急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与病情及预后的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA叉头盒D3反义RNA1(LncRNA FOXD3-AS1)水平与疾病风险、严重程度及预后的关系。方法选取该院收治的92例AIS患者为AIS组,92例体检健康者为对照组。按入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将AIS患者分为轻度组(42例)、中重度组(50例)。AIS患者出院后随访3个月,依据改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(48例)、预后不良组(44例)。检测血清LncRNA FOXD3-AS1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。比较AIS组和对照组临床资料、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平,并比较不同严重程度的AIS患者、不同预后的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平;分析AIS发生的危险因素,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与甘油三酯(TG)、尿酸的相关性,血清LncRNA FOXD3-AS1水平与AIS发生风险的关系。结果AIS组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05),血清TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于对照组(P<0.05)。高水平TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α是AIS发生的独立危险因素(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸均呈正相关(P<0.05),血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α呈正相关(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平越高,AIS发生风险越高。中重度组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于轻度组(P<0.05)。预后不良组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于预后良好组(P<0.05)。结论AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平较高,LncRNA FOXD3-AS1与AIS发生风险、严重程度、预后均有关。

lncRNA HAGLR促卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化的机制研究

目的研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用。方法培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组)。然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组)。qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达。CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性。Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力。细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力。TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡。结果与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05)。与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05)。与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05)。结论lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p的表达变化及其临床意义

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA同源盒基因D-反义链1(lncRNA HOXD-AS1)、微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选取手术切除的宫颈癌及其癌旁组织各92例份,采用qRT-PCR法检测上述组织lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p,分析两指标间及其与宫颈癌临床病理参数的关系,Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达水平宫颈癌患者术后3年总生存率,Cox回归分析法分析宫颈癌患者预后不良的影响因素。结果宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p相对表达量分别为2.064±0.644、0.947±0.305,癌旁组织分别为1.044±0.275、1.572±0.563,两者比较,P均<0.05。宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1与miR-133a-3p表达呈负相关(r=-0.663,P<0.05)。lncRNA HOXD-AS1、miR-133a-3p表达与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。lncRNA HOXD-AS1≥2.064患者(40例)和lncRNA HOXD-AS1<2.064患者(52例)术后3年总生存率分别为30.00%(12/40)、67.31%(35/52),两者比较,P<0.05;miR-133a-3p≥0.947患者(45例)和miR-133a-3p<0.947患者(47例)术后3年总生存率分别为68.89%(31/45)、34.04%(16/47),两者比较,P<0.05。多因素分析显示,FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、lncRNA HOXD-AS1≥2.064为宫颈癌患者预后不良独立风险因素,miR-133a-3p≥0.947为独立保护因素(P均<0.05)。结论宫颈癌组织中lncRNA HOXD-AS1表达升高,miR-133a-3p表达降低,两指标可能成为宫颈癌患者预后评估指标,lncRNA HOXD-AS1≥2.064及miR-133a-3p≥0.947时是宫颈癌患者预后不良的影响因素。

过表达lncRNA HAGLR促胫骨骨折大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究

目的研究骨质疏松(OP)-胫骨骨折(TF)大鼠长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)与其下游靶基因的表达情况,并探讨lncRNA HAGLR对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的作用与机制。方法30只SD雌性大鼠随机分为sham组、OP组、OP-TF组,每组10只。ELISA法检测大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的水平。对大鼠MSC细胞系R7500使用成骨分化诱导培养基进行诱导,并分为MSC组和成骨诱导组(Osteogenic-MSC组)。分别转染pcDNA-HAGLR、pcDNA-NC、miR-19a-3p的模拟物(miR-19a-3p mimic)、mimic的阴性对照(NC mimic)、miR-19a-3p的抑制剂(miR-19a-3p inhibitor)、miR-19a-3p inhibitor的阴性对照(NC inhibitor)至R7500后进行相应分组。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA HAGLR和miR-19a-3p以及骨形态发生蛋白2(BMP2)和miR-19a-3p的靶向关系。qRT-PCR检测各组lncRNA HAGLR和miR-19a-3p的表达。Western blot检测BMP2、ALP、胶原蛋白I(COL-I)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达。ALP染色和AR染色检测MSC的成骨分化能力。结果OP组和OP-TF组的血清ALP和TRAP水平均高于sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。而OP组与sham组胫骨组织中lncRNA HAGLR、miR-19a-3p、BMP2的表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),而OP-TF组胫骨组织中lncRNA HAGLR、BMP2的表达水平均明显低于sham组和OP组(P<0.05),OP-TF组胫骨组织中miR-19a-3p的表达水平高于sham组和OP组(P<0.05)。与MSC组相比,Osteogenic-MSC组的lncRNA HAGLR表达水平明显升高(P<0.05),而miR-19a-3p的表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明lncRNA HAGLR与miR-19a-3p具有靶向关系,miR-19a-3p与BMP2具有靶向关系。pcDNA-HAGLR组的miR-19a-3p的表达水平低于pcDNA-NC组(P<0.05)。miR-19a-3p mimic组与NC mimic组的lncRNA HAGLR的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与NC mimic组相比,miR-19a-3p mimic组BMP2的表达水平降低(P<0.05),miR-19a-3p表达水平升高(P<0.05)。pcDNA-HAGLR组细胞较pcDNA-NC组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05)。miR-19a-3p inhibitor组细胞较NC inhibitor组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05)。结论胫骨骨折大鼠lncRNA HAGLR和BMP2表达降低,miR-19a-3p表达增高。过表达lncRNA HAGLR通过靶向调控miR-19a-3p/BMP2轴促进大鼠MSC的成骨分化。

lncRNA PAX8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA配对盒8反义RNA 1(PAX8-AS1)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及其对CRC细胞增殖、凋亡及侵袭的作用,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测94例CRC患者癌组织和癌细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平。将PAX8-AS10 siRNA小分子序列与miR-22-3p inhibitors分别转染或共转染至CRC细胞中,转染后细胞分为si-NC组(转染阴性序列)、si-PAX8-AS1组(转染PAX8-AS1 siRNA)、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组(共转染PAX8-AS1 siRNA和inhibitors NC)和si-PAX8-AS1+inhibitors组(共转染PAX8-AS1 siRNA和miR-22-3p inhibitors),另取未经任何转染的SW480细胞作为对照组。RTqPCR法检测转染后各组细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭率,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和cleaved Caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证PAX8-AS1与miR-22-3p的靶向关系。结果:RT-qPCR法检测,与癌旁组织比较,癌组织中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显降低(P<0.01);与人正常结肠上皮细胞NCM460比较,SW480、SW620、HT-29和LoVo细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),miR-22-3p表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞中miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组和si-PAX8-AS1+inhibitors组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TargetScan预测PAX8-AS1与miR22-3p存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与共转染mimics NC的细胞比较,miR-22-3p mimics共转染后PAX8-AS1-WT细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。结论:PAX8-AS1在人CRC组织中高表达,沉默PAX8-AS1可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调miR22-3p表达有关。

胃癌组织中lncRNA FOXF1-AS1的表达及其与临床病理特征及预后的关系

目的:探究胃癌组织中长链非编码叉头蛋白F1-反义RNA1(lncRNA FOXF1-AS1)表达水平及其与临床病理特征及预后的关系。方法:以2014年2月至2015年7月于本院就诊胃癌患者87例为研究对象。术中取患者胃癌组织及癌旁(>5 cm)组织,荧光定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中lncRNA FOXF1-AS1表达水平,收集分析患者临床资料及临床病理特征,Kaplan-Meier分析胃癌患者3年生存情况,COX回归分析影响胃癌不良预后发生的危险因素。结果:胃癌组织中lncRNA FOXF1-AS1表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);根据lncRNA FOXF1-AS1表达平均值将患者分为高表达组和低表达组,lncRNA FOXF1-AS1表达水平与胃癌患者浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),与患者年龄、病理类型、肿瘤直径大小无关(P>0.05);Kaplan-Meier分析结果显示lncRNA FOXF1-AS1高表达患者3年无进展生存率和总生存率显著高于lncRNA FOXF1-AS1低表达组(P<0.05);COX多因素分析结果显示肿瘤淋巴转移、lncRNA FOXF1-AS1表达水平是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:lncRNA FOXF1-AS1在胃癌组织中表达下调,与胃癌患者浸润深度、淋巴结转移及生存情况有关,是影响患者预后的独立危险因素,可作为患者预后判断的参考指标。

长链非编码RNA FOXC2-AS1在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码叉头框蛋白C2-反义RNA1(LncRNA FOXC2-AS1)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及意义。方法选取2012年4月至2017年4月收治的DLBCL患者93例和同期因淋巴结反应性增生就诊的45例患者(对照组)作为研究对象。实时荧光定量PCR术检测DLBCL患者淋巴瘤组织和对照组淋巴结组织标本中LncRNA FOXC2-AS1表达;分析LncRNA FOXC2-AS1在不同病理特征DLBCL患者中的表达差异,以及对患者预后的影响。结果LncRNA FOXC2-AS1在DLBCL患者组织中的相对表达量为2.47±0.34,高于对照组组织中的1.03±0.12,差异有统计学意义(P<0.01);LncRNA FOXC2-AS1在有B症状(发热、乏力、盗汗和消瘦)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)阳性、多发骨髓瘤癌基因1(MUM1)阳性、、Ki-67阳性、LDH升高、结外病变数量>2个、Arbor临床分期Ⅲ~Ⅳ期、IPI评分>2分和治疗效果未完全缓解的DLBCL患者组织中表达量升高(P<0.05,P<0.01);Kaplan-Meier生存分析结果显示,低表达组患者平均生存时间[(62.83±6.00)月vs(33.48±3.28)月]和累积生存率(66.67%vs 21.74%)均高于高表达组(P<0.01);Cox比例风险回归模型结果显示,Bcl-2、LDH、Arbor临床分期、治疗效果和LncRNA FOXC2-AS1表达是影响DLBCL患者预后的风险因素(HR=1.943、2.077、2.115、2.082、2.966,P<0.05)。结论LncRNA FOXC2-AS1在DLBCL组织中呈高表达,且可能与其恶性增殖、侵袭及治疗效果有关,是影响患者预后的指标。

叉头框蛋白4反义RNA1在肿瘤中调控作用及机制研究进展

长链非编码RNA是一类长度超过200个核苷酸但不编码蛋白质的非编码RNA,其在肿瘤的发生、发展中起重要调控作用。叉头框蛋白4反义RNA1是一种新发现的长链非编码RNA,在多种肿瘤中异常表达并参与调控细胞增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为。本文就叉头框蛋白4反义RNA1在肿瘤中的调控作用及机制的研究进展作一综述。