长链非编码RNA富核转录本1和INK4位点反义非编码RNA在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的临床价值

目的探讨长链非编码RNA富核转录本1(NEAT1)和INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的临床价值。方法收集良性和恶性胸腔积液患者的胸腔积液标本各50例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测胸腔积液中NEAT1和ANRIL的相对表达量,并依此构建受试者工作特征(ROC)曲线,获取曲线下面积(AUC)并确定临界(cut-off)值,评估NEAT1和ANRIL单独及联合检测对恶性胸腔积液的诊断效能,并与传统肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)进行比较。比较不同临床特征恶性胸腔积液患者中NEAT1和ANRIL的相对表达量。结果NEAT1和ANRIL在恶性胸腔积液中的相对表达量均明显高于良性胸腔积液(P﹤0.01)。ROC曲线分析结果显示,NEAT1和ANRIL诊断恶性胸腔积液的AUC值分别为0.815(95%CI:0.732~0.897)和0.807(95%CI:0.723~0.890),均高于CEA诊断恶性胸腔积液的AUC值0.730(95%CI:0.629~0.831)。NEAT1和ANRIL联合检测诊断恶性胸腔积液的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于NEAT1、ANRIL和CEA单独诊断的结果。不同肿瘤组织来源、肺癌组织类型、性别、年龄、吸烟史、糖尿病或心血管病发生情况的恶性胸腔积液患者中NEAT1和ANRIL的相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论NEAT1和ANRIL在恶性胸腔积液中的表达水平均高于良性胸腔积液。NEAT1和ANRIL表达水平的检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断具有一定的临床意义,有可能成为鉴别良恶性胸腔积液的生物标志物,联合检测NEAT1和ANRIL可进一步提高良恶性胸腔积液的诊断效能。

长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在急性冠状动脉综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:连续选取2015年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院心脏中心并确诊为ACS的患者159例为ACS组,另选取本院体检中心同时期进行健康体检、冠状动脉增强CT检查证实无冠心病的患者148例为对照组。提取两组患者的外周血单个核细胞,采用实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1的表达水平,并分析MALAT1表达水平与ACS的相关性及其对ACS的诊断预后预测价值。结果:与对照组相比,ACS组患者外周血MALAT1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,外周血MALAT1表达水平与ACS独立相关(OR=1.193,95%CI:1.037~1.372,P=0.014)。ROC曲线分析显示,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断具有一定的价值(AUC=0.664,95%CI:0.600~0.720)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,平均随访(558±223)d期间,外周血MALAT1高表达水平(≥0.816)ACS患者的MACE累积发生率高于外周血MALAT1低表达水平(<0.816)ACS患者(39.05%vs.30.61%,P<0.05)。结论:ACS患者外周血中MALAT1的表达水平显著升高,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断及预后预测具有潜在的临床价值。

长链非编码RNA核富集转录子1对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬的影响及机制研究

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录子1(NEAT1)通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法:人胃癌SGC7901细胞传代培养后分为对照组、过表达组和沉默组。对照组为不做任何处理,过表达组给予lncRNA NEAT1过表达质粒转染,沉默组给予lncRNA NEAT1沉默质粒转染。鉴定lncRNA NEAT1转染效率,分析沉默lncRNA NEAT1对人胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬、MAPK信号通路蛋白表达量的影响。结果:与对照组比较,过表达组lncRNA NEAT1表达量、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达量增加,上皮性钙黏附素(E-cadherin)、Beclin-1、Ⅱ型/Ⅰ型微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达量降低;沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。与过表达组比较,沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。结论:抑制lncRNA NEAT1可有效抑制胃癌细胞的迁移、侵袭、自噬,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

血清长链非编码RNA核富集转录体1及可溶性细胞间黏附分子1水平与冠状动脉慢血流现象的关系

目的 探讨血清长链非编码RNA核富集转录体1(NEAT1)及可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平与冠状动脉慢血流现象(CSFP)的关系。方法 选择2020年8月至2022年2月在四川省遂宁市中心医院疑诊为冠状动脉粥样硬化性心脏病而行冠状动脉造影检查的患者,以其中造影未见明显病变的110例为研究对象,将心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流分级2级及以下且无冠状动脉狭窄、诊断为CSFP的70例患者作为CSFP组,以TIMI血流分级3级且无冠状动脉明显狭窄者40例作为对照组。利用荧光定量聚合酶链反应法检测血清NEAT1表达,酶联免疫吸附试验法检测血清sICAM-1表达。比较2组NEAT1及sICAM-1表达差异。Pearson线性相关分析方法分析血清NEAT1及sICAM-1水平与冠状动脉TIMI平均血流帧数的相关性。采用多因素Logistic回归方法分析CSFP的危险因素。采用受试者工作特征曲线分析血清NEAT1、sICAM-1单独及联合检测对CSFP的诊断效能。结果 CSFP组血清NEAT1、sICAM-1表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清NEAT1、sICAM-1表达与冠状动脉TIMI平均血流帧数呈显著正相关(r=0.456、0.503,均P<0.001)。血清NEAT1与sICAM-1的表达水平呈显著正相关(r=0.541,P<0.001)。有吸烟史、血清NEAT1、sICAM-1水平升高是CSFP的独立危险因素,白蛋白升高是CSFP的保护因素(均P<0.05)。血清NEAT1、sICAM-1单独及联合检测诊断CSFP的曲线下面积分别为0.698(95%置信区间:0.591~0.736)、0.789(95%置信区间:0.734~0.832)、0.836(95%置信区间:0.802~0.885),联合检测诊断CSFP的曲线下面积显著高于血清NEAT1、sICAM-1单独检测(Z=2.061、P=0.039,Z=6.403、P<0.001)。结论 CSFP患者血清NEAT1、sICAM-1水平升高。有吸烟史、血清NEAT1、sICAM-1水平升高是CSFP的独立危险因素,白蛋白升高是CSFP的保护因素。血清NEAT1、sICAM-1联合检测对CSFP具有较高的诊断价值。

子宫内膜癌组织中长链非编码RNA核富含丰富的转录本1、微小RNA-29a的表达及临床意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)、微小RNA(miR)-29a的表达及临床意义。方法选取2017年7月至2022年6月在郑州人民医院诊治的EC患者45例,检测癌组织和癌旁组织LncRNA NEAT1、miR-29a表达,并分析癌组织中LncRNA NEAT1、miR-29a表达与临床病理特征的关系,以及LncRNA NEAT1、miR-29a表达对EC的诊断价值。结果EC患者癌组织LncRNA NEAT1表达明显高于癌旁组织(t=7.951,P<0.001),miR-29a表达与癌旁组织比较明显较低(t=5.616,P<0.001)。肿瘤大小≥2cm、临床分期Ⅲ~Ⅳ期EC患者癌组织中LncRNA NEAT1表达高于肿瘤大小<2cm、临床分期Ⅰ~Ⅱ期EC(t=2.251,P=0.030;t=2.273,P=0.028);临床分期Ⅰ~Ⅱ期EC患者癌组织中miR-29a表达高于临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者(t=3.091,P=0.003)。ROC曲线分析得出,LncRNA NEAT1、miR-29a、两者联合诊断测EC的AUC分别为0.861、0.700、0.934。在最佳临界值点对应的敏感性、特异性分别为:LncRNA NEAT1为62.2%、100.0%,miR-29a为100.0%、48.9%,两者联合为100.0%、75.6%。结论EC癌组织LncRNA NEAT1呈高表达,miR-29a呈低表达,均和临床分期有关,且前者还与肿瘤大小有关,LncRNA NEAT1、miR-29a联合可为诊断EC提供参考。

血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1、微RNA-514b-3p、甲胎蛋白检测对早期肝癌根治术后复发的预测价值分析

目的探究血清长链非编码RNA肺癌相关转录本1(lncRNA LUCAT1)、微RNA-514b-3p(miR-514b-3p)、甲胎蛋白(AFP)表达水平对预测早期肝细胞癌(HCC)病人根治术后复发的临床价值。方法选取2016年3月至2019年6月西安市中心医院诊治的130例Ⅰ~Ⅱ期HCC病人为研究对象,对所有早期HCC病人随访3年,按其行根治术后是否复发分为未复发组(n=92)和复发组(n=38)。检测并比较复发组、未复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP水平;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP对早期HCC病人根治术后复发的预测价值;多因素logistic回归分析早期HCC病人根治术后复发的影响因素;Pearson法分析根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1表达水平与miR-514b-3p的关系。结果与未复发组[0.99±0.33、(17.42±3.67)μg/L、1.01±0.34]相比,复发组早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1(1.87±0.63)、AFP水平(25.38±5.18)μg/L升高(P<0.05),miR-514b-3p水平(0.56±0.19)降低(P<0.05)。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p、AFP预测早期HCC病人根治术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.81、0.68、0.83,且血清lncRNA LUCAT1、AFP联合预测早期HCC病人根治术后复发的AUC为0.93,灵敏度为93.8%,特异度为84.8%。血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的AUC为0.91,高于二者单独预测(P<0.05);血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p单独及联合预测AFP阳性病人根治术后复发的AUC与AFP单独预测相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AFP、lncRNA LUCAT1是影响早期HCC病人根治术后复发的独立危险因素(P<0.05),miR-514b-3p是独立保护因素(P<0.05)。根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平与miR-514b-3p水平呈负相关(P<0.05),且lncRNA LUCAT1与miR-514b-3p存在结合位点。结论根治术后复发的早期HCC病人血清lncRNA LUCAT1水平较高,miR-514b-3p水平较低,血清lncRNA LUCAT1与AFP联合检测更有利于临床预测早期HCC病人根治术后复发情况,且血清lncRNA LUCAT1、miR-514b-3p联合预测AFP阴性病人根治术后复发的效能更高。

孕前超重/肥胖孕妇胎盘中长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1对母婴代谢的影响研究

背景孕前肥胖会给母体及胎儿带来一系列影响,其机制可能与母胎代谢异常有关,因此,探讨其机制对于改善胎儿预后至关重要。目的探讨孕前不同BMI孕妇胎盘中与肥胖及血糖代谢相关因子的改变。方法选取2019年在首都医科大学附属北京世纪坛医院分娩的单胎孕妇100例为研究对象,通过电子病历系统收集研究对象的临床资料,将孕妇按体质量分为孕前低体质量/正常体质量组(57例)和孕前超重/肥胖组(43例)。采用反转录-聚合酶链反应检测孕妇胎盘组织长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)、血液淀粉样抗原3(SAA3)、白介素6(IL-6)mRNA表达。结果研究对象年龄22~43岁,平均年龄(32.7±4.2)岁;其中初产妇61例,妊娠期糖尿病(GDM)患者21例,低体质量14例,正常体质量43例,超重26例,肥胖17例。孕前超重/肥胖组GDM比例、新生儿体质量高于孕前低体质量/正常体质量组,妊娠期增重低于孕前低体质量/正常体质量组(P<0.05)。孕前超重/肥胖组孕妇胎盘组织LncRNA MALAT1 mRNA表达量高于孕前低体质量/正常体质量组(P<0.05)。孕前肥胖孕妇胎盘组织中LncRNA MALAT1、SAA3、IL-6的mRNA表达量高于孕前正常体质量孕妇(P<0.05)。结论孕前过高的BMI对妊娠期母婴的影响更大,掩盖了妊娠期控制体质量增加的效果。在肥胖孕妇中,LncRNA MALAT1可能通过SAA3、IL-6调节葡萄糖和脂肪稳态,涉及炎症变化和氧化应激,从而影响胎儿代谢,值得进行更深入的探索。

长链非编码RNA核富集转录本1通过靶向微小RNA-761对缺氧/复氧大鼠星形胶质细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)对缺氧/复氧(H/R)胶质细胞损伤的影响,及其机制是否与调控微小RNA-761(miR-761)有关。方法构建大鼠皮质星形胶质细胞H/R损伤模型。分为对照组、H/R组、H/R+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、H/R+si-NEAT1组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-761组、H/R+si-NEAT1+miRNA抑制物(anti-miR-NC)组、H/R+si-NEAT1+anti-miR-761组。Real-time PCR分析NEAT1和miR-761的mRNA表达。流式细胞术分析细胞凋亡。试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性。双荧光素酶报告基因实验和Real-time PCR分析NEAT1和miR-761靶向关系。实验重复3次。结果与对照组比较,H/R组细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和CAT活性显著降低,NEAT1表达显著升高,miR-761表达显著降低(P<0.05)。与H/R+si-NC组比较,H/R+si-NEAT1组细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和CAT活性显著升高(P<0.05)。与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-761组细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和CAT活性显著升高(P<0.05)。MiR-761是NEAT1的靶基因,NEAT1负调控miR-761表达。与H/R+si-NEAT1+anti-miR-NC组比较,H/R+si-NEAT1+anti-miR-761组细胞凋亡率、MDA含量显著升高,SOD和CAT活性显著降低(P<0.05)。结论干扰NEAT1表达通过上调miR-761对H/R损伤的星形胶质细胞具有保护作用。

精神分裂症病人外周血长链非编码RNA核富集转录本1表达与临床症状相关性分析

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)在精神分裂症(sch)病人外周血中的表达与临床症状的相关性。方法选择2019年6月至2022年3月在菏泽市第三人民医院及河北医科大学第一医院精神科收治的sch病人73例作为观察对象(sch组),另选取同期在该两家医院体检人员(无精神病障碍史及无精神疾病家族史)68例作为对照组,采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估病人临床症状,采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估病人认知功能,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单核细胞(PBMC)中lncRNA NEAT1表达水平,Spearman法分析lncRNA NEAT1与PANSS评分、MoCA评分的相关性,受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA NEAT1水平对sch的诊断价值。结果对照组和sch组病人外周血lncRNA NEAT1表达水平分别为1.05±0.21、0.73±0.15,差异有统计学意义(P<0.001);ROC曲线分析显示:lncRNA NEAT1的曲线下面积为0.82,截断值为0.89,灵敏度为79.45%,特异度为73.93%;相关性分析表明:lncRNA NEAT1与PANSS量表总分和阴性症状量表评分呈负相关(r=−0.40、−0.49,P<0.05),且与MoCA量表中执行能力、注意力、延迟记忆和总分呈负相关(r=−0.38、−0.40、−0.40、−0.42,P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表达水平降低,与sch病人精神症状和认知功能有关,可能参与sch的发生发展。

宫颈癌患者血清长链非编码RNA-核富集转录体1的表达情况及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)-核富集转录体1(NEAT1)的表达情况及临床意义。方法分别纳入52例宫颈癌患者为宫颈癌组、68例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者为CIN组,另纳入50例健康女性为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测3组研究对象血清lncRNA-NEAT1的相对表达水平。比较3组血清lncRNA-NEAT1的相对表达水平,并分析血清lncRNA-NEAT1相对表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。结果宫颈癌组及CIN组患者血清lncRNA-NEAT1的相对表达水平高于对照组,且宫颈癌组患者血清lncRNA-NEAT1相对表达水平高于CIN组(P<0.05)。宫颈癌患者血清lncRNA-NEAT1相对表达水平与宫颈癌分化程度有关(P<0.05)。结论宫颈癌患者血清中lncRNA-NEAT1呈明显高表达,其与肿瘤分化程度有关,或可成为宫颈癌的有效标志物。

急性胰腺炎病人血清长链非编码RNA核富集转录体1、Toll样受体2表达变化及临床意义研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)病人血清长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NETA1)、Toll样受体2(TLR2)表达及临床意义。方法选取2017年5月至2020年12月石家庄平安医院收治的AP病人125例为研究对象,根据急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)对AP病人进行评分,并将病人分为轻症组56例,重症组69例;根据住院期间重症组AP病人预后情况,将病人分为预后不良25例,预后良好44例。同期选取该院健康体检者130例为健康组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清LncRNA NETA1水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清TLR2水平;Pearson相关性分析探索AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2水平相关性及二者与病人APACHEⅡ评分的关系;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清LncRNA NEAT1、TLR2对AP病人重症的评估价值。结果与健康组比较,AP组血清LncRNA NEAT1(2.16±0.31比1.00±0.00)、TLR2水平[(6.43±1.05)µg/L比(0.59±0.24)µg/L]升高(P<0.05);与轻症组比较,重症组AP病人血清LncRNA NEAT1(2.31±0.33比1.98±0.27)、TLR2水平[(6.89±1.16)µg/L比(5.86±0.92)µg/L]升高(P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组重症AP病人血清LncRNA NEAT1(2.43±0.36比2.14±0.27)、TLR2水平[(7.12±1.24)µg/L比(6.45±1.02)µg/L]升高(P<0.05);Pearson相关性分析结果表明,AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2呈正相关(r=0.65,P<0.05),二者与病人APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.50、0.52,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清LncRNA NEAT1水平、TLR2单独及联合评估AP病人重症的曲线下面积(AUC)分别为0.73[95%CI:(0.64,0.82)]、0.75[95%CI:(0.67,0.84)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)],血清LncRNA NEAT1联合TLR2水平预测AP病人重症的AUC明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2表达水平显著升高,且与病人严重程度和预后有关,临床上检测LncRNA NEAT1、TLR2表达可能有助于AP病人的病情评估。

抑制长链非编码RNA MALAT1对糖脂毒性诱导的内皮细胞功能障碍的影响及可能机制

目的:探讨糖脂毒性环境中抑制长链非编码RNA(lnc RNA)人类肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达水平对人脐静脉内皮细胞功能影响的分子机制。方法:用葡萄糖和棕榈酸处理人脐静脉内皮细胞,建立体外糖脂毒性内皮细胞模型,并分为对照组、高糖高脂组、高糖高脂对照组以及小干扰RNA(si-RNA)干预的高糖高脂+si-MALAT1组、高糖高脂+si-丝裂原活化蛋白激酶1(si-MAPK1)组。应用实时荧光定量PCR检测MALAT1、MAPK1的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测自噬、线粒体融合分裂、凋亡、通路相关蛋白的表达水平;免疫荧光共聚焦定位检测自噬及溶酶体相关蛋白的荧光共定位情况;透射电镜观察内皮细胞中自噬溶酶体的数目;线粒体探针染色检测线粒体形态;免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)的产生;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡;细胞增殖及划痕实验检测不同时间点各组细胞的增殖及迁移能力;血管形成试验检测各组细胞中新生血管数量。结果:与对照组相比,高糖高脂组、高糖高脂对照组的MALAT1 mRNA、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶1(p-MAPK1)的表达水平增加,磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平下降,P均<0.05。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MALAT1组微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、螯合体1(p62)、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、p-MAPK1的表达水平均下降,线粒体融合蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)、BCL-2、p-mTOR的表达水平均增加,P均<0.05;LC3和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白的荧光共定位阳性颗粒增加(P均<0.01),溶酶体数目减少;细胞增殖、迁移、成管能力均增加(P均<0.01)。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MAPK1组内皮细胞中p-MAPK1的表达下降,p-mTOR的表达上升(P均<0.01)。结论:抑制MALAT1表达,可降低糖脂毒性环境中线粒体的自噬水平,减少内皮细胞的凋亡及改善内皮细胞的功能,可能与调节MAPK1/mTOR信号通路有关。

长链非编码RNA核旁斑组装转录本1在妇科恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)在多种人类疾病的发生发展过程中发挥重要调控作用。其中,lncRNA核旁斑组装转录本1(NEAT1)定位于人染色体11q13.1,是一类参与核旁斑结构形成和维持的lncRNA,参与调节多种细胞生物过程和生理过程。lncRNA NEAT1在恶性肿瘤中的表达异常升高,通过各种途径发挥重要的调控作用,尤其是参与妇科恶性肿瘤的增殖、凋亡、迁移、侵袭、耐药和放射抵抗等生物学行为,可能是新的诊断、靶向治疗以及预测风险和临床预后的生物标志物。现探讨lncRNA NEAT1在妇科恶性肿瘤的表达和作用机制,为进一步了解妇科恶性肿瘤提供新思路。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1对巨噬细胞极化影响的研究

目的研究长链非编码RNA(lnc RNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对巨噬细胞极化的影响。方法采用佛波酯诱导人THP-1细胞分化为成熟的巨噬细胞,IFN-γ/LPS刺激诱导M1型极化,IL-4刺激诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测各组细胞中MALAT1的表达。si RNA干扰巨噬细胞MALAT1表达,加入IL-4继续诱导M2型极化,RT-q PCR检测极化相关基因表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-12、CCL22、IL-10的水平。si RNA干扰M2型巨噬细胞MALAT1表达,研究其对M2极化表型的影响。结果 MALAT1在M2型巨噬细胞中表达显著升高,M1向M2极化改变MALAT1表达升高,而M2向M1极化改变MALAT1表达降低。MALAT1干扰后,IL-4诱导的M2型巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低;CXCL10、CXCL11、HLA-DR表达升高,CCL17、CCL18、CD163表达降低。M2型巨噬细胞MALAT1干扰后,TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低。结论 MALAT1参与调控巨噬细胞极化,干扰MALAT1表达有效抑制M2型巨噬细胞极化,促进M1型巨噬细胞极化。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)与乳腺癌淋巴结转移的关系

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科一病区2018年10-12月收治的乳腺癌住院患者20例,采用乳腺手术+前哨淋巴结活检术,病理诊断为乳腺浸润性癌,用前哨淋巴结(SLN)探测仪,术中冰冻示SLN有转移条件的患者对腋窝淋巴结(ALN)进行常规的清扫。获得同时满足SLN(+)及ALN(+)的乳腺癌患者12例,分别取SLN、ALN及乳腺癌组织、癌旁组织。采用Trizol法提取各组织的总RNA,采用分光光度仪定量计算RNA,进行RNA反转录,采用RT-PCR法检测lncRNA的表达,用2-△△ct法计算LncRNA MALAT1的相对表达量。结果各组织中MALAT1相对表达量有明显差异(P<0.05),MALAT1在SLN中的表达明显高于癌旁组织与癌组织(P<0.05)。乳腺癌组织中MALAT1的表达量明显高于癌旁组织和ALN组织(P<0.05)。MALAT1表达与淋巴结转移率呈正相关(r=0.784,P<0.05),但与远处转移和淋巴结转数目不相关。结论 MALAT1在乳腺前哨淋巴结及癌组织中有异常高表达,其检测对乳腺癌淋巴结转移有一定的价值。

长链非编码RNA PCGEM1及信号传导转录激活因子3在卵巢癌中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA PCGEM1(lncRNA PCGEM1)与信号传导转录激活因子3(STAT3)在卵巢癌中的表达及意义。方法选取2013年3月至2014年12月南阳市第一人民医院行卵巢摘除手术的卵巢癌病人108例,术中留取卵巢组织,另选取行手术切除的卵巢囊肿病人108例,术中留取已证实无肿瘤细胞的正常卵巢组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌及正常卵巢组织中lncRNA PCGEM1、STAT3 mRNA表达水平,采用免疫组化法检测STAT3蛋白阳性表达率,采用Pearson法进行相关性分析,采用Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA PCGEM1、STAT3蛋白表达与病人5年生存率的关系;并以Cox回归分析影响病人预后的危险因素。结果与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织lncRNA PCGEM1[(2.41±0.43)比(0.99±0.15)]、STAT3 mRNA表达水平[(2.69±0.52)比(1.02±0.16)]、STAT3蛋白阳性表达率(70.37%比35.19%)显著升高(P<0.05);卵巢癌组织lncRNA PCGEM1、STAT3蛋白阳性表达与病人年龄无关(P>0.05),与FIGO分期、病理分级、铂类耐药及淋巴结转移有关(P<0.05)。卵巢癌组织lncRNA PCGEM1与STAT3 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05)。lncRNA PCGEM1高表达组5年生存率为8.33%,显著低于低表达组54.35%(χ^(2)=39.51,P<0.001),STAT3蛋白阳性表达组5年生存率为13.16%,显著低于阴性表达组68.75%(χ^(2)=26.16,P<0.001)。顺铂耐药、淋巴结转移、lncRNA PCGEM1高表达、STAT3蛋白阳性表达是影响卵巢癌病人预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论卵巢癌组织中lncRNA PCGEM1、STAT3均高表达,且二者呈正相关,与卵巢癌病人病情及5年生存率有关,有望成为评估病人预后的生物标志。

长链非编码RNA LINC00261通过调控miR-324-3p/EST1促进胃癌进展

目的:探讨长链非编码RNA LINC00261通过干扰miR-324-3p表达调控E26转录因子1(EST1)水平促进胃癌(GC)的进展。方法:收集2018年6月至2020年10月在三六三医院接受手术治疗的GC患者(n=80)的癌组织及其相应癌旁正常组织作为研究样本,qRT-PCR检测LINC00261和miR-324-3p表达水平。分析LINC00261与临床病理参数之间的相关性。将siRNA(si-LINC00261)、miRNA模拟物(miR-324-3p)和miRNA抑制剂(miR-324-3p in)及其相应对照转染至MGC-803和SGC-7901细胞;克隆形成试验评估细胞增殖能力;Transwell试验评估细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和ETS1蛋白表达水平;肿瘤异种移植实验检测LINC00261在体内的肿瘤形成能力;荧光素酶报告、RNA沉淀分析LINC00261、miR-324-3p及EST1之间的作用关系。结果:与癌旁组织相比,GC组织中LINC00261表达明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。LINC00261表达与患者TNM分期、组织分化程度淋巴结转移及微血管侵犯有关(P<0.05);通过数据库预测、萤火虫荧光素酶实验及RNA免疫沉淀结果显示,LINC00261和miR-324-3p存在靶向作用关系;GC组织中miR-324-3p水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05);miR-324-3p水平与LINC00261表达呈负相关(P<0.05);与in NC+si-NC组相比,in NC+si-LINC00261组细胞增殖、迁移和侵袭能力及N-cadherin表达明显被抑制(P<0.05),E-cadherin表达明显升高(P<0.05);与in NC+si-LINC00261组相比,siLINC00261+miR-324-3p in组细胞增殖、迁移和侵袭能力及N-cadherin表达明显提高(P<0.05),E-cadherin表达明显降低(P<0.05),Targetscan预测及萤火虫荧光素酶实验表明ETS1是miR-324-3p的下游结合位点;转染miR-324-3p后,ETS1蛋白水平显著下调(P<0.05),但转染miR-324-3p in后,ETS1蛋白水平显著上调(P<0.05);在GC组织中ETS1表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05);miR-324-3p水平与ETS1呈负相关(P<0.05);转染si-LINC00261的MGC-803细胞产生的肿瘤重量低于转染siNC的MGC-803细胞产生的肿瘤重量(P<0.05),在si-LINC00261来源的肿瘤中,ETS1的蛋白水平低于si-NC来源的肿瘤(P<0.05)。结论:LINC00261在GC组织中高表达,其可能通过调控miR-324-3p影响EST1表达促进GC进展。

难治性肺炎支原体肺炎患儿血清长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1和烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1检测的临床意义

目的探讨难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)患儿血清长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)、烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase-antisense RNA1,NNT-AS1)检测的临床意义。方法选择2018年1月1日~2021年1月1日辽宁省健康产业集团阜新矿总医院收治的200例肺炎支原体肺炎患儿,其中43例为RMPP(RMPP组),157例为普通肺炎支原体肺炎(普通肺炎组),另选择100例健康儿童为对照组。检测血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平以及炎性因子[C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平。分析血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平与炎性因子水平的相关性。收集临床资料,分析影响RMPP发病的影响因素,比较不同疗效RMPP患儿血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平的差异。结果RMPP组、普通肺炎组和对照组血清LncRNA MALAT1(3.26±0.85,1.32±0.41和1.05±0.37)和LncRNA NNT-AS1(3.38±0.92,1.41±0.40和1.06±0.39)水平比较差异均有统计学意义(F=335.693,335.828,均P<0.05),血清CRP(45.24±2.01 mg/L,19.02±3.27 mg/L和3.26±0.77 mg/L),PCT(1.58±0.52μg/L,0.82±0.16μg/L和0.31±0.09μg/L),IL-8(42.77±8.84μg/L,26.35±5.91μg/L和13.02±3.79μg/L)和TNF-α(9.22±2.61μg/L,5.02±1.49μg/L和3.32±0.96μg/L)水平比较差异均有统计学意义(F=4207.164,457.187,410.300,214.875,均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示血清LncRNA MALAT1,LncRNA NNT-AS1表达水平均与CRP,PCT,IL-8,TNF-α水平呈正相关(r=0.715~0.922,均P<0.05)。Logistic逐步回归分析结果显示肺大片实变影[OR(95%CI)=2.212(1.396~3.506)]、CRP高表达[OR(95%CI)=2.111(1.313~3.392)]、LncRNA MALAT1高表达[OR(95%CI)=1.826(1.189~2.805)]、LncRNA NNT-AS1高表达[OR(95%CI)=1.758(1.149~2.689)]是RMPP发病的危险因素(均P<0.05)。43例RMPP患儿治疗有效38例(有效组),无效5例(无效组),有效组血清LncRNA MALAT1(3.16±0.24)和LncRNA NNT-AS1(3.29±0.20)表达水平低于无效组(4.02±0.09,4.06±0.10),差异有统计学意义(t=7.869,8.406,均P<0.05)。结论LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1可能通过调节炎症反应参与RMPP发病,检测LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达可为RMPP治疗疗效评估提供参考。

长链非编码RNA前列腺癌相关转录物1在肿瘤进展中的作用

癌症是一种与多种基因突变、表观遗传变异、染色体易位、缺失和扩增相关的复杂疾病。非编码RNA(ncRNA)是一类新兴的转录本,由基因组编码,但大多数不会翻译成蛋白质。虽然没有翻译,但ncRNAs是各种细胞和生理功能的重要参与者。特别是长链非编码RNA(长度>200 nt的ncRNA)在调节染色质动力学、基因表达、生长、分化和发育中起着关键作用。现有的研究发现人类基因组编码超过28 000种不同的长链非编码RNA(lncRNA),然而其中有许多仍然尚未被发现及研究。现被发现的一些特定lncRNA表现出发育和组织特异性表达模式。