长链非编码RNA结肠癌相关转录本2在胃癌血清中的表达及临床意义

目的:检测长链非编码RNA结肠癌相关转录本2(CCAT2)在胃癌患者和正常对照组血清中的差异表达,探讨其对胃癌临床诊断的效能及意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测胃癌和正常对照组血清CCAT2的表达,分析其与胃癌临床病理特征的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线和危险分数分析法评估CCAT2对胃癌的诊断效能,并与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)以及甲胎蛋白(AFP)的诊断效能进行比较。结果:胃癌患者血清中CCAT2的表达量明显高于正常对照组;其表达水平与年龄、性别、肿瘤临床分期、淋巴结转移以及肿瘤远处转移等均不相关,但与肿瘤细胞的分化程度呈负相关。CCAT2诊断胃癌的曲线下面积为0.619,敏感度和特异度分别为78.63%和53.00%,阳性预测值和阴性预测值分别为66.18%和67.95%。与CA19-9、CEA以及CA72-4相比,诊断的敏感度显著增高。结论:CCAT2在胃癌血清中高表达,有可能成为胃癌临床诊断的潜在生物标志物。

长链非编码RNA-MIAT在转化生长因子β2诱导的晶状体上皮－间质转化中的作用

目的探讨长链非编码RNA（LncRNA）－心肌梗死相关转录物（MIAT）在转化生长因子β2（TGF-β2）诱导的晶状体上皮细胞（LECs）纤维化过程中的作用及其对后发性白内障形成的影响。 方法对LECs永生系SRA01/04细胞进行培养，将培养的细胞分为正常对照组和TGF-β2组，分别用DMEM培养液和含10 ng/ml TGF-β2DMEM培养液培养48 h，光学显微镜下观察TGF-β2诱导的各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中MIAT及上皮－间质转化（EMT）相关标志物E－钙黏素（E-cad）、α－平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和胶原蛋白Ⅰ（CollⅠ）蛋白及其mRNA相对表达量变化；分别用siRNA空载体和siRNA-MIAT转染DMEM培养的（siNRA空载体组、siRNA-MIAT转染组）或用含10 ng/ml TGF-β2 DMEM培养的（siNRA＋TGF-β2组、siRNA-MIAT＋TGF-β2组）SRA01/04细胞48 h，光学显微镜下观察各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中MIAT、E-cad、α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA的表达变化。结果正常对照组培养细胞呈圆形和多角形，TGF-β2诱导组细胞呈长梭形。与正常对照组比较，TGF-β2诱导组细胞中MIAT mRNA、α-SMA mRNA和CollⅠmRNA相对表达量明显升高（2.497±0.644 vs.0.827±0.062；2.951±0.146 vs.1.085±0.517；2.115±0.090 vs.1.002±0.088），而E-Cad mRNA相对表达量明显下降（0.102±0.027 vs.1.020±0.262），差异均有统计学意义（P＝0.045、0.004、0.000、0.025），上述因子的蛋白水平表达趋势与mRNA相同。与siRNA空载体组比较，siRNA-MIAT转染组均能明显下降细胞内MIAT含量，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与siRNA＋TGF-β2组比较，siRNA-MIAT＋TGF-β2组细胞中α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA相对表达量均明显下降，差异均有统计学意义（均P〈0.01），E-cad蛋白及其mRNA相对表达量明显增加，差异有统计学意义（P＝0.008、0.000）。结论MIAT参与TGF-β2诱导的SRA01/04细胞EMT过程，下调MIAT可抑制晶状体上皮－间质转化的发生。

长链非编码RNA MALAT1在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对细胞侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录物1(lncRNA MALAT1)在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响。方法 (1)采用qRT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞及正常成骨细胞系h FOB1.19中的lncRNA MALAT1表达。(2)将MG-63细胞随机分为MALAT1沉默组和MALAT1非沉默组,分别转染MALAT1-siRNA质粒及con-siRNA质粒;转染48 h,采用qRT-PCR法检测lncRNA MALAT1表达,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测ROCK1蛋白表达。(3)将MG-63细胞随机分为对照组、MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组及MALAT1沉默+ROCK1过表达组,分别转染con-siRNA质粒、MALAT1-siRNA质粒、MALAT1-siRNA+pcDNA质粒、MALAT1-siRNA+oe-ROCK1质粒;转染48 h检测各组ROCK1蛋白表达和细胞侵袭能力。结果 (1)MG-63细胞lncRNA MALAT1相对表达量高于hFOB 1.19细胞(P<0.01)。(2)MALAT1沉默组lncRNA MALAT1相对表达量、细胞侵袭能力及ROCK1蛋白相对表达量均低于MALAT1非沉默组(P均<0.01)。(3)对照组、MALAT1沉默+ROCK1过表达组ROCK1蛋白表达及细胞侵袭能力均高于MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组(P均<0.01)。结论骨肉瘤细胞lncRNA MALAT1表达升高;lncRNA MALAT1可能通过调控ROCK1表达而参与骨肉瘤细胞侵袭。

长链非编码RNA CCAT-2在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA结肠癌相关转录因子-2(LncRNA CCAT-2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测CCAT-2在60例经手术切除术后病理证实为HCC的癌组织及其配对癌旁组织中的差异性表达,并分析CCAT-2表达水平与患者的性别、年龄、HBs Ag、术前甲胎蛋白(AFP)水平、肿瘤大小、肿瘤数目、肿瘤分期、门脉癌栓和分化程度等临床病理参数间的关系。结果 CCAT-2在HCC组织中的相对表达量为5.26±2.08,与癌旁组织比较,差异有统计学意义(P=0.001);CCAT-2表达与性别、年龄、HBs Ag及肿瘤数目无关(P>0.05),而与AFP水平、肿瘤大小、肿瘤分期、门脉癌栓和分化程度有关(P<0.05)。结论 CCAT-2可能在HCC的发生发展、浸润和转移过程中起到了一个推动作用。

肝癌组织中长链非编码RNA CCAT2的表达变化及意义

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)在肝癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法收集100例份HCC患者的癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测癌及癌旁组织中CCAT2表达;分析癌组织中CCAT2表达与HCC患者临床病理特征间的关系;Kaplan-Meier法检测CCAT2表达与患者生存率间的关系。结果 LncRNA CCAT2在HCC癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);LncRNA CCAT2表达与HCC患者的TNM分期、肝内播散灶及血管侵袭密切相关(P均<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小及肝硬化无关(P均>0.05);Log Rank检验结果显示,CCAT2高表达与HCC患者不良预后呈正相关(χ~2=6.481,P=0.011)。结论 HCC癌组织中LncRNA CCAT2呈高表达,且与TNM分期、肝内播散、血管侵袭有关;检测LncRNA CCAT2在癌组织中的表达有助于病情判断。

溃疡性结肠炎患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平及与预后相关性研究

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本2(long non-coding RNA myocardial infarction-related transcript 2,LncRNA Mirt2)、长链非编码RNA干扰素γ-反义RNA1(long non-coding RNA interferonγ-antisense RNA 1,LncRNA IFNG-AS1)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清中表达情况及与UC患者预后相关性。方法选择2018年12月~2021年1月南京市浦口区中医院(南京市中医院浦口分院)收治的193例UC患者作为观察对象,其中缓解期85例,活动期108例。根据患者预后情况分为复发组(n=78)和未复发组(n=115),另选取同期190例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平,Pearson法分析UC患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平相关性及LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1与C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相关性;ROC曲线分析血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1对复发UC的诊断价值。结果与对照组比较,缓解期组与活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.92±0.10,0.71±0.08vs 1.07±0.12)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(1.63±0.25,2.27±0.42 vs 1.01±0.14)表达水平及CRP(13.42±4.71mg/L,25.38±6.29 mg/L vs 4.32±1.27 mg/L),IL-6(8.31±2.35pg/ml,16.55±4.52 pg/mlvs 2.87±0.78 pg/ml),TNF-α(15.38±4.29 pg/ml,28.94±6.37 pg/ml vs 8.42±1.63 pg/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=10.064~44.632,均P<0.001);与缓解期组相比,活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平及CRP,IL-6,TNF-α水平升高,差异具有统计学意义(t=12.420~16.844,均P<0.001);与轻度组比较,中、重度组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.69±0.08,0.58±0.05 vs 0.81±0.06)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(2.25±0.48,2.83±0.25 vs 1.90±0.31)表达水平升高,差异有统计意义(t=3.890~17.225,均P<0.001);与中度组比较,重度组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,差异具有统计学意义(t=6.184,5.957,均P<0.001)。相关性分析显示,UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈负相关(r=-0.623,-0.605,-0.571,均P<0.001),LncRNA IFNG-AS1表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈正相关(r=0.457,0.531,0.497,均P<0.001)。与未复发组比较,复发组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.70±0.08 vs 0.87±0.11)表达水平显著降低,LncRNA IFNG-AS1(2.38±0.41 vs 1.72±0.28)表达水平显著升高(t=11.706,13.294,均P<0.001);血清LncRNA Mirt2,LncRNA IFNG-AS1联合诊断复发UC的曲线下面积为0.931(95%CI:0.886~0.963),敏感度和特异度分别为87.18%,86.96%;阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为81.93%,90.91%和87.05%。结论UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低、LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,与炎症水平和患者预后有关,可作为反映UC患者病情与预后的标志物。

lncRNA RMST靶向miR-224-3p调控缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)横纹肌肉瘤相关转录物-2(RMST)对建立缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响和可能机制。方法:体外培养人心肌细胞株(HCM),建立H/R损伤模型,分为对照组、H/R模型组、H/R+si-NC组、H/R+si-RMST组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-224-3p组、H/R+si-RMST+anti-miR-NC组和H/R+si-RMST+anti-miR-224-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RMST和miR-224-3p表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和乳酸脱氢酶(LDH)水平。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA RMST对miR-224-3p的靶向作用。结果:与对照组比较,H/R模型组心肌细胞凋亡率、MDA含量、LDH释放量、RMST表达明显升高,细胞存活率、SOD和GSH-Px水平、miR-224-3p表达明显降低(P<0.05)。与H/R+si-NC组比较,H/R+si-RMST组心肌细胞凋亡率、MDA含量、LDH释放量明显降低,细胞存活率、SOD和GSH-Px水平升高(P<0.05)。与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-224-3p组心肌细胞凋亡率、MDA含量、LDH释放量明显降低,细胞存活率、SOD和GSH-Px水平升高(P<0.05)。与H/R+si-RMST+anti-miR-NC组比较,H/R+si-RMST+anti-miR-224-3p组心肌细胞凋亡率、MDA含量、LDH释放量明显升高,细胞存活率、SOD和GSH-Px水平降低(P<0.05)。lncRNA RMST可负调控靶基因miR-224-3p表达。结论:通过抑制lncRNA RMST靶向上调miR-224-3p能够减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

长链非编码RNA在膀胱癌中的研究概况

随着二代测序技术的广泛应用和基因层面上肿瘤学研究的深入,曾被忽略、被低估的lncRNA被揭示与人类肿瘤的发生发展密切相关,从不同的生物学途径影响肿瘤的发生、发展。研究发现,lncRNA与膀胱癌的增殖、浸润、转移、复发、耐药等密切相关。本文将对lncRNA在膀胱癌中的研究概况进行综述。

长链非编码RNA结肠癌相关转录物2在人骨肉瘤组织的表达及其对人骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响

目的检测长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在人骨肉瘤中的表达并观察其对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测20例人骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织CCAT2的表达和人骨肉瘤MG63细胞与正常成骨细胞hFOB1.19的CCAT2表达。合成针对CCAT2的特异性小干扰RNA（si-CCAT2），通过脂质体介导，将其转染入MG63细胞，实验分为空白对照组、小干扰RNA（siRNA）-NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，后利用RT-qPCR技术检测4组细胞中CCAT2的表达量，验证siRNA沉默效果；细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖、侵袭和凋亡能力。结果CCAT2在人骨肉瘤组织和正常组织中的相对表达水平为2.448±1.013和1.551±0.769，两者差异有统计学意义（t＝3.295，P＝0.002）；在MG63细胞和hFOB1.19细胞的相对表达水平为2.357±0.157和1.329±0.498，两者差异有统计学意义（t＝2.566，P＝0.020）。沉默细胞中CCAT2后，与NC组（1.064±0.092）和空白对照组（1.076±0.135）比较，siRNA-1和siRNA-2组CCAT2表达量（0.499±0.030、0.519±0.097）明显下降（tsiRNA-1组＝7.248，PsiRNA-1组＝0.002；tsiRNA-2组＝5.814，PsiRNA-2组＝0.004）。降低CCAT2的表达后，MG63细胞增殖活性明显下降，siRNA-1组和siRNA-2组平均细胞侵袭个数为（40.00±2.00）、（38.67±2.08）个，较NC组[（65.00±3.61）个]和空白对照组[（65.33±3.51）个]明显减少（tsiRNA-1组＝10.857，PsiRNA-1组＝0.001；tsiRNA-2组＝11.314，PsiRNA-2组＝0.000）；细胞凋亡能力[（44.76±2.49）%、（46.53±2.66）%]较NC组[（5.01±0.20）%]和空白组[（5.43±0.47）%]明显增加（tsiRNA-1组＝26.832，PsiRNA-1组＝0.000；tsiRNA-2组＝26.370，PsiRNA-2组＝0.000）。结论lncRNA CCAT2在人骨肉瘤组织和细胞中表达上调，抑制CCAT2的表达可显著抑制MG63细胞的增殖和侵袭，促进细胞的凋亡。

长链非编码RNA胃癌相关转录本3在肝癌组织的表达及其对肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的探讨长链非编码RNA胃癌相关转录本3(lncRNA GACAT3)在肝癌组织的表达和对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测新乡医学院第一附属医院收治并手术治疗的73例肝癌患者的癌组织、癌旁组织,PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2肝癌细胞,以及正常肝细胞THLE-3中lncRNA GACAT3表达水平;阴性对照小干扰RNA(siRNA)和lncRNA GACAT3 siRNA转染HepG2肝癌细胞,Real-time PCR检测转染48 h后细胞lncRNA GACAT3表达,噻唑蓝(MTT)检测转染24、48、72 h各组细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组数据采用配对t检验或独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组数据两组间比较采用LSD-t检验.结果肝癌组织lncRNA GACAT3表达水平(3.10±1.93)显著高于癌旁组织(1.02±0.59,t=8.086,P<0.01);肝癌细胞PLC/PRF/5(1.92±0.21,t=7.074,P<0.01)、Hep3B(2.42±0.25,t=9.327,P<0.01)和HepG2(2.96±0.31,t=10.582,P<0.01)中lncRNA GACAT3表达水平均显著高于正常肝细胞(0.97±0.10).沉默GACAT3组细胞lncRNAGACAT3表达(0.16±0.02)显著低于沉默对照组(1.03±0.11,t=13.478,P<0.01),48 h和72 h细胞增殖能力显著降低(P<0.01),划痕愈合率、细胞迁移侵袭能力显著降低(P<0.01).细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin(0.15±0.02)及其下游蛋白骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)(0.22±0.02)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(0.21±0.02)表达较沉默对照组(0.81±0.08,t=13.863;0.65±0.07,t=9.731;0.78±0.08,t=10.230;P均<0.01)显著降低,p-β-catenin蛋白表达(0.75±0.08)显著高于沉默对照组(0.27±0.03,t=11.972,P<0.01).结论lncRNA GACAT3在肝癌中高表达,沉默lncRNA GACAT3能够抑制肝癌细胞增殖迁移侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.

高体积分数氧暴露下新生早产大鼠肺组织长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1和核转录相关因子-2表达变化的意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露下新生早产大鼠肺组织的长链非编码RNA（lncRNA）转移相关肺腺癌转录本1（MALAT1）和核转录相关因子－2（Nrf2）的动态表达，探讨MALAT1和Nrf2的表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法孕21 d SD大鼠行剖宫产，80只早产大鼠喂养24 h后按随机数字表法分为空气组和高氧组。空气组早产大鼠置于室内空气中饲养[吸入氧体积分数（FiO2）＝210 mL/L]，高氧组早产大鼠置于常压氧箱（FiO2〉850 mL/L）中饲养，2组新生早产大鼠分别于空气或高氧暴露后第1、4、7、10、14天处死并收集肺组织标本。采用苏木精－伊红染色法观察新生早产大鼠肺组织病理变化；采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）及Western blot技术分别检测MALAT1、Nrf2的RNA和蛋白表达水平。结果与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织肺泡化程度降低，辐射状肺泡计数（RAC）在第1天减少，但差异无统计学意义（P〉0.05），第4天[（3.14±0.23）个]、第7天[（5.25±0.38）个]、第10天[（4.41±0.44）个]、第14天[（3.41±0.13）个]均显著减少，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中MALAT1的RNA相对表达量在第1天（0.527±0.124）显著减弱，第4天（0.538±0.128）、第7天（0.748±0.071）均显著增强，第10天（0.519±0.081）显著减弱，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天时减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中Nrf2 mRNA的表达在第1天（0.791±0.031）显著减弱，第4天（0.977±0.189）、第7天（1.369±0.100）、第10天（1.094±0.104）均显著增强，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天表达减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中游离态Nrf2蛋白在各时间点表达均增强，Nrf2－Keap1结合型蛋白在各时间点表达均减弱。高氧作用下，MALAT1表达与RAC、Nrf2均呈正相关（r＝0.517、0.533，均P〈0.001）。结论肺组织损伤程度随高氧暴露时间延长逐渐加重，MALAT1表达与肺损伤程度及Nrf2水平具有相关性，提示MALAT1与Nrf2相关信号通路可能共同参与新生早产大鼠高氧肺损伤的发病过程。

LncRNA-CCAT2在结直肠癌患者中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA结肠癌相关转录物2(LncRNA-CCAT2)在结直肠癌(CRC)患者中的表达及其临床意义。方法收集2017年1月至2017年7月汉中市中心医院治疗的40例CRC患者的癌组织、癌旁组织、血清标本及40例无瘤患者的血清标本。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法分别检测标本中LncRNA-CCAT2的表达量;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CCAT2对CRC的诊断价值;采用Kaplan-Meier分析CCAT2对CRC患者生存的影响。结果相较于癌旁正常组织标本,CCAT2在癌组织标本中表达明显上调(P<0.05);相较于无瘤患者的血清标本,CCAT2在CRC患者血清标本中表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。当CCAT2联合CEA用于诊断CRC时,灵敏度、特异度、AUC分别为67.5%、87.5%、0.849。结论CCAT2可作为诊断及预测CRC预后的生物学标记物。

血清lncNEAT1和sTREM-2在SAE老年患者中的表达及临床意义

目的研究脓毒症相关性脑病(SAE)老年患者血清长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(lncNEAT1)和可溶性髓样细胞触发受体-2(sTREM-2)的表达及临床意义。方法选取2018年1月至2021年1月于该院诊治的224例脓毒症老年患者分为SAE组(合并SAE,84例)和对照组(未并发脑损伤,140例)。根据28 d生存情况,将SAE组分为存活组(44例)和死亡组(40例)。荧光定量PCR检测血清lncNEAT1水平,酶联免疫吸附试验检测血清sTREM-2水平。多因素Logistic回归分析影响SAE老年患者生存预后的因素。受试者工作特征曲线分析各指标对SAE老年患者生存预后的诊断价值。结果SAE组血清lncNEAT1(4.68±0.79 vs.2.03±0.37)、sTREM2[(25.14±4.34)pg/mL vs.(11.40±3.71)pg/mL]高于对照组,差异均有统计学意义(t=27.285、21.743,均P<0.05)。SAE老年患者血清lncNEAT1、sTREM2水平与降钙素原(PCT)、中枢神经特异性蛋白(S100β)、人神经元特异性烯醇化酶(NSE)、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)均呈正相关(r=0.451~0.674,均P<0.05)。血清lncNEAT1、sTREM2升高是影响SAE老年患者不良生存预后的独立危险因素。血清lncNEAT1、sTREM2联合检测评估SAE老年患者生存预后的曲线下面积为0.874,显著高于血清lncNEAT1、sTREM2单一指标,曲线下面积为0.797、0.820(Z=3.864、3.872,均P<0.05)。结论SAE老年患者血清lncNEAT1、sTREM2表达升高,是影响老年SAE生存预后的独立危险因素。

急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值

目的探究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke)患者长链非编码核糖核酸性别决定相关基因簇2重叠转录本(long non-coding RNA sex determination related gene cluster 2 overlapping transcript,lncRNA SOX2OT)、微小RNA(microRNA,miR)-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。方法选取2020年3月~2021年11月张家口市第二医院神经内科收治的120例急性缺血性脑卒中患者为研究组,另选取同期该院健康体检人员120例作为对照组。根据颈动脉超声检查情况将患者分为无斑块组24例、稳定斑块组40例和不稳定斑块组56例;依据患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分将患者分为轻度神经功能缺损组51例、中度神经功能缺损组47例和重度神经功能缺损组22例;实时荧光定量PCR法检测研究组和对照组血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平;Pearson法分析急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清lncRNA SOX2OT,miR-331水平对急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清lncRNA SOX2OT水平明显升高(1.86±0.47 vs 1.00±0.03),miR-331水平明显降低(0.51±0.14 vs 1.02±0.04),差异有统计学意义(t=20.004,38.370,均P<0.001);无斑块组、稳定斑块组和不稳定斑块组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.27±0.31,1.78±0.45,2.18±0.56),miR-331水平依次降低(0.74±0.19,0.56±0.16,0.37±0.10),差异均有统计学意义(F=30.671,60.656,均P<0.001);轻度神经功能缺损组、中度神经功能缺损组和重度神经功能缺损组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.58±0.41,1.94±0.48,2.35±0.60),miR-331水平依次降低(0.67±0.18,0.46±0.12,0.27±0.07),差异均有统计学意义(F=21.100,65.923,均P<0.001);急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT与miR-331水平呈负相关(r=-0.467,P<0.001);血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.819,0.766和0.921,血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者重度神经功能缺损的AUC分别为0.716,0.801和0.904,二者联合优于血清lncRNA SOX2OT和miR-331单独诊断(Z=2.211,3.179,2.673,2.081,均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT水平呈高表达,miR-331水平呈低表达,二者可作为评估急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的生物学指标。

沉默长链非编码RNA CCAT2对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨靶向沉默长链非编码RNA肠癌相关转录子2(lncRNA CCAT2)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测骨肉瘤MG63细胞与人成骨hFOB1.19细胞中lncRNA CCAT2表达水平;转染小干扰RNA沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达,qPCR方法验证沉默效率。沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率,Western blot方法检测MG63细胞p53及Bcl-2蛋白的表达变化。结果lncRNA CCAT2在骨肉瘤MG63细胞中的表达显著高于人成骨hFOB1.19细胞(P<0.01);转染小干扰RNA能够显著降低MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达水平(P<0.01)。沉默lncRNA CCAT2后,MG63细胞的增殖能力显著降低,凋亡率显著上升,Bcl-2蛋白表达显著降低p53蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论靶向沉默lncRNA CCAT2能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并诱导凋亡。

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达。收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05)。以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例。lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ^(2)分别为4.783、5.383,P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。

早期糖尿病肾病患者血清lncRNA MIAT和miR-361-3p的关系

目的分析早期糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)和微小RNA(miR)-361-3p的相关性。方法选取收治的130例2型糖尿病患者,按照尿白蛋白/肌酐比值(UACR)分为微量白蛋白尿(MA)组(61例)、正常白蛋白尿(NA)组(69例)。另以健康体检者65例为对照组。比较3组间血清lncRNA MIAT和miR-361-3p表达水平以及临床指标差异。Pearson法分析相关性。多因素logistic模型分析影响miR-361-3p的相关因素。结果对照组、NA组及MA组血清lncRNA MIAT表达水平呈依次升高趋势,miR-361-3p表达水平呈依次降低趋势(P<0.05)。MA组血清lncRNA MIAT与miR-361-3p表达水平呈负相关(r=-0.628,P=0.000)。血清miR-361-3p与空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA_(1C))、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、UACR存在负相关性,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肾小球滤过率(eGFR)存在正相关性。Logistic回归显示,FINS、lncRNA MIAT、FPG是miR-361-3p的影响因素。血清lncRNA MIAT、miR-361-3p以及联合诊断早期DN的曲线下面积分别为0.895、0.874、0.943。结论早期DN患者血清lncRNA MIAT与miR-361-3p呈负相关,lncRNA MIAT是miR-361-3p的独立影响因素,二者联合诊断早期DN效能较佳。

lncRNA TUG1对人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定其分化能力。hDPSCs成骨诱导0、7、14 d收集RNA,qRT-PCR检测TUG1的表达水平。构建携带sh-TUG1的慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA(TUG1)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,并通过感染hDPSCs及嘌呤霉素筛选建立稳定沉默TUG1的hDPSCs细胞系,CCK-8检测hDPSCs增殖能力,ALP和茜素红染色及定量检测hDPSCs的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成,qRT-PCR和Western blot检测成牙本质及成骨分化相关的基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentine matrix protein 1,DMP-1)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因及蛋白表达变化。结果成功分离、培养和鉴定hDPSCs,hDPSCs成骨向分化过程中TUG1的表达明显增加(P<0.05)。沉默TUG1后hDPSCs的增殖能力下降(P<0.05),ALP活性降低,矿化结节形成减少;成牙本质分化基因DSPP、DMP-1以及成骨分化基因Runx2、OCN、OPN表达也显著降低(P<0.05)。结论沉默TUG1可抑制hDPSCs的增殖及成骨/成牙本质分化。

LncRNA RMST在GMA诱导16HBE人支气管上皮细胞恶性转化过程中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)横纹肌肉瘤相关转录物-2(RMST)在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中的表达特征及生物学意义。方法收集GMA转化组和DMSO对照组的第10、20和30代细胞,高通量芯片分析LneRNA RMST在转化不同时期的表达改变,对其进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测LncRNA RMST和可能相互作用的miRNA相对表达量。结果芯片结果显示,与对照组相比,LncRNA RMST在转化的前期(P10)、中期(P20)和后期(P30)分别上调4.75倍、上调1.90倍和下调2.53倍,且相对表达量呈下降趋势。LneRNA RMST表达变化趋势的qPCR验证结果与芯片结果一致,而3个时期miR-135a-2相对表达量的差异均无统计学意义(P >0.05)。结论LncRNA RMST在GMA诱导16HBE细胞恶性转化的早、中期高表达,在转化完成时低表达,并呈下降的趋势;LncRNA RMST可以作为GMA诱导16HBE细胞恶性转化的相关分子标志物,其功能和作用机制有待进一步研究。

lncRNA MIAT调节miR-495-3p/STAT3信号通路对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(lncRNA MIAT)对高糖(HG)诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡的影响及分子机制。方法用HG处理人RPE细胞系ARPE-19以在体外模拟糖尿病视网膜病变(DR)。将用于lncRNA MIAT沉默的小干扰RNA(siRNA,si-MIAT)和阴性对照(si-NC)、miR-495-3p抑制剂(miR-495-3p inhibitor)及抑制剂对照(inhibitor-NC)转染ARPE-19细胞,分为HG+si-NC组、HG+si-MIAT组、HG+si-MIAT+anti-NC组、HG+si-MIAT+anti-miR-495-3p组,另设正常糖(NG)组和HG组。使用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞lncRNA MIAT、miR-495-3p、信号转导和转录激活因子(STAT)3 mRNA水平,MTT法测定细胞活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质印迹分析STAT3与凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶实验检测miR-495-3p与lncRNA MIAT或STAT3的靶标关系。建立DR小鼠模型,分为对照(Control)组、DR组、DR+si-NC组、DR+si-MIAT组,苏木素-伊红(HE)染色和原位末端标记染色(TUNEL)染色观察lncRNA MIAT敲低对DR小鼠视网膜组织损伤的影响,RT-qPCR和Western印迹检测视网膜组织lncRNA MIAT、miR-495-3p、STAT3表达。结果与NG组相比,HG组lncRNA MIAT、STAT3 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平和(Cleaved-Caspase)-3/Caspase-3比值升高,miR-495-3p水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.05)。敲低lncRNA MIAT可明显上调miR-495-3p,明显抑制STAT3表达,明显升高细胞存活率和Bcl-2蛋白水平,明显降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平和Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(均P<0.05)。下调miR-495-3p可升高STAT3水平,部分消除lncRNA MIAT敲低对HG诱导的ARPE-19细胞凋亡的抑制作用(均P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,过表达miR-495-3p可降低MIAT-野生型(WT)和STAT3-WT的荧光素酶活性(P<0.05)。体内实验结果显示,lncRNA MIAT敲低可通过上调miR-495-3p抑制STAT3表达,减轻DR小鼠视网膜损伤,抑制视网膜细胞凋亡。结论敲低lncRNA MIAT可能通过增强miR-495-3p对STAT3的抑制作用,减少HG诱导的人RPE细胞凋亡,减缓DR进展。