长链的非编码RNA生长停滞特异性转录本5在骨关节炎中的研究进展

骨关节炎(OA)是一种以软骨退变、骨重建为主要病理特点的慢性关节疾病。目前没有可治愈该疾病的药物及手段,治疗策略有限的根本原因是对其潜在发病机制的认识不足。长链的非编码RNA(LncRNAs)被认为是许多疾病中的一类新的调控因子,是目前研究OA发病机制的一个重要切入点。LncRNA生长停滞特异性转录本5(Cas5)参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,是一种在软骨细胞中特异性高表达的LncRNA。然而,由于LncRNA Cas5作用机制复杂,其与OA相关具体分子机制目前仍不明确。该文针对LncRNA Cas5在OA中的软骨细胞凋亡、软骨基质代谢成骨分化及治疗方面的作用进行综述。

子痫前期患者胎盘组织中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5表达水平及临床意义

目的检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2018年6月至2020年5月在监利市人民医院行剖宫产的50例非重度PE患者(非重度PE组)、50例重度PE患者(重度PE组)及50例正常妊娠孕妇(对照组)作为研究对象。分娩后收集胎盘组织,检测胎盘组织螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积;实时荧光定量聚合酶链反应法检测胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平;Pearson法分析PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5水平与螺旋动脉管壁厚度、螺旋动脉管腔面积的相关性。结果与对照组比较,非重度PE组、重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平均升高,螺旋动脉管腔面积均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与非重度PE组比较,重度PE组胎盘组织螺旋动脉管壁厚度及lncRNA GAS5表达水平升高,螺旋动脉管腔面积降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5表达水平与螺旋动脉管壁厚度存在正相关(r=0.485,P=0.000),与螺旋动脉管腔面积存在负相关(r=-0.614,P=0.000)。结论PE患者胎盘组织中lncRNA GAS5高表达,可能通过影响螺旋动脉灌注影响PE的发生发展,对其水平进行检测有助于临床判断PE患者病情。

循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5在宫颈癌中的作用研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类由RNA聚合酶Ⅱ合成的含200多个核苷酸的RNA。LncRNA在多种恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要生物学功能。生长停滞特异性转录因子5(GAS5)为lncRNA的一种,可发挥肿瘤抑制作用,其在包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤中下调。本文就GAS5在宫颈癌中生物学功能的研究进展进行综述,旨在为宫颈癌的诊断、治疗及预后评估提供参考和方向。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5在妇科恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,已被证明广泛参与各种生理过程以及疾病病理状态。lncRNA生长停滞特异性转录本5(GAS5)作为其中一种lncRNA,能够抑制恶性肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间充质转化,促进细胞凋亡,在恶性肿瘤进展中发挥抑癌作用。lncRNA GAS5在宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌中显著低表达,与临床病理特征密切相关,其低表达常预示患者预后不良,并能通过不同作用机制参与妇科恶性肿瘤的发生、发展过程。lncRNA GAS5在宫颈癌和卵巢癌的诊断和治疗中已显示出一定的应用价值,未来可能成为研究热点之一。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

慢性心力衰竭患者血清LncRNA生长抑制特异性转录本5表达与心肌重构及心功能的相关性研究

目的:探究长链非编码RNA生长抑制特异性转录本5(LncRNA GAS5)在慢性心力衰竭(CHF)患者的表达水平及与心肌重构、心功能的相关性。方法:选择本院2018年9月至2020年7月,收治的141例CHF患者为心力衰竭组;并以本院同时间段内的149例健康体检者为对照组。分析两组一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清中LncRNA GAS5表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α、IL-10水平;比较两组心肌重构指标左心室重量(LVM)、LVEF水平;分析CHF患者血清LncRNA GAS5水平、LVM、LVEF与TNF-α、IL-10及LncRNA GAS5水平与LVM、LVEF的关系;Logistic回归分析CHF的影响因素。结果:心力衰竭组患者血清TNF-α及LVM水平明显高于对照组(P<0.05),血清LncRNA GAS5、IL-10、LVEF水平明显低于对照组(P<0.05);CHF患者血清LncRNA GAS5、LVEF与TNF-α水平,LVM与LncRNA GAS5、IL-10水平均呈负相关(P<0.05);LVM与TNF-α水平,LncRNA GAS5、LVEF与IL-10水平,LncRNA GAS5与LVEF水平均呈正相关(P<0.05);TNF-α、LVM为影响CHF发生的危险因素(P<0.05),LncRNA GAS5、LVEF是影响CHF发生的保护因素(P<0.05)。结论:LncRNA GAS5在CHF患者血清中呈低表达,与TNF-α、IL-10呈一定相关性,三者均可能在心肌重构、心功能变化中发挥作用。

非小细胞肺癌组织中lncRNA GAS5、LHPP表达与上皮间质化相关性及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中长链非编码核糖核酸生长抑制特异性基因5(lncRNA GAS5)、磷酸赖氨酸磷酸组氨酸无机焦磷酸盐磷酸酶(LHPP)表达与上皮间质化(EMT)相关性及临床意义。方法收集2018年6月至2020年1月在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC 90例患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测lncRNA GAS5、LHPP和EMT相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和波形蛋白(VIM)]表达。分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与临床病理特征的关系,并通过Pearson相关性分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与EMT相关蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法绘制不同lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA、E-Cad mRNA表达低于癌旁组织,N-Cad mRNA、VIM mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5与E-Cad mRNA表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),与N-Cad mRNA、VIM mRNA表达呈负相关(r=-0.699、-0.689,P<0.001);lncRNA GAS5与LHPP mRNA表达呈正相关(r=0.651,P<0.001)。不同分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移的NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,lncRNA GAS5高表达组的3年总生存率[68.18%(30/44)]高于lncRNA GAS5低表达组的3年总生存率[36.96%(17/46)];LHPP mRNA高表达组的3年总生存率[67.39%(31/46)]高于LHPP mRNA低表达组的3年总生存率[36.36%(16/44)],差异有统计学意义(χ^(2)=10.274、10.322,P<0.05)。低分化、肿瘤TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移为NSCLC患者死亡的独立危险因素,lncRNA GAS5≥1.32、LHPP mRNA≥1.12为独立保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA低表达,与EMT相关蛋白表达、分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为NSCLC诊治的新靶点。

长链非编码RNA GAS5在肿瘤中的研究进展

生长阻滞特异性转录因子5(growth arrest-special transcript 5, GAS5)属于长链非编码RNA,位于人类基因组1号染色体上,在细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物过程中起重要调控作用.新近研究表明, GAS5在大多数肿瘤组织中低表达,其与肿瘤发生、发展及预后密切相关.探讨GAS5在肿瘤中的作用机制,有望为我们提供肿瘤诊治的新思路.本文就GAS5在肿瘤中的研究进展作一简述.

长链非编码RNA GAS5与冠心病相关病变的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类不具有编码蛋白质能力的RNA,可以在多个层面参与基因的表达调控。生长阻滞特异性转录本5(GAS5)属于lncRNA家族,在人类多种组织中广泛表达,与多种疾病(肿瘤、心脑血管病等)密切相关。GAS5可能是一种潜在的生物标志物,对冠心病的诊断、治疗及预后评估具有重要意义,在动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血再灌注损伤等冠心病相关病变中起非常重要的作用。因此,深入研究GAS5在冠心病相关病变中的作用机制,可以为冠心病的诊疗提供新思路。

鼻咽癌患者血清中长链非编码RNA GAS5的表达变化及其意义

目的观察鼻咽癌患者血清中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)的表达变化,并探讨其意义。方法采用qRT-PCR法检测鼻咽癌患者、健康志愿者血清lncRNA-GAS5,分析血清lncRNA-GAS5表达与鼻咽癌临床病理参数及患者预后、生存的关系。结果鼻咽癌患者、健康志愿者血清lncRNA-GAS5相对表达量分别为3.69±1.33、7.13±1.93,两者比较,P<0.05。血清lncRNA-GAS5表达与鼻咽癌TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。单因素分析显示,lncRNA-GAS5表达水平、肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期与鼻咽癌患者预后有关(P均<0.05);多因素分析显示,lncRNA-GAS5的低表达、肿瘤直径≥3 cm与鼻咽癌患者不良预后有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier结果显示,血清lncRNA-GAS5高表达及低表达患者总生存期分别为50.3、27.5个月,两者比较,P<0.05。结论鼻咽癌患者血清中lncRNA-GAS5表达降低,其表达与鼻咽癌TNM分期、淋巴结转移及患者预后、生存密切相关,此指标可作为鼻咽癌患者新的预后标志物。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5在糖尿病肾病进展中作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)在糖尿病肾病(DN)进展中的作用机制。方法选取10只健康5周龄大鼠为研究对象。将大鼠分为模型组与对照组,每组各5只。构建DN细胞模型,并分为LncRNA GAS5干扰组、LncRNA GAS5过表达组与阴性对照组。通过实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测LncRNA GAS5、miR⁃135a⁃5p及沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达水平。采用双荧光素酶报告实验验证miR⁃135a⁃5p与LncRNA GAS5、SIRT1之间的相互作用。结果模型组肾组织、血清外泌体、人肾小球系膜细胞(HMC)及上清外泌体中LncRNA GAS5表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲减或过表达LncRNA GAS5后,LncRNA GAS5过表达组HMC细胞中miR⁃135a⁃5p表达水平相应高于或低于阴性对照组,而SIRT1表达水平相应低于或高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。感染miR⁃135a⁃5p或转染siSIRT1后,LncRNA GAS5过表达组对HMC细胞增殖的抑制作用及对α⁃平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白、α(I)胶原表达的抑制作用均弱于阴性对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA GAS5可通过miR⁃135a⁃5p/SIRT1通路调控DN的进展。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录子5负调控核仁磷酸蛋白1对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA)生长停滞特异性转录子5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)负调控核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)对胃癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响。方法 选取正常人胃黏膜细胞系GES-1和人胃癌细胞系BG3-823、MGC-803、AGS作为研究对象,qRT-PCR法检测各细胞中LncRNA GAS5水平。诱导AGS细胞DDP耐药(AGS/DDP)后,将实验分为对照组、空质粒组(BC组)、GAS5无义干扰组(pLJM-GAS5NC组)、GAS5过表达组(pLJM-GAS5组),MTT法检测DDP对AGS、AGS/DDP细胞增殖能力的影响;Western blot法检测AGS、AGS/DDP细胞中NPM1、多药耐药基因1 (multidrug resistance 1,MDR1)、耐药基因切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)、多药耐药相关蛋白1 (multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、神经性钙黏附素(N-cadherin)水平。结果 与人正常胃黏膜GES-1细胞相比,人胃癌BG3-823、AGS细胞中LncRNA GAS5水平明显降低,其中AGS细胞中LncRNA GAS5水平最低,因此选择AGS细胞进行后续试验。与对照组相比,BC和pLJM-GAS5 NC组AGS细胞中LncRNA GAS5水平明显降低,NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平显著升高;与BC组和pLJM-GAS5 NC组相比,pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞中LncRNA GAS5水平显著升高,NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平显著降低;同浓度DDP(除0μmol/L外)处理后,与对照组相比,BC、pLJM-GAS5 NC组AGS/DDP细胞增殖抑制率明显降低;与BC、pLJM-GAS5 NC组相比,pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞增殖抑制率显著升高。DDP对pLJM-GAS5组AGS/DDP细胞48 h的半抑制浓度(IC_(50))为(65.38±5.04)μmol/L,明显低于BC[(120.74±4.17)μmol/L]、pLJM-GAS5 NC组[(120.24±4.29)μmol/L]。结论 上调AGS/DDP细胞中LncRNA GAS5水平,可逆转AGS/DDP细胞耐药性,可能与下调NPM1的表达有关。

肺炎支原体肺炎患儿血清lncRNA GAS5、TIMP3水平变化及临床意义

目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)生长抑制特异性基因5(GAS5)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)3水平变化及临床意义。方法 选取2021年1月至2023年10月榆林市星元医院儿科收治的MPP患儿150例作为MPP组,根据病情严重程度分为重症组(98例)和轻症组(52例),根据28 d预后情况分为不良预后组(31例)和良好预后组(119例),另选取同期60例健康儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应与酶联免疫吸附试验分别检测血清lncRNA GAS5及TIMP3水平。通过Pearson相关性分析血清lncRNA GAS5、TIMP3水平在MPP患儿中的相关性,采用多因素Logistic回归分析影响MPP患儿不良预后的因素,受试者工作特征曲线分析血清lncRNA GAS5、TIMP3水平对MPP患儿不良预后的预测价值。结果 重症组血清lncRNA GAS5、TIMP3水平低于轻症组和对照组(P<0.05),轻症组血清lncRNA GAS5、TIMP3水平低于对照组(P<0.05)。MPP患儿血清lncRNA GAS5与TIMP3水平呈正相关(r=0.633,P<0.001)。150例MPP患儿28 d不良预后发生率为20.67%(31/150)。不良预后组重症比例、峰值体温、降钙素原、C反应蛋白水平高于良好预后组(P<0.05),住院时间长于良好预后组(P<0.05),lncRNA GAS5、TIMP3水平低于良好预后组(P<0.05)。重症、降钙素原水平升高为MPP患儿不良预后的独立危险因素(P<0.05),lncRNA GAS5和TIMP3水平升高为其独立保护因素(P<0.05)。血清lncRNA GAS5联合TIMP3水平预测MPP患儿不良预后的曲线下面积为0.878,大于血清lncRNA GAS5、TIMP3水平单独预测的0.780、0.778(P<0.05)。结论 MPP患儿血清lncRNA GAS5、TIMP3水平降低与病情加重及不良预后密切相关,血清lncRNA GAS5联合TIMP3对MPP患儿不良预后有较高的预测价值。

血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达对非小细胞肺癌的诊断价值

目的:探讨血浆lncRNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)和lncRNA-CCAT1表达水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的临床诊断价值。方法:分别收集60例NSCLC及60例良性肺病患者的血浆样本,采用实时荧光定量PCR法检测血浆中lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1的表达水平,比较两者在NSCLC组和良性肺病组的表达差异。构建受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线图确定lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的折点(cut off),计算两种lncRNA分别诊断及联合诊断NSCLC的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值和阴性预测值,同时与经典肿瘤标志物癌胚抗原、细胞角蛋白19(Cyfra21-1)进行比较,评估这两种lncRNA诊断肺癌的效能。结果:与良性肺病患者相比,NSCLC患者血浆中lncRNA-GAS5表达显著下调,而lncRNA-CCAT1表达明显上调(P均<0. 05)。除血浆lncRNA-GAS5表达与吸烟相关外,血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达与NSCLC患者的性别、年龄、组织分型、临床分期均无相关性(P均> 0. 05)。lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1的ROC曲线下面积(AUC)略高于癌胚抗原和Cyfra21-1。血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的敏感性分别为86. 7%和88. 3%,高于癌胚抗原和Cyfra21-1(66. 7%和45. 0%)。相比于单独诊断,两种lncRNA联合诊断时敏感性提升到91. 7%,但特异性略有降低。当lncRNA-GAS5及lncRNA-CCAT1联合传统肿瘤标志物时诊断效能增加,且敏感性得到明显提升,特异性保持良好。结论:lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1在NSCLC患者血浆中的表达水平与良性肺病患者比较有显著差异,对NSCLC的诊断有一定价值。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

LncRNA XIST调节miR-574-5p/TLR4轴对呼吸道合胞病毒感染的支气管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码(long non-coding,Lnc)核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)X-非活性特异性转录本(X-inactive specific transcript,XIST)调节微小RNA(microRNA,miR)-574-5p/Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR4)轴对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡的影响。方法将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,16HBE)分为阴性对照(negative control,NC)组、RSV感染(RSV infection,RSV)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组、XIST小干扰RNA(XIST small interfering RNA,si-XIST)组、siXIST+抑制剂阴性对照(inhibitor negative control,inhibitor-NC)组、si-XIST+miR-574-5p抑制剂(miR-574-5p inhibitor)组,实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA XIST、miR-574-5p表达;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的分泌;双荧光素酶报告基因实验验证miR-574-5p与LncRNA XIST和TLR4的关系;蛋白质印迹检测TLR4、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B lymphoblastoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme 3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果相较于NC组,RSV组、si-NC组LncRNA XIST、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达升高,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达降低(P均<0.05);相较于si-NC组,si-XIST组LncRNA XIST表达、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达降低,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达升高(P均<0.05);下调miR-574-5p可逆转敲低LncRNA XIST对RSV感染的16HBE细胞凋亡和炎症反应的抑制(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-574-5p与LncRNA XIST、miR-574-5p与TLR4存在靶向调控关系(P<0.05)。结论LncRNA XIST在RSV感染的16HBE细胞中上调表达,敲低LncRNA XIST可能通过上调miR-574-5p来下调TLR4表达,抑制RSV感染后的16HBE细胞凋亡。

黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。

盐酸多奈哌齐调控lncRNA GAS5对血管性痴呆小鼠认知功能障碍和炎症反应的影响

目的:探究盐酸多奈哌齐(DPH)对血管性痴呆(VD)小鼠认知功能障碍的影响及其作用机制。方法:75只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为5组:假手术组(Sham组)、VD模型组、DPH组(VD+DPH组)、DPH+长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5(lncRNA GAS5)无关片段组(VD+DPH+lncRNA GAS5 NC组)以及DPH+lncRNA GAS5过表达组(VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组),每组15只。采用小鼠双侧颈总动脉缩窄法构建VD模型。造模成功后2 d, DPH组小鼠给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。Sham组和VD模型组小鼠给予等量的生理盐水灌胃处理。VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组小鼠脑室注射lncRNA GAS5 (每只1 010 pfu)后构建VD模型,2 d后给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。VD+DPH+lncRNA GAS5 NC组小鼠脑室注射lncRNA GAS5 NC后构建VD模型,2 d后给予DPH 1 mg/(kg·d)灌胃8周。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脑组织中lncRNA GAS5表达水平;Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;分光光度法测定脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px);酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠脑组织海马区域病理学改变。结果:与Sham组相比,VD模型组小鼠脑组织lncRNA GAS5水平和MDA含量,血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显升高(P<0.01),学习记忆能力、SOD、GSH-Px含量明显降低(P<0.01),且海马区域病理损伤明显。与VD模型组相比,VD+DPH组小鼠上述指标均被明显逆转,海马区域损伤减轻。与VD+DPH组相比,VD+DPH+lncRNA GAS5 OVE组小鼠lncRNA GAS5水平和MDA含量,血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量均升高(P<0.01),学习记忆能力、SOD、GSH-Px含量明显降低(P<0.01),且海马区域病理损伤加重。结论:DPH能够改善VD小鼠认知功能障碍和炎症反应,其机制与抑制lncRNA GAS5表达相关。