心力衰竭组患者血清TNF-α及LVM水平明显高于对照组(P<0.05),血清LncRNA GAS5、IL-10、LVEF水平明显低于对照组(P<0.05);CHF患者血清LncRNA GAS5、LVEF与TNF-α水平,LVM与LncRNA GAS5、IL-10水平均呈负相关(P<0.05);LVM与TNF-α水平,LncRNA GAS5、LVEF与IL-10水平,LncRNA GAS5与LVEF水平均呈正相关(P<0.05);TNF-α、LVM为影响CHF发生的危险因素(P<0.05),LncRNA GAS5、LVEF是影响CHF发生的保护因素(P<0.05)。结论:LncRNA GAS5在CHF患者血清中呈低表达,与TNF-α、IL-10呈一定相关性,三者均可能在心肌重构、心功能变化中发挥作用。

lncRNA HOTAIRM1通过miR-17-5p调控慢性粒细胞白血病细胞的生长和转移

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)HOX反义基因间RNA髓系1(HOTAIRM1)调控慢性粒细胞白血病(CML)细胞生长和转移的可能分子机制。方法qRT-PCR法检测60例CML患者和60例健康体检者的血清HOTAIRM1和miR-17-5p水平。将CML细胞系(K562细胞)作如下分组:①对照组(未转染)、siRNA-NC组(转染siRNA-NC)、siRNA-HOTAIRM1组(转染siRNA-HOTAIRM1)、pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC)和pcDNA-HOTAIRM1组(转染pcDNA-HOTAIRM1);②对照组(未转染)、NC-mimic组(转染NC-mimic)、miR-17-5p-mimic组(转染miR-17-5p-mimic)、NC-inhibitor组(转染NC-inhibitor)和miR-17-5p-inhibitor组(转染miR-17-5p-inhibitor);③siRNA-HOTAIRM1+NC-inhibitor组(共转染siRNA-HOTAIRM1和NC-inhibitor)和siRNA-HOTAIRM1+miR-17-5p-inhibitor组(共转染siRNA-HOTAIRM1和miR-17-5p-inhibitor)。细胞不同转染后,通过MTT实验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染色实验检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测细胞中HOTAIRM1、miR-17-5p、WNT5A和β-catenin的mRNA水平,Western blot检测细胞中WNT5A和β-catenin的蛋白水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HOTAIRM1与miR-17-5p、miR-17-5p与WNT5A的靶向关系。结果与健康体检者相比,CML患者的血清HOTAIRM1水平升高(t=12.253,P<0.001),血清miR-17-5p水平降低(t=15.601,P<0.001)。与对照组或siRNA-NC组相比,siRNA-HOTAIRM1组HOTAIRM1相对表达量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均降低(P<0.05),而miR-17-5p相对表达量升高(P<0.05)。与对照组或pcDNA-NC组相比,pcDNA-HOTAIRM1组HOTAIRM1相对表达量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05),而miR-17-5p相对表达量降低(P<0.05)。HOTAIRM1靶向抑制miR-17-5p,miR-17-5p靶向抑制WNT5A(P<0.05)。与对照组或NC-mimic组相比,miR-17-5p-mimic组miR-17-5p相对表达量升高,WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数量降低(均P<0.05)。与对照组或NC-inhibitor组相比,miR-17-5p-inhibitor组miR-17-5p相对表达量降低,WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量升高,相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高(均P<0.05)。与si-HOTAIRM1+NC-inhibitor组相比,si-HOTAIRM1+miR-17-5p-inhibitor组相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量升高(均P<0.05)。结论HOTAIRM1可能通过miR-17-5p/WNT5A/β-catenin信号通路来调节CML细胞的生长和转移。

长链非编码RNA在肝纤维化发生发展中的作用研究进展

肝纤维化是指肝细胞外基质的弥漫性过度沉积与异常分布,是肝脏对慢性损伤的病理性修复反应,肝星状细胞(HSCs)的激活是其发生的重要环节。非编码RNA(ncRNA)已成为细胞信号传导和相关人类疾病的重要调节因子,长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的ncRNA,过去认为其不具备蛋白编码能力,近年认为其可通过编码小肽调控细胞增殖。lncRNA参与各种器官的纤维化,包括肝脏、心脏、肺和肾脏。在肝纤维化过程中,lncRNA参与调节多种细胞生物学过程,根据作用可分为三类。大部分lncRNA发挥肝纤维化促进作用,如肺腺癌转移相关转录本1、肝纤维化相关的lncRNA1、浆细胞瘤变型异位因子1等;少部分lncRNA发挥抑制作用,如母系表达基因3、生长停滞特异转录因5等;极少数lncRNA具备促进和抑制肝纤维化发生的双重作用。

LncRNA GAS5吸附miR-221-3p抑制肝细胞肝癌增殖及其启动子甲基化状态

目的:研究长链非编码RNA-生长抑制特异性基因5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,同时研究其启动子区域的甲基化状态。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测GAS5在肝癌细胞株和肝癌组织中的表达,在肝癌细胞中过表达GAS5,CCK-8法检测细胞增殖,直线划痕法检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭。通过双荧光素酶法检测GAS5与miR-221-3p的靶向结合。通过不同剂量甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)的加入了解GAS5启动子区域的甲基化状态。结果:GAS5在肝癌细胞株和肝癌组织中表达显著下调。过表达GAS5明显抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及克隆形成。GAS5存在与miR-221-3p的互补结合位点。随着5-Aza-dC浓度的增加,GAS5相对表达量呈现显著上调。结论:GAS5在肝癌组织和细胞系中的表达显著下调,可能与其CpG岛甲基化有关。GAS5可作为分子海绵吸附miR-221-3p抑制肝癌细胞增殖。

LncRNA GAS5对结直肠癌5-FU耐药的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)对结直肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的作用。方法 选取人结肠癌细胞系HCT-8和SW480,建立5-FU耐药细胞株,构建LncRNA GAS5过表达结直肠癌细胞模型。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测LncRNA GAS5在结直肠癌5-FU耐药细胞系中表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 RT-PCR检测显示,LncRNA GAS5在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中的表达水平低于正常结肠细胞,差异有统计学意义(P<0.05);LV5-GAS5组HCT-8细胞、SW480细胞中LncRNA GAS5表达高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验检测显示,LncRNA GAS5能明显抑制HCT-8细胞和SW480细胞的增殖(P<0.05)。AnnexinV/PI双重染色及流式细胞术结果显示,在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中LV5-GAS5组的细胞凋亡比例高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LncRNA GAS5在结直肠癌5-FU耐药中发挥重要作用,能抑制结肠癌细胞系的增殖,并促进细胞凋亡。

LncRNA XIST调节miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞增殖、迁移及成骨分化的影响

目的探讨长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)调控miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞(hOB)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法将hOB细胞分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-XIST组、pcDNA-XIST+miR-NC组、pcDNA-XIST+miR-545-3p mimic组;qRT-PCR检测细胞中XIST、miR-545-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞中SMAD5、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)蛋白及细胞核中p-SMAD5蛋白表达;茜素红S染色检测矿化结节形成;双荧光素酶报告基因实验分别验证XIST和miR-545-3p、miR-545-3p和SMAD5的关系。结果与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-XIST组hOB细胞中XIST表达、OD_(450)值(48、72 h)、划痕愈合率、SMAD5、ALP、Runx2、OCN蛋白及核p-SMAD5蛋白表达升高,miR-545-3p表达降低,矿化结节形成增多(P<0.05);上调miR-545-3p减弱了过表达XIST对hOB细胞增殖、迁移及成骨分化的促进作用;XIST靶向负调控miR-545-3p表达,miR-545-3p靶向调控SMAD5表达。结论过表达XIST可能通过海绵化miR-545-3p来上调SMAD5表达,进而促进hOB细胞增殖、迁移及成骨分化。

LncRNA NEAT1通过调节miR-125b-5p/IGFBP5轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移的实验研究

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)通过调节微小核糖核酸(micro RNAs,miR)-125b-5p/胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulinlike growth factor binding protein 5,IGFBP5)轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测血管瘤组织(2016年3月~2019年3月收集,n=18)、瘤旁组织样本(2016年3月~2019年3月收集,n=18)以及人脐静脉内皮细胞HUVES,人血管瘤内皮细胞HemECs,HDEC中NEAT1,miR-125b-5p及IGFBP5蛋白表达。构建沉默NEAT1,同时沉默NEAT1和miR-125b-5p的HemECs细胞系,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、台盼蓝染色、流式细胞术、划痕愈合实验、Western blot分别观察NEAT1和miR-125b-5p对HemECs细胞增殖、凋亡、迁移及IGFBP5,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1与miR-125b-5p,mi R-125b-5p与IGFBP5的关系。结果 与瘤旁组织比较,血管瘤组织中NEAT1(2.87±0.22 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.45±0.14 vs 0.27±0.02)表达水平升高,miR-125b-5p(0.24±0.02 vs 1.00±0.00)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=35.400~161.220,均P <0.05);与HUVES细胞比较,HemECs,HDEC细胞中NEAT1(2.76±0.24,1.78±0.13 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.31±0.15,0.78±0.06 vs 0.24±0.02)表达升高,miR-125b-5p表达(0.19±0.02,0.45±0.04 vs 1.00±0.00)降低,差异具有统计学意义(t=17.320~99.204,14.697~33.680,均P<0.05),且HemECs细胞中NEAT1和IGFBP5蛋白表达量最高,miR-125b-5p表达量最低,因此,选取HemECs细胞为研究对象;与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1(0.32±0.02 vs 1.01±0.12)表达、A值(0.45±0.04 vs 1.13±0.11)、细胞生长率(32.28%±2.79%vs 99.41%±0.22%)、划痕愈合率(20.33%±1.23%vs 49.24%±2.43%)及IGFBP5(0.41±0.04 vs 1.31±0.20),PCNA(0.36±0.04 vs 1.27±0.14),Bcl-2(0.48±0.04 vs 1.39±0.16)和MMP-9(0.21±0.02 vs 1.09±0.10)蛋白表达降低,mi R-125b-5p(1.87±0.15 vs 1.02±0.10)表达、细胞凋亡率(45.58%±3.34%vs 12.36%±1.07%)升高,差异具有统计学意义(t=10.809~58.755,均P <0.05);下调miR-125b-5p减弱了沉默NEAT1对HemECs细胞增殖、迁移的抑制及对细胞凋亡的促进作用(t=9.218~15.010,均P <0.05);NEAT1与miR-125b-5p,miR-125b-5p与IGFBP5存在靶向调控关系。结论 沉默NEAT1通过上调miR-125b-5p来抑制IGFBP5表达,从而抑制HemECs细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡。

lncRNA CASC9通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法采用RT-qPCR检测CASC9在食管鳞状细胞癌组织、配对癌旁组织、食管鳞状细胞癌细胞系(KYSE450、KYSE150、EC190、EC9706)及正常人食管鳞状上皮细胞株(Het-1A)中的表达;敲降CASC9在KYSE450细胞中的表达水平,检测下调CASC9对细胞增殖、侵袭及其细胞周期的影响;采用Western blotting法检测SOX9蛋白及周期蛋白2(CCND1、CCNA、CDK4、CDK6)的表达;通过CCK-8和Transwell方法检测KYSE450细胞的增殖和侵袭能力,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-424-5p与CASC9或SOX9的靶向关系。结果食管鳞状细胞癌组织与细胞系高表达CASC9(P<0.01),敲降CASC9可抑制KYSE450细胞增殖和侵袭能力、并阻滞细胞周期G1/S期(P<0.01)。双荧光素酶报告基因法证实,CASC9靶向miR-424-5p、并下调其表达,SOX9是miR-424-5p的靶基因;敲降CASC9可上调miR-424-5p、并抑制SOX9的表达(均P<0.01)。结论lncRNA CASC9可通过下调miR-424-5p,并促进SOX9表达而刺激KYSE450细胞的增殖、侵袭。

HOXA5和miR-196a-5p基因环路在卵巢癌诊断及治疗中的价值

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,其死亡率占妇科肿瘤首位。因此,找到更准确的卵巢癌诊断及治疗方法对提高卵巢癌患者的生存率有重要意义。随着人们对卵巢癌发病机制的深入研究,同源异形盒基因A5和非编码小分子RNA-196a-5p引起了临床工作者的广泛关注,同源异形盒基因A5是同源盒基因家族中的一员,在胚胎发育及细胞分化中发挥重要的作用;非编码小分子RNA-196a-5p在癌症演变中也发挥着重要作用,这为卵巢癌今后的诊断和治疗提供了新思路。因此,本综述主要阐述同源异形盒基因A5和非编码小分子RNA-196a-5p基因环路与卵巢癌发生发展的关系,并为卵巢癌的早期诊治及判断预后提供依据。