术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

长链非编码RNA在阿尔茨海默病发生发展中的作用研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病,临床上主要表现为记忆力及认知功能下降,并逐渐丧失自理能力[1]。随着全球人口结构老龄化加剧,预计2050年AD全球患病人数将达到1亿人。AD的病理学特征主要包括β淀粉样蛋白(Aβ)在大脑中沉积、神经元内tau蛋白过度磷酸化,以及神经元缺失等[2]。

长链非编码RNA MALAT1与微小核糖核酸-146a相互作用对子痫前期滋养细胞功能的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)转移相关肺腺癌转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)与微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-146a相互作用在对子痫前期(preecampsia,PE)滋养细胞功能的影响及机制研究。方法:体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3细胞,分4组对JEG-3细胞进行转染,分别为Control、sh-MALATl、miR-146a-5p inhibitor和sh-MALATI+miR-146a-5p inhibitor组,其中sh-MALATl组转染sh-MALATl,miR-146a-5p inhibitor组转染miR-146a-5p inhibitor,sh-MALATl+inhibitor组共同转染sh-MALATl与miR-146a-5p inhibitor,Control组加入等量空载体。通过QPCR检测mRNA水平;生物信息预测MALATl与miR-146a-5p的靶向关系;通过CCK8实验检测各组质粒转染JEG-3细胞后对其增殖能力的影响;利用Western Blot技术检验不同方式处理后,JEG-3细胞内蛋白的表达量变化。结果:sh-MALATl明显降低MALATl并提高miR-146a-5p在JEG-3细胞mRNA水平。sh-MALATl抑制JEG-3细胞增殖能力;miR-146a-5p inhibitor促进细胞增殖能力,减弱sh-MALATl产生的影响。同时,sh-MALATl减弱滋养细胞中TRAF6、VEGR、MMP2蛋白的表达,而miR-146a-5p inhibitor可增强其表达,并减弱sh-MALATl的抑制作用。结论:MALATl与miR-146a可相互作用对子痫前期滋养细胞生物学行为产生影响。

长链非编码RNA LOXL1-AS1在人类恶性肿瘤中的作用及其分子调控机制

长链非编码RNA(lncRNA)广泛参与生物体的各种生理与病理过程。lncRNA作为肿瘤致癌因子或抑癌因子参与恶性肿瘤的多种生物过程,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。赖氨酰氧化酶样蛋白1-反义RNA1(LOXL1-AS1)是近年来发现的一种lncRNA,其在多种恶性肿瘤中表达上调,并与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、患者预后等病理特征相关。LOXL1-AS1通过与多种微小RNA竞争性结合,调节下游靶基因的表达及调控相关信号通路发挥促癌作用。该文通过总结LOXL1-AS1参与多种人类恶性肿瘤的生物学过程,不同的分子调控机制影响肿瘤细胞增殖、转移、侵袭和凋亡等恶性生物学行为,探讨潜在的临床意义和应用前景,以期为恶性肿瘤的临床诊断、治疗和筛选预后标志物提供理论基础和参考依据。

长链非编码核糖核酸GAS8-AS1在甲状腺乳头状癌组织中的表达

目的比较长链非编码核糖核酸(lncRNA)GAS8-AS1在甲状腺乳头状癌患者术前和术后的表达水平,探讨lncRNA GAS8-AS1作为生物标志物用于甲状腺乳头状癌临床诊断的可行性。方法入组81例甲状腺乳头状癌患者作为试验组,66例结节性甲状腺肿患者作为对照组;采集术前和术后1 a的血液样本并收集术中的肿瘤组织,运用荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血液、肿瘤组织中lncRNA GAS8-AS1表达水平,比较术前和术后1 a血液、肿瘤组织中lncRNA GAS8-AS1表达的差异。结果术前,试验组患者血液中lncRNA GAS8-AS1相对表达量较对照组明显减少(P<0.05)。术前,试验组患者肿瘤组织中lncRNA GAS8-AS1相对表达量与其血液中的相对表达量相近(P>0.05),且较对照组血液中的相对表达量明显降低(P<0.05)。术后1 a,试验组患者血液中lncRNA GAS8-AS1的相对表达量较术前明显升高(P<0.05),且与对照组血液中的相对表达量相近(P>0.05)。结论lncRNA GAS8-AS1可以作为生物标志物在甲状腺乳头状癌的临床诊断和术后监测过程中起到关键作用。

METTL3介导m6A修饰长链非编码RNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制研究

背景与目的肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其他癌症中研究较少。本研究旨在探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰lncRNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制。方法收集120例肺癌与对应癌旁组织样本,lncRNA微阵列分析差异表达的lncRNA,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肺癌、癌旁组织、肺癌细胞系THAP7-AS1表达,分析THAP7-AS1对肺癌的诊断价值以及其表达水平与肺癌患者生存率、临床病理特征的关系。通过生物信息学分析、甲基化RNA免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,meRIP)、RNA pulldown实验、RIP实验探究THAP7-AS1的分子调节机制;通过MTS、克隆形成、划痕、Transwell、体内异种移植实验测定各组SPC-A-1、NCI-H1299细胞增殖、迁移、侵袭、成瘤能力,Western blot检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase B,PI3K/AKT)信号通路蛋白表达。结果肺癌组织、细胞系THAP7-AS1表达升高(P<0.05),对肺癌具有一定的诊断价值[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.737],其表达水平与患者总生存率、肿瘤大小、肿瘤原发灶-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。METTL3介导的m6A修饰能够增强THAP7-AS1表达。与SPC-A-1、NCI-H1299细胞NC组、sh-NC组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力提高(P<0.05),移植瘤体积、质量增大(P<0.05),sh-THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力下降(P<0.05)。THAP7-AS1与Cullin蛋白4B(Cullin 4B,CUL4B)存在特异结合。与SPC-A-1、NCI-H1299细胞Vector组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PI3KCA)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase-catalytic subunit delta,PI3KCD)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phospho-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、磷酸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphomammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达水平升高(P<0.05)。结论LncRNA THAP7-AS1通过METTL3介导的m6A修饰稳定表达,与CUL4B结合激活PI3K/AKT信号通路,促进肺癌发生发展。

长链非编码RNA小核仁核糖核酸宿主基因11在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是真核细胞中一种转录本超过200个核苷酸的RNA分子,几乎不具备编码蛋白质的能力,但可以调节其他基因的表达从而参与多种肿瘤的发生和发展。lncRNA小核仁核糖核酸宿主基因11(SNHG11)是一种近年来备受关注的lncRNA。随着研究的深入,已经报道并证实了lncRNASNHG11在多种恶性肿瘤中异常表达,包括消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、神经系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、生殖系统肿瘤,并在这些肿瘤中起着至关重要的作用。本文结合国内外最新报道,就lncRNASNHG11在肿瘤中的影响及其潜在机制进行简要综述。

类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA-Hox转录反义RNA表达变化及其意义

目的观察类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)-Hox转录反义RNA(HOTAIR)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择RA患者(RA组)132例,同期健康体检者50例(对照组)。取RA组入院第二天,对照组入院当天的空腹静脉血,采用实时RT-PCR法检测血清LncRNA-HOTAIR,ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测RF、CRP,魏氏法检测ESR。分析RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平与患者临床参数(DAS28,炎性指标及年龄、性别、病程、疼痛关节数)的关系。ROC分析血清LncRNA-HOTAIR水平对RA的诊断价值。结果RA组血清LncRNA-HOTAIR、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR水平高于对照组(P均<0.05)。RA组病情高度活动者血清LncRNA-HOTAIR水平高于中度及低度活动者(P均<0.05)。RA组血清LncRNA-HOTAIR水平与DAS28呈正相关(r=0.645,P=0.009)。血清LncRNA-HOTAIR诊断RA的ROC下面积为0.706,敏感度71%,特异度82%。结论RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平升高,其水平变化与疾病活动程度有关,对RA的诊断准确度较高。

佛手苷内酯通过调控长链非编码RNA阿片样受体基因表达对糖氧剥夺诱导的PC12细胞损伤的影响

目的研究佛手苷内酯(BG)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)阿片样受体基因(Oprm1)表达保护糖氧剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤。方法将PC12细胞分为对照组(Con)、OGD组、OGD+BG低浓度(BG-L)组、OGD+BG中浓度(BG-M)组、OGD+BG高浓度(BG-H)组、OGD+pcDNA组、OGD+pcDNA-Oprm1组、OGD+BG+si-NC组和OGD+BG+si-Oprm1组。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡率。Real-time PCR分析Oprm1表达水平。结果与Con组比较,OGD组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与OGD组比较,OGD+BG-L组、OGD+BG-M组、OGD+BG-H组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+pcDNA组比较,OGD+pcDNA-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+BG+si-NC组比较,OGD+BG+si-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结论BG可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调lncRNA Oprm1表达有关。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

急性胰腺炎病人血清长链非编码RNA核富集转录体1、Toll样受体2表达变化及临床意义研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)病人血清长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NETA1)、Toll样受体2(TLR2)表达及临床意义。方法选取2017年5月至2020年12月石家庄平安医院收治的AP病人125例为研究对象,根据急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)对AP病人进行评分,并将病人分为轻症组56例,重症组69例;根据住院期间重症组AP病人预后情况,将病人分为预后不良25例,预后良好44例。同期选取该院健康体检者130例为健康组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清LncRNA NETA1水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清TLR2水平;Pearson相关性分析探索AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2水平相关性及二者与病人APACHEⅡ评分的关系;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清LncRNA NEAT1、TLR2对AP病人重症的评估价值。结果与健康组比较,AP组血清LncRNA NEAT1(2.16±0.31比1.00±0.00)、TLR2水平[(6.43±1.05)µg/L比(0.59±0.24)µg/L]升高(P<0.05);与轻症组比较,重症组AP病人血清LncRNA NEAT1(2.31±0.33比1.98±0.27)、TLR2水平[(6.89±1.16)µg/L比(5.86±0.92)µg/L]升高(P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组重症AP病人血清LncRNA NEAT1(2.43±0.36比2.14±0.27)、TLR2水平[(7.12±1.24)µg/L比(6.45±1.02)µg/L]升高(P<0.05);Pearson相关性分析结果表明,AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2呈正相关(r=0.65,P<0.05),二者与病人APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.50、0.52,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清LncRNA NEAT1水平、TLR2单独及联合评估AP病人重症的曲线下面积(AUC)分别为0.73[95%CI:(0.64,0.82)]、0.75[95%CI:(0.67,0.84)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)],血清LncRNA NEAT1联合TLR2水平预测AP病人重症的AUC明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2表达水平显著升高,且与病人严重程度和预后有关,临床上检测LncRNA NEAT1、TLR2表达可能有助于AP病人的病情评估。

长链非编码RNA OTUD6B-AS1、微RNA-365a-3p在肝癌中表达与临床病理特征及预后的关系

目的探究血清及肝癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA1(OTUD6B-AS1)、微RNA-365a-3p(miR-365a-3p)的表达水平与肝癌病人临床病理特征及预后的关系。方法纳入2015年3月至2017年3月海南医学院第一附属医院收治的肝癌病人86例(肝癌病人组),同时募集同期体检的健康志愿者86例(健康对照组),收集所有研究对象的临床资料。采用qRT-PCR法检测血清及肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达;Star⁃base数据库预测LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间的关系;使用Pearson分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与病人5年生存率之间的关系;Cox回归分析肝癌病人预后的影响因素。结果与健康对照组比较,肝癌病人组血清中LncRNA OTUD6B-AS1高表达(1.59±0.41比1.02±0.32),miR-365a-3p低表达(0.42±0.15比1.05±0.26)(P<0.05)。肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1表达水平高于癌旁组织(1.70±0.44比0.97±0.16),miR-365a-3p表达水平低于癌旁组织(0.53±0.17比1.01±0.14)(P<0.05)。血清中Ln⁃cRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与TNM期、淋巴结转移以及分化程度相关(P<0.05)。生物信息学预测显示LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间存在靶向结合位点。Pearson分析显示,肝癌病人血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达存在负相关(r=−0.47,P<0.05)。LncRNA OTUD6B-AS1低表达组肝癌病人的5年生存率高于LncRNA OTUD6B-AS1高表达组(37.21%比13.95%,χ^(2)=6.11,P=0.013);miR-365a-3p高表达组肝癌病人的5年生存率高于miR-365a-3p低表达组(41.86%比9.30%,χ^(2)=8.03,P=0.005)。LncRNA OTUD6B-AS1高表达以及miR-365a-3p低表达是影响肝癌病人死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p在肝癌病人血清及肝癌组织中分别呈高、低表达,二者均与TNM期、淋巴结转移、分化程度等临床病理特征以及预后有关。

外泌体非编码RNA调控骨质疏松症研究进展

外泌体是一种细胞间进行通讯的介质,可以和靶细胞融合,将其中包裹的物质转移至靶细胞,并保护其内容物免遭细胞外液酶降解,进而介导细胞间的信息交流。而骨质疏松症(osteoporosis,OP)常伴有骨细胞非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)的表达改变,从而影响骨细胞微环境导致骨质疏松症的发生。在骨细胞微环境中,外泌体可包裹ncRNA、蛋白质、脂质等生物调节活性物质,从母细胞释放并被骨细胞内吞,实现细胞之间的信息交流,进而调节骨细胞的活性。因此,具有基因载体功能的外泌体,其携带的ncRNA可补充或吸附骨细胞内异常调节的ncRNA,从而调节骨细胞活性,并有望成为骨修复的重要材料。该文将外泌体miRNA、lncRNA、circRNA对骨质疏松症作用的文献进行检索,对外泌体ncRNA在骨质疏松症中发病机制的研究进行综述。

长链非编码RNA PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用

目的:研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法:采用RNA测序(RNA-seq)技术检测人肺腺癌细胞A549及其铂类耐药细胞中lncRNA和mRNA的差异表达谱;qRT-PCR检测lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平;利用siRNA技术下调铂类耐药人肺癌细胞中PAPPA-AS1的表达,CCK-8实验检测肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡分布;蛋白质印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平。结果:与亲代敏感细胞A549相比,lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中呈高表达;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性增强,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加(P均<0.05);与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达明显升高,磷酸化PI3K、Akt和mTOR蛋白表达明显降低。结论:下调PAPPA-AS1可以通过抑制PI3K/Akt信号通路逆转肺腺癌细胞对铂类药物的抵抗性。

难治性肺炎支原体肺炎患儿血清长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1和烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1检测的临床意义

目的探讨难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)患儿血清长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)、烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase-antisense RNA1,NNT-AS1)检测的临床意义。方法选择2018年1月1日~2021年1月1日辽宁省健康产业集团阜新矿总医院收治的200例肺炎支原体肺炎患儿,其中43例为RMPP(RMPP组),157例为普通肺炎支原体肺炎(普通肺炎组),另选择100例健康儿童为对照组。检测血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平以及炎性因子[C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平。分析血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平与炎性因子水平的相关性。收集临床资料,分析影响RMPP发病的影响因素,比较不同疗效RMPP患儿血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平的差异。结果RMPP组、普通肺炎组和对照组血清LncRNA MALAT1(3.26±0.85,1.32±0.41和1.05±0.37)和LncRNA NNT-AS1(3.38±0.92,1.41±0.40和1.06±0.39)水平比较差异均有统计学意义(F=335.693,335.828,均P<0.05),血清CRP(45.24±2.01 mg/L,19.02±3.27 mg/L和3.26±0.77 mg/L),PCT(1.58±0.52μg/L,0.82±0.16μg/L和0.31±0.09μg/L),IL-8(42.77±8.84μg/L,26.35±5.91μg/L和13.02±3.79μg/L)和TNF-α(9.22±2.61μg/L,5.02±1.49μg/L和3.32±0.96μg/L)水平比较差异均有统计学意义(F=4207.164,457.187,410.300,214.875,均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示血清LncRNA MALAT1,LncRNA NNT-AS1表达水平均与CRP,PCT,IL-8,TNF-α水平呈正相关(r=0.715~0.922,均P<0.05)。Logistic逐步回归分析结果显示肺大片实变影[OR(95%CI)=2.212(1.396~3.506)]、CRP高表达[OR(95%CI)=2.111(1.313~3.392)]、LncRNA MALAT1高表达[OR(95%CI)=1.826(1.189~2.805)]、LncRNA NNT-AS1高表达[OR(95%CI)=1.758(1.149~2.689)]是RMPP发病的危险因素(均P<0.05)。43例RMPP患儿治疗有效38例(有效组),无效5例(无效组),有效组血清LncRNA MALAT1(3.16±0.24)和LncRNA NNT-AS1(3.29±0.20)表达水平低于无效组(4.02±0.09,4.06±0.10),差异有统计学意义(t=7.869,8.406,均P<0.05)。结论LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1可能通过调节炎症反应参与RMPP发病,检测LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达可为RMPP治疗疗效评估提供参考。

长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1-AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用。方法SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480~580 g。采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1-AS抑制剂(siRNA-BACE1-AS)组(ST组),每组16只。SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA-BACE1-AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30%氧气6 h,S组、SN组和ST组吸入3.6%七氟醚与30%氧气的混合气体6 h。气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1~5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数。水迷宫实验结束后1 h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase-3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl-2和BACE1蛋白含量,RT-qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1-AS、miR-124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构。结果与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3~5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P<0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显降低(P<0.05),caspase-3活性明显增强(P<0.05)。与S组比较,ST组水迷宫实验第3~5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P<0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P<0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显升高(P<0.05),caspase-3活性明显减弱(P<0.05)。S组和SN组上述指标差异均无统计学意义。结论长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR-124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关。

长链非编码RNA HOTAIR在结直肠癌中的表达、临床意义及预后分析

目的探讨结直肠癌组织中长链非编码RNA HOTAIR在的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取我院结直肠癌(癌组)和正常黏膜组织(正常组)各90例,应用荧光定量PCR检测HOTAIR在癌组和正常组中的表达水平,分析HOTAIR表达水平与结直肠癌临床病理特征之间的关系,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线和Cox回归模型,分析其与病变预后之间的相关性及其危险因素。结果 HOTAIR mRNA在癌组中的表达水平(0.86±0.05),明显高于其在正常组中的表达(0.17±0.02),差异具有明显统计学意义(P <0.001);HOTAIR表达水平与肿瘤的分化程度(P=0.039)、TNM分期(P <0.001)、肝转移(P <0.001)、淋巴结转移(P <0.001)、脉管浸润(P <0.001)、神经浸润(P <0.001)均密切相关;共48例患者死亡,生存率为46.66%,其中死亡患者HOTAIR表达水平为(0.880±0.105),明显高于生存患者的(0.662±0.113),差异有明显统计学意义(P=0.002);进一步的Kaplan-Meier分析显示:HOTAIR高表达的患者中位生存时间为23个月,HOTAIR低表达者中位生存时间为35个月,差异有统计学意义(P=0.011);且Cox回归模型证实HOTAIR是结直肠癌预后的独立影响因素。结论 HOTAIR在结直肠癌中的表达水平较高,与临床病理特征及预后关系密切,可作为新的潜在的结直肠肿瘤分子生物学标记物。

食管癌患者血清神经元特异性烯醇化酶与长链非编码RNA ITGA9-AS1水平联合检测的实验诊断价值研究

目的探究食管癌(esophagus cancer,EC)患者血清神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)与长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ITGA9-AS1水平联合检测的实验诊断价值。方法选择2018年5月~2019年7月兵器工业五二一医院收治的112例EC可疑病变患者为研究对象,经病理学检查确诊67例EC患者为EC组,45例食管良性病变为食管良性病变组。采用电化学发光免疫分析仪检测NSE水平,采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测血清lncRNA ITGA9-AS1的水平。Pearson相关分析分析血清NSE,lncRNA ITGA9-AS1水平与EC患者病理分期、肿瘤浸润深度的相关性。结果EC组患者血清NSE(22.71±3.03μg/L vs 2.98±0.22μg/L)和lncRNA ITGA9-AS1(0.88±0.21 vs 0.64±0.14)的表达水平高于食管良性病变组,差异具有统计学意义(t=13.33,6.41,均P=0.00)。III期EC患者血清NSE和lncRNA ITGA9-AS1水平显著高于I期和II期,差异具有统计学意义(P<0.01),另外肿瘤浸润深度T4血清NSE和lncRNA ITGA9-AS1水平显著高于T1,差异具有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,血清NSE,lncRNA ITGA9-AS1水平与EC患者病理分期、肿瘤浸润深度呈显著正相关(r=0.142,P=0.005和r=0.171,P=0.013)。血清NSE,lncRNA ITGA9-AS1诊断敏感度均较低,但均具有较高的特异度。联合检测在EC中有较高的敏感度和特异度,分别为82.1%和83.2%。结论血清NSE和lncRNA ITGA9-AS1定量检测可用于EC的诊断,联合检测可提高诊断的敏感度。

长链非编码RNA组蛋白去乙酰化酶3通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡

目的研究长链非编码RNA组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肝细胞MIHA、肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、si-HDAC3+DMSO组[转染si-HDAC3并用二甲基亚砜(DMSO)处理]、si-HDAC3+MHY1485组[转染si-HDAC3并用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂MHY1485处理]用脂质体法转染至SKHep1细胞;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞中Akt激酶、翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体p70S6激酶蛋白(S6K1)、磷酸化核糖体p70S6激酶蛋白(p-S6K1)的蛋白表达。结果与正常肝细胞MIHA(1.00±0.06)相比,肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3表达(4.38±0.34)显著上调(P<0.05)。敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均得到明显下调,凋亡能力得到明显上调。有趣的是,敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞中mTOR信号通路关键基因Akt、4E-BP1、p-S6K1的表达均明显下调,并且激活mTOR信号通路可部分逆转敲减HDAC3对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用。结论长链非编码RNAHDAC3可调控肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,其机制可能与mTOR信号通路相关,可为肝癌的治疗提供新的作用靶点。

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P<0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P<0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P<0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。