长链非编码RNA活化T细胞核因子非编码基因和长链非编码RNA小分子NF90相关RNA与三阴性乳腺癌预后的相关性分析

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)活化T细胞核因子非编码基因(NRON)和lncRNA小分子NF90相关RNA(snaR)与三阴乳腺癌(TNBC)预后的相关性。方法 2018年2月~2020年2月我院收治的TNBC病人100例,术中取其肿瘤组织及癌旁组织,根据3年随访预后情况将其分为预后良好组(72例)与预后不良组(28例)。采用实时定量荧光PCR(RT-qPCR)法检测肿瘤组织与癌旁组织lncRNA NRON、lncRNA snaR表达水平。Pearson法分析TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON与lncRNA snaR的相关性。多因素Cox回归分析TNBC病人预后的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON和lncRNA snaR表达水平对预后的预测价值。结果 与癌旁组织相比,TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON表达水平显著下降(1.01±0.10比0.65±0.08,P<0.001),lncRNA snaR表达水平显著上升(1.03±0.13比2.42±0.30,P<0.001)。lncRNA NRON、lncRNA snaR表达水平与TNM分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON表达水平显著下降(0.69±0.09比0.55±0.05,P<0.001),lncRNA snaR表达水平显著上升(2.28±0.26比2.78±0.40,P<0.001)。Pearson法分析显示,TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON与lncRNA snaR表达水平呈负相关(r=-0.617,P<0.001)。多因素Cox回归分析结果显示,lncRNA NRON是TNBC病人预后的保护因素(P<0.05),lncRNA snaR是TNBC病人预后的危险因素(P<0.05)。lncRNA NRON和lncRNA snaR表达水平联合预测TNBC病人预后优于lncRNA snaR单独预测(Z_(二者联合-lncRNA snaR)=3.200,P=0.001)。结论 TNBC病人肿瘤组织中lncRNA NRON表达下调,lncRNA snaR表达上调,二者与TNBC病人预后有关,可能是TNBC预后预测的生物标志物。

长链非编码RNA AFAP1-AS1在肺腺癌吉非替尼耐药细胞中的作用及机制研究

目的研究长链非编码RNA AFAP1-AS1对非小细胞肺癌耐吉非替尼细胞株PC9/GR耐药性的影响及其可能的作用机制。方法采用不同浓度的吉非替尼处理亲本PC9和耐药PC9/GR细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数致死量(IC_(50))。应用qRT-PCR检测AFAP1-AS1在吉非替尼耐药PC9/GR及亲本细胞株PC9、H1975中AFAP1-AS1的表达水平。将Scrambled和si-AFAP1-AS1转染PC9/GR细胞,qRT-PCR检测干扰效率,CCK-8法检测对照组(Scrambled组)和干扰组(si-AFAP1-AS1组)的IC_(50)。分别应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测PC9/GR对照组和干扰组细胞对吉非替尼药物敏感性、联合吉非替尼处理后细胞增殖能力、细胞凋亡率及细胞周期分布;Western blot检测对照组和干扰组PC9/GR细胞E-cadherin的蛋白表达水平。结果AFAP1-AS1在PC9/GR耐药细胞中的表达量高于PC9亲本细胞,差异有统计学意义(P<0.05);PC9/GR干扰组细胞的IC_(50)、增殖能力低于对照组,细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,干扰AFAP1-AS1表达的干扰组PC9/GR细胞E-cadherin表达水平明显升高。结论干扰AFAP1-AS1表达可能通过抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,上调E-cadherin蛋白表达而逆转PC9/GR细胞对吉非替尼的耐药性。

VTCN1调控结肠癌细胞长链非编码RNA和mRNA的全基因表达谱分析

目的·探讨含V-set域T细胞激活抑制因子(V-set domain containing T cell activation inhibitor 1,VTCN1)在结肠癌中对下游长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和mRNA的调控作用。方法·利用慢病毒质粒在结肠癌细胞株SW1116中过表达VTCN1,抽提RNA并测序,与阴性对照组比较分析差异表达的lncRNA和m RNA,并任意选取差异表达的lncRNA(3条)和mRNA(2条)进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证RNA测序结果的准确性。通过BLAST2GO和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析预测这些差异表达lncRNA和m RNA的相关功能。利用线上平台GEPIA18(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)分析差异表达lncRNA与结直肠癌患者生存期的相关性。结果·通过RNA测序在过表达VTCN1的SW1116细胞中发现了167条差异基因,包括39条lncRNA和128条m RNA。qRT-PCR检验结果与RNA测序结果变化趋势一致。生物信息学分析结果显示这些受VTCN1调控的差异基因可能参与了内质网中的蛋白处理、mRNA监控信号通路。另外,在过表达VTCN1的结肠癌细胞中明显上调的3条lncRNA(DNAJC9-AS1、HCG27和RP11-339B21.13),同时也是预测结直肠癌患者总生存期的独立因子。结论·在结肠癌细胞中VTCN1对下游多条lncRNA和mRNA具有调控作用,这些lncRNA和mRNA可能参与了内质网中的蛋白处理和mRNA监控信号通路。

被转化生长因子β活化的长链非编码RNA对人淋巴瘤Raji细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡和周期的影响及其潜在机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA-ATB短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和miR-200c模拟物(miR-200c mimics)效果,以及LncR NA-ATB、miR-200c和鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)的表达;噻唑蓝(MTT)法检测沉默LncRNA-ATB对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测LncR NA-ATB对Raji细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因(Luciferase)实验检测KRAS是否为miR-200c的直接靶基因。结果 LncR NA-ATB-shRNA可有效沉默Raji细胞中LncRNAATB的表达,沉默LncRNA-ATB的表达可抑制Raji细胞的增殖能力,促进Raji细胞的凋亡能力,并使Raji细胞的周期阻滞于G_1期。进一步研究显示LncRNA-ATB可作为ceRNA与miR-200c竞争性地调控miR-200c直接靶分子KRAS的表达而促进肿瘤细胞增殖。结论LncRNA-ATB可通过上调KRAS的表达而在淋巴瘤细胞的增殖、凋亡和周期过程中发挥着重要的作用。

抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

长链非编码RNA NRON促进NFATc3磷酸化减轻心房纤维化的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)NRON在心房纤维化过程中的作用。方法使用qRT-PCR检测NRON在心房组织中的表达水平。通过蛋白质印迹法测定胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、NFATc3和pNFATc3的蛋白水平。再进行免疫组织化学测定以观察心房组织中胶原Ⅰ的表达和分布。通过波形蛋白/肌钙蛋白免疫荧光染色对心房成纤维细胞进行鉴定。继而用CCK-8分析检测成纤维细胞增殖。通过HE染色观察心脏组织的形态变化,最后Masson染色检测心肌纤维化。结果NRON可以抑制成纤维细胞增殖与胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的表达,激活NFATc3和核素导入。过表达NRON可以促进NFATc3的磷酸化,从而抑制小鼠心脏纤维化进程。结论LncRNA NRON促进NFATc3磷酸化,抑制活化T细胞因子(NFAT)的活性,从而抑制心房组织的纤维化进程。

长链非编码RNA及其相关信号通路在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种常见的恶性肿瘤,其发病机制尚不明确,但发病率高。大多数患者在癌症晚期时确诊,因此治疗手段和治疗药物的选择有限,整体预后较差。HCC的发病可能涉及遗传学和表观遗传学改变,在HCC中Wnt、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Janus激酶/信号转导及转录活化因子(JAK/STAT)等信号通路异常激活,并参与了肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、耐药等。部分肝脏差异性表达的长链非编码RNA(lncRNA)参与HCC中Wnt、PI3K/Akt/mTOR、JAK/STAT信号通路的表达调控且涉及多种机制,深入研究lncRNA与相关信号通路的作用对于HCC治疗及预测有重要作用。

血清长链非编码RNA n342721在急性心肌梗死患者中的表达及意义

目的探索一种新的长链非编码RNA n342721(lncRNA n342721)在急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达及临床意义。方法采用人类全转录组芯片2.0技术在5例AMI患者和5例非冠心病(non-CHD)者血清检测lncRNA的表达,筛选出表达水平差异明显的6个上调lncRNA;并在20例AMI患者和20例non-CHD者血清、体外Jurkat T细胞中进一步验证和筛选,从中选择差异最大的lncRNA n342721进行研究。为了探索lncRNA n342721的临床价值,对60例AMI和60例non-CHD血清lncRNA n342721表达及临床资料进行分析。进一步在T细胞水平过表达和沉默lncRNA n342721,检测细胞炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及胆固醇转运相关指标肝X受体β(LXR-β)、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)的变化。结果与non-CHD相比,AMI患者血清中差异表达的lncRNA有296个上调,74个下调。在筛选的6个lncRNA中,选择在血清和T细胞水平表达差异最大的lncRNA n342721作为主要研究对象。实时荧光定量PCR检测发现,AMI组(n=60)血清lncRNA n342721表达较non-CHD组(n=60)明显升高(P<0.05),进一步Logistic回归分析表明,血清lncRNA n342721与AMI发生密切相关。通过构建lncRNA n342721过表达慢病毒和小干扰RNA转染T细胞后发现,与对照组相比,过表达组TNF-α、IL-6表达增加(P<0.05),IL-10、LXR-β、ABCA1、ABCG1表达降低(P<0.05),沉默组TNF-α、IL-6表达降低(P<0.05),IL-10、LXR-β、ABCA1、ABCG1表达增加(P<0.05)。结论血清lncRNA n342721作为新的生物标志物,可能通过促进免疫炎症反应和抑制胆固醇逆向转运促进AMI的发生发展。

lncRNA LAMA5-AS1通过上调TFPI2表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和迁移

目的:检测鼻咽癌组织和细胞株中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LAMA5-AS1的表达,观察lncRNA LAMA5-AS1对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响并探讨其作用机制。方法:荧光实时定量聚合酶链式反应(qPCR)分别检测lncRNA LAMA5-AS1在68例鼻咽癌组织及62例慢性鼻咽炎组织、鼻咽癌细胞株及永生化鼻咽上皮细胞中的相对表达。选择lncRNA LAMA5-AS1表达最少的细胞株,分别转染阴性对照质粒(对照组)或载有lncRNA LAMA5-AS1序列质粒(实验组)。MTS法和细胞划痕实验分别检测高表达lncRNA LAMA5-AS1对细胞增殖和迁移能力的影响。qPCR检测高表达lncRNA LAMA5-AS1对组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI2)基因mRNA表达的影响,Western blotting检测TFPI2蛋白和ERK信号通路蛋白表达。结果:与慢性鼻咽炎组织比较,lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌组织中表达明显降低(P<0.01)。与人永生化鼻咽上皮细胞比较,lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌细胞株中表达明显降低(P<0.01),在CNE-2Z细胞中的表达最少(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力从第3天开始明显降低(P<0.05),实验组CNE-2Z细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TFPI2在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),ERK信号通路蛋白p-ERK、MSK1、MNK和STAT3表达明显降低。结论:lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌组织和细胞株中表达明显降低,高表达lncRNA LAMA5-AS1可通过上调TFPI2基因表达、下调ERK信号通路活性,抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和迁移能力。

lncRNA PCAT19吸附miR-142-5p调控ING3基因表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的:检测长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)PCAT19在鼻咽癌组织和细胞株中的表达量,探讨其抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测鼻咽癌组织和5种鼻咽癌细胞株中PCAT19的相对表达。在表达最低的鼻咽癌细胞株转染空载质粒(对照组)或高表达PCAT19质粒(实验组)。qRT-PCR检测转染效率。MTS法和Transwell侵袭实验分别检测高表达PCAT19对鼻咽癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响。生物信息学预测PCAT19的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测靶基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果:与慢性鼻咽炎组织比较,PCAT19在鼻咽癌组织的表达降低(P<0.01)。与永生化鼻咽上皮细胞比较,5种鼻咽癌细胞株PCAT19的表达均明显降低(P<0.05),SUNE-1细胞中的表达最低(P<0.01)。转染高表达PCAT19质粒可明显促进PCAT19的表达(P<0.01)。高表达PCAT19可抑制鼻咽癌SUNE-1细胞的增殖能力(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。PCAT19的靶基因是miR-142-5p,miR-142-5p的靶基因生长抑制因子3(inhibitor of growth gene 3,ING3)。高表达PCAT19后,miR-142-5p表达明显降低(P<0.01),而ING3在mRNA和蛋白水平上的表达均明显增加(P<0.01)。结论:鼻咽癌组织和细胞株中PCAT19的表达下调。上调PCAT19可抑制鼻咽癌SUNE-1细胞的增殖和侵袭能力,其作用机制可能是PCAT19通过吸附miR-142-5p促进ING3基因的表达。

血清IGF-1、lncRNA TCL6在重度子痫前期孕妇中的表达及其对不良妊娠结局的预测价值

目的探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、长链非编码RNA T细胞白血病/淋巴瘤基因6(lncRNA TCL6)在重度子痫前期(SPE)孕妇中的表达及对不良妊娠结局的预测价值。方法选取2021年1月至2023年1月该院收治的124例SPE患者为SPE组,另选取同期100例健康孕妇为对照组,根据是否发生不良妊娠结局将SPE患者分为结局不良亚组47例和结局良好亚组77例。采用酶联免疫吸附试验与实时荧光定量聚合酶链反应分别检测血清IGF-1和lncRNA TCL6水平。采用多因素Logistic回归分析SPE孕妇不良妊娠结局的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IGF-1、lncRNA TCL6水平对SPE孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,SPE组血清IGF-1水平降低,lncRNA TCL6水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与结局良好亚组比较,结局不良亚组血清IGF-1水平降低,24 h尿蛋白定量及lncRNA TCL6水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,24 h尿蛋白定量升高(OR=1.155,95%CI:1.031~1.294)和lncRNA TCL6(OR=1.206,95%CI:1.110~1.310)水平升高为SPE孕妇不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05),IGF-1(OR=0.922,95%CI:0.883~0.964)水平升高为SPE孕妇不良妊娠结局独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清IGF-1、lncRNA TCL6水平联合检测预测SPE孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.888(95%CI:0.819~0.937),大于血清IGF-1、lncRNA TCL6水平单独预测的AUC[0.813(95%CI:0.733~0.878)、0.803(95%CI:0.722~0.869)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清IGF-1和lncRNA TCL6在SPE孕妇不良妊娠结局预测中具有潜在价值,二者联合检测对SPE孕妇不良妊娠结局的预测价值较高。

lncRNA MIF-AS1调节miR-423-5p/PYCR1轴对前列腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)巨噬细胞移动抑制因子反义RNA1(MIF-AS1)调节miR-423-5p/吡咯啉-5-羧酸还原酶1(PYCR1)轴对前列腺癌(PC)细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养PC3细胞,敲低MIF-AS1或下调miR-423-5p表达,检测PC患者肿瘤组织与癌旁组织和细胞中MIF-AS1、miR-423-5p和PYCR1 mRNA的表达;检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot检测PYCR1蛋白表达;验证miR-423-5p和MIF-AS1、PYCR1的关系。结果MIF-AS1、PYCR1 mRNA在肿瘤组织中呈高表达,miR-423-5p呈低表达。沉默MIF-AS1可抑制PC3细胞增殖、迁移、侵袭及PYCR1表达,上调miR-423-5p表达,诱导细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-423-5p表达可逆转沉默MIF-AS1对PC3细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。MIF-AS1、PYCR1与miR-423-5p存在靶向调控关系。结论沉默MIF-AS1可能通过上调miR-423-5p来抑制PYCR1表达,抑制PC细胞的恶性行为。

LncRNA GAS5靶向miR-103减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)靶向微小RNA(miR)-103,从而减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的机制。方法培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组(转染pEGFP-C1空载体)、GAS5过表达组(转染pEGFP-C1-GAS5载体)、GAS5过表达+mimic NC组(转染pEGFP-C1-GAS5+mimic NC)、GAS5过表达+miR-103 mimic组(转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic)。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平;液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IRS-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定miR-103与GAS5的靶向位点。结果诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显,呈"指环样"结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 m RNA水平降低(P<0.05);与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,miR-103 mRNA水平升高(P<0.05)。miR-103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达可减轻3T3L1脂肪细胞IR。

高血压脑出血患者外周血细胞周期激酶抑制因子4基因座中的长链非编码RNA与颅内血管狭窄程度及患者预后的关系

目的探究高血压脑出血(HICH)患者外周血细胞周期激酶抑制因子4基因座中的长链非编码RNA(LncRNA-ANRIL)与CT血管造影(CTA)检查血管狭窄程度及患者预后的相关性。方法选取2014年6月-2019年6月收治的HICH患者420例作为研究对象。所有患者均行CTA、外周血LncRNA-ANRIL检查,并给予相应治疗。根据血管狭窄程度,将患者分为轻度狭窄组(148例)、中度狭窄组(157例)、重度狭窄组(79例)、血管闭塞组(36例);根据术后6个月的改良Rankin评分(mRS)分为预后良好组(374例,mRS评分<3分)与预后不良组(46例,mRS评分≥3分)。比较外周血LncRNA-ANRIL水平,并采用多元logistic回归对血管狭窄和预后的相关因素进行分析。结果不同血管狭窄程度组患者外周血LncRNA-ANRIL相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),ANRIL(外显子1-2)与ANRIL(外显子17-18)相对表达量从高到低均为血管闭塞组>重度狭窄组>中度狭窄组>轻度狭窄组。预后不良组患者ANRIL(外显子1-2)与ANRIL(外显子17-18)相对表达量高于预后良好组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果提示,ANRIL(外显子1-2)与ANRIL(外显子17-18)相对表达量与mRS评分呈正相关(r分别为0.805、0.917,P<0.05)。多因素分析显示,ANRIL(外显子1-2)与ANRIL(外显子17-18)相对表达量是血管狭窄程度和预后的影响因素(P<0.05)。结论Lnc RNA-ANRIL的表达水平与HICH患者血管狭窄程度及预后相关。

肿瘤抑制候选基因-7、叉头框转录因子M1、鳞状细胞癌抗原在食管癌中的表达及意义分析

目的探讨长链非编码RNA肿瘤抑制候选基因-7(LncRNATUSC7)、叉头框转录因子M1(Foxm1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)在食管癌中的表达及意义。方法我院收治的78例食管癌患者,根据肿瘤分期分为早中期组(TNM分期Ⅰ~Ⅱ期)32例与中晚期组(TNM分期Ⅲ~Ⅳ期)46例,比较两组LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平,分析LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平与食管癌肿瘤分期的相关性以及对食管癌肿瘤分期评估效能。结果中晚期组LncRNATUSC7水平低于早中期组,Foxm1、SCC-Ag水平高于早中期组(P<0.05)。食管癌患者LncRNATUSC7水平与肿瘤分期呈负相关,Foxm1、SCC-Ag水平与肿瘤分期呈正相关(P<0.05);三项指标评估食管癌肿瘤分期的ROC曲线AUC分别为0.914、0.871、0.795,截断值分别为0.27、1.40、5.15 ng/ml。结论不同肿瘤分期的食管癌患者LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平存在明显差异,且三项指标可有效反映食管癌患者病情进展程度,可用于该病患者病情监测及治疗指导,临床应用价值较高。

急性冠脉综合征患者血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184水平与介入治疗后冠状动脉再狭窄发生的相关性研究

目的分析急性冠脉综合征(ACS)患者血清长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B基因反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)、微小RNA-184(miR-184)水平与经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后冠状动脉再狭窄(RS)发生的相关性。方法选取2020年2月至2023年3月在该院行PCI治疗的288例ACS患者,根据术后6个月复查造影结果分为RS发生组96例和RS未发生组192例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184相对表达水平;采用Pearson相关性分析血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184相关性;影响ACS患者PCI后RS发生的因素采用多因素Logistic回归分析;以受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184对ACS患者PCI后RS发生的评估价值。结果与RS未发生组相比,RS发生组血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);两组超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素18(IL-18)、总胆红素(TBIL)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184水平呈显著负相关(r=-0.427,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA CDKN2B-AS1、hs-CRP、IL-18、cTnI是影响ACS患者PCI后RS发生的危险因素,miR-184、TBIL是影响ACS患者PCI后RS发生的保护因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184及二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.844、0.929,二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的AUC显著高于血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184单独评估(Z_(二者联合-lncRNA CDKN2B-AS1)=4.490、Z_(二者联合-miR-184)=3.429,均P<0.05)。结论ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,与ACS患者PCI后RS发生具有相关性,均是影响ACS患者PCI后RS发生的因素,且二者联合对ACS患者PCI后RS发生的评估效能更佳。

长链非编码RNA Dnm3os在心肌成纤维细胞活化中的作用研究

长链非编码RNA(lncRNA)Dnm3os在肌腱周围组织纤维化和肺纤维化中发挥了重要作用,但其是否参与心肌纤维化过程,目前尚不清楚。为此,本研究利用课题组前期通过胸主动脉缩窄术(TAC)所致的小鼠纤维化模型的心脏组织,以及转化生长因子-β1(TGF-β1)所诱导的体外心肌成纤维细胞活化模型,采用定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及胶原凝胶收缩等方法,对心肌成纤维细胞活化表型和Dnm3os的表达变化进行鉴定和检测。并通过RNA干扰技术来沉默Dnm3os,以探究其在心肌成纤维细胞活化过程中的作用。结果表明,Dnm3os在小鼠纤维化心肌组织和体外培养活化的心肌成纤维细胞中均表达升高,而沉默其表达则可明显缓解心肌成纤维细胞活化。此外,TGF-β1/Smad2/3通路在心肌成纤维细胞活化过程中被激活;而沉默Dnm3os后,该通路受到抑制。本研究的结果提示,沉默Dnm3os可通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路来影响心肌成纤维细胞的活化过程。因此,干预lncRNA Dnm3os的表达可能成为治疗心肌纤维化的潜在靶点。

lncRNA NRON靶向miR-185-5p调节乳腺癌细胞化疗耐药性的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA抑制因子活化T细胞(lncRNA NRON)对miR-185-5p的调控作用及其影响乳腺癌细胞增殖、凋亡及化疗耐药性的基因调控机制。方法 2020年8月—2021年12月于陆军军医大学大坪医院中心实验室进行实验。选取2016年7月—2020年7月于医院乳腺甲状腺外科行手术切除的乳腺癌患者26例的癌组织及癌旁组织样本,体外培养正常乳腺上皮细胞系(MCF10A)及乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-231、T47D、SKBR3、ZR7530、BT549、HCC1937、BT474)。qRT-PCR法检测lncRNA NRON、miR-185-5p基因表达;双荧光素酶试验验证lncRNA NRON与miR-185-5p的靶向关系。将MCF7乳腺癌细胞分为阴性对照(NC)组、plasmid NRON组(转染lncRNA NRON过表达载体)、plasmid NRON+mimic NC组(转染plasmid NRON+mimic NC)、plasmid NRON+miR-185-5p mimic组(转染plasmid NRON+miR-185-5p模拟物),分别给予5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、紫杉醇(PTX)培养,CCK-8法检测细胞增殖情况(OD值)、半数抑制浓度(IC_(50))及耐药指数(R),流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot法检测胸苷酸合成酶(TS)表达,裸鼠荷瘤实验验证化疗效果(瘤体体积、ki67表达)。结果 乳腺癌组织中lncRNA NRON表达低于癌旁组织,miR-185-5p表达高于癌旁组织(P<0.05);乳腺癌细胞系中lncRNA NRON表达低于正常乳腺上皮细胞系,miR-185-5p表达高于正常乳腺上皮细胞系(P<0.05)。与NC组比较,plasmid NRON组MCF7细胞对5-FU、DDP、PTX的IC_(50)及R值降低(P<0.01);OD值降低,凋亡率及TS表达升高(P<0.01);裸鼠瘤体体积、ki67表达降低(P<0.01)。双荧光素酶试验显示,lncRNA NRON与miR-185-5p之间有靶向结合关系,lncRNA NRON可靶向下调miR-185-5p表达。与plasmid NRON组比较,plasmid NRON+miR-185-5p mimic组裸鼠瘤体体积升高(P<0.05),TS蛋白降低(P<0.05);而plasmid NRON组与plasmid NRON+mimic NC组比较上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 lncRNA NRON可通过靶向下调miR-185-5p降低乳腺癌细胞对化疗药物的耐药性。

LncRNA XIST调节miR-424-5p/SOCS6轴对牙周炎大鼠成骨分化的影响

目的:长链非编码RNA X无活性特异性转录物(long-chain non coding RNA X-inactive specific transcript,lncRNA XIST)调节微小RNA-424-5p(miR-424-5p)/细胞因子信号转导抑制因子6(suppressor of cytokine signaling 6,SOCS6)轴对牙周炎大鼠成骨分化的影响。方法:利用丝线结扎联合菌液注射诱导大鼠牙周炎模型,并分为模型(Model)组、oe-NC组、oe-XIST组、oe-XIST+NC-agomir组、oe-XIST+miR-424-5p-agomir组,另选取10只大鼠作为对照(Control)组。分离和培养大鼠原代牙周韧带干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSC),并分为NC组、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α组、oe-NC组、oe-XIST组、oe-XIST+miR-424-5p-NC组、oe-XIST+miR-424-5p-mimics组,除NC组外,其余组细胞均利用TNF-α培养PDLSC诱导牙周炎细胞模型。ELISA检测大鼠血清炎症因子水平;HE染色检测大鼠牙周组织的病理学形态;RT-qPCR检测牙周组织及PDLSC中LncRNA XIST、miR-424-5p和SOCS6 mRNA的表达水平;CCK-8检测细胞增殖;茜素红染色检测细胞成骨分化能力;试剂盒测定细胞中ALP活性;Western blot检测细胞中SOCS6及成骨分化相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST、miR-424-5p和SOCS6之间的靶向关系。结果:在牙周炎大鼠实验中,过表达LncRNA XIST可以改善大鼠牙周组织的病理损伤,减轻炎症细胞浸润,降低大鼠血清中TNF-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平及miR-424-5p表达量,提高LncRNA XIST和SOCS6 mRNA表达量(P<0.05)。在PDLSC实验中,LncRNA XIST过表达可以提高TNF-α诱导后PDLSC的存活率、钙沉积量、ALP活性、LncRNA XIST和SOCS6 mRNA表达量以及SOCS6、RUNX2、OCN蛋白表达,降低细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平及miR-424-5p表达量(P<0.05)。而LncRNA XIST和miR-424-5p共同过表达进一步加重大鼠的牙周组织损伤,降低PDLSC的存活率、钙沉积量、ALP活性、SOCS6 mRNA表达量以及SOCS6、RUNX2、OCN蛋白表达,提高细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平及miR-424-5p表达量(P<0.05)。结论:LncRNA XIST可能通过调控miR-424-5p/SOCS6信号轴促进牙周炎大鼠成骨分化。

LncRNA与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药关系及机制研究进展

目的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类转录长度>200个核苷酸的RNA,无蛋白质编码功能,广泛存在于各种生物中,其种类繁多,作用机制复杂。本文综述了LncRNA在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKIs)耐药中的作用及机制。方法应用PubMed及中国知网等数据库,以"LncRNA、非小细胞肺癌、EGFRTKIs、耐药"等为关键词,检索2003-2018年的相关文献,共检索到文献166篇。纳入标准:(1)与NSCLC EGFR-TKIs相关的文献;(2)与NSCLC EGFR-TKIs耐药相关的文献;(3)与NSCLC EGFR-TKIs相关LncRNA的文献。根据纳入标准,最后分析51篇高度相关的文献。结果针对EGFR-TKIs耐药机制,除了常见的EGFR T790M突变外,多个研究表明LncRNA与EGFR-TKIs耐药的产生有密切的关系。异常表达的LncRNA可广泛调控基因的表达,通过参与X染色体沉默、基因组印记和转录激活等途径,调控细胞的增殖、分化及凋亡,参与肿瘤的发生和发展。在EGFR-TKIs敏感和耐药细胞中多种LncRNA表达不同,且通过不同的耐药机制参与EGFR-TKIs耐药,其中常见的有MALAT1、MIR31HG、UCA1、BC087858和GAS5等。结论深入研究LncRNA在NSCLC EGFR-TKIs耐药机制中所起的作用,有望为NSCLC EGFR-TKIs耐药患者找到新的靶点,进而延长患者的生存时间及提高患者的生活质量。