长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶-反义RNA1在肺癌发生发展中的作用研究进展

肺癌是世界上致死率最高的恶性肿瘤,其主要治疗手段为外科手术、化学治疗、放射治疗、靶向治疗等。烟酰胺核苷酸转氢酶-反义RNA1(NNT-AS1)作为新发现的长链非编码RNA(lncRNA)分子,通过miR-3666/E2F2、miR-22-3p/YAP1、miR-22/FOXM1、miR-1236-3p/ATG7、miR-129-5p、丝裂原活化蛋白激酶/Slug等信号通路,与肺癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭有关,还参与介导肺癌细胞的顺铂耐药性,与肺癌的不良生存结局和较差的临床病理特征显著相关,可以为肺癌提供新的治疗靶点及预后标志物。本文就lncRNA NNT-AS1在肺癌发生发展中的作用研究进展进行综述。

难治性肺炎支原体肺炎患儿血清长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1和烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1检测的临床意义

目的探讨难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)患儿血清长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)、烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase-antisense RNA1,NNT-AS1)检测的临床意义。方法选择2018年1月1日~2021年1月1日辽宁省健康产业集团阜新矿总医院收治的200例肺炎支原体肺炎患儿,其中43例为RMPP(RMPP组),157例为普通肺炎支原体肺炎(普通肺炎组),另选择100例健康儿童为对照组。检测血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平以及炎性因子[C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平。分析血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平与炎性因子水平的相关性。收集临床资料,分析影响RMPP发病的影响因素,比较不同疗效RMPP患儿血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平的差异。结果RMPP组、普通肺炎组和对照组血清LncRNA MALAT1(3.26±0.85,1.32±0.41和1.05±0.37)和LncRNA NNT-AS1(3.38±0.92,1.41±0.40和1.06±0.39)水平比较差异均有统计学意义(F=335.693,335.828,均P<0.05),血清CRP(45.24±2.01 mg/L,19.02±3.27 mg/L和3.26±0.77 mg/L),PCT(1.58±0.52μg/L,0.82±0.16μg/L和0.31±0.09μg/L),IL-8(42.77±8.84μg/L,26.35±5.91μg/L和13.02±3.79μg/L)和TNF-α(9.22±2.61μg/L,5.02±1.49μg/L和3.32±0.96μg/L)水平比较差异均有统计学意义(F=4207.164,457.187,410.300,214.875,均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示血清LncRNA MALAT1,LncRNA NNT-AS1表达水平均与CRP,PCT,IL-8,TNF-α水平呈正相关(r=0.715~0.922,均P<0.05)。Logistic逐步回归分析结果显示肺大片实变影[OR(95%CI)=2.212(1.396~3.506)]、CRP高表达[OR(95%CI)=2.111(1.313~3.392)]、LncRNA MALAT1高表达[OR(95%CI)=1.826(1.189~2.805)]、LncRNA NNT-AS1高表达[OR(95%CI)=1.758(1.149~2.689)]是RMPP发病的危险因素(均P<0.05)。43例RMPP患儿治疗有效38例(有效组),无效5例(无效组),有效组血清LncRNA MALAT1(3.16±0.24)和LncRNA NNT-AS1(3.29±0.20)表达水平低于无效组(4.02±0.09,4.06±0.10),差异有统计学意义(t=7.869,8.406,均P<0.05)。结论LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1可能通过调节炎症反应参与RMPP发病,检测LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达可为RMPP治疗疗效评估提供参考。

卵巢癌组织中酰胺核苷酸反义转氢酶及RNA1表达观察患者预后影响因素分析

目的观察卵巢癌组织酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)的表达变化,分析卵巢癌预后的影响因素。方法82例卵巢癌患者,均行肿瘤切除术,术中保留卵巢癌、癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NNT-AS1,比较不同临床病理特征的卵巢癌患者NNT-AS1表达差异,Kaplan-Meier法绘制不同NNT-AS1表达的卵巢癌患者无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)生存曲线。采用单因素和多因素Cox比例风险模型分析卵巢癌患者预后的影响因素因素。结果卵巢癌及癌旁组织NNT-AS1相对表达量分别为0.53±0.19、1.52±0.36,二者比较,P<0.05。低中度分化、Ⅲ~Ⅳ期、CA125≥200 U/mL、ERα阳性患者癌组织NNT-AS1表达低于高度分化、Ⅰ~Ⅱ期、CA125<200 U/mL、ERα阴性者(P均<0.05)。NNT-AS1低表达者PFS生存率、OS生存率分别为27.91%(12/43)、39.53%(17/43),NNT-AS1高表达者分别为56.41%(22/39)、76.92%(30/39),二者比较,P均<0.05。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、癌组织NNT-AS1相对表达量<0.53与卵巢癌患者的预后不良有关(OR分别为2.065,1.895;95%CI分别为1.989~2.127,1.715~1.953;P均<0.05)。结论卵巢癌组织中NNT-AS1表达降低。卵巢癌预后不良的因素有FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、癌组织NNT-AS1相对表达量<0.53。

长链非编码RNA GNAQ-ASI在高雄激素多囊卵巢综合征中的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法 在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-20b-5p的最佳抑制浓度,以Transwell小室检测细胞的迁移情况,并通过流式细胞术检测细胞周期。在动物水平上,将大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组、miRNA-20b-5p mimics组,每组10只。模型组连续灌服溶于1%羧甲基纤维素的来曲唑1 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3周,每周3次;lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组在模型建立的基础上,用siRNA沉默lncRNA GNAQ-AS1表达,每周注射1次,共3周;miRNA-20b-5p mimics组在模型建立的基础上,用miRNA-20b-5p mimics过表达miRNA-20b-5p,尾静脉注射给药,给药量为1 mg·kg^(-1),每周注射1次,共3周。对照组注射等体积的0.9%NaCl。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、血清抗缪勒管激素(AMH)、促卵泡生长激素(FSH)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测卵巢组织中lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2的表达情况,用蛋白质印迹法检测CDCD2蛋白表达水平。结果 CCK-8检测结果表明,当给予5μmol·L^(-1)lncRNA GNAQ-AS1 siRNA时,对照组和lncRNA GNAQ-AS1组的细胞存活率分别为(38.25±0.62)%和(86.14±3.13)%,当给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时,对照组和miRNA-20b-5p mimics组的细胞增殖抑制率分别为(40.70±0.32)%和(85.35±2.13)%,表明KGN细胞给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时细胞活力明显降低。在动物水平上,RT-qPCR结果显示:模型组的lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2 mRNA的表达分别为1.72±0.37、0.59±0.10和2.47±0.13,表明lncRNA GNAQ-AS1、CDCD2的表达水平在模型组中明显上调,miRNA-20b-5p表达水平较于对照组下调(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠血清LH、T和AMH水平明显升高,FSH和E2水平明显降低(均P<0.05)。与模型组相比,lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组LH、T和AMH水平显著降低,FSH和E2水平显著升高。与模型组相比,CDCD2蛋白表达水平在lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组均显著升高。结论 LncRNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控CDCD2在PCOS中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10^(7) TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌情况;通过CCK-8技术检测A549细胞增殖情况;通过流式细胞术检测A549细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织和A549细胞中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平显著升高,miR-22-3p水平显著降低(P<0.05)。此外,与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织的组织病理损伤水平、炎症反应和细胞凋亡率升高(P<0.05)。与ALI组、sh-NC组相比,抑制MALAT1表达可改善LPS诱导的ALI大鼠肺组织和细胞中的炎症反应和细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p存在相互调控关系。与ALI组、sh-NC组相比,sh-MALAT1组肺组织中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05),miR-22-3p水平升高(P<0.05)。同时,BALF上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05)。此外,下调MALAT1的同时抑制miR-22-3p表达后,细胞中miR-22-3p和Bcl-2表达水平显著降低,细胞增殖水平亦显著降低(P<0.05)。结论降低MALAT1的表达可通过促进miR-22-3p的表达,从而抑制NLRP3的蛋白水平,并最终抑制LPS诱导的ALI模型中的炎症反应和细胞凋亡。

LncRNANNT-AS1通过调控miR-582-5p/NCKAP1轴激活Hippo-YAP/TAZ信号通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞干性影响

目的检测膀胱癌中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1,NNT-AS1)表达情况,研究其对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响及可能分子机制。方法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测膀胱癌组织标本及细胞中LncRNA NNT-AS1表达情况;将膀胱癌细胞转染分为sh-NC组,sh-NNT-AS1组,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组和sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组。采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度值(A值);Transwell实验检测细胞迁移、侵袭穿膜数;细胞成球实验检测干细胞干性。检索starBase和TargetScan数据库,并通过双荧光素酶报告基因实验预测验证LncRNA NNT-AS1和miR-582-5p,miR-582-5p与NCKAP1的靶向结合关系。Western blot检测膀胱癌干细胞标志蛋白(CD44,ALDH1A1,Oct4,Nanog)及Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达灰度值。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA NNT-AS1表达水平(0.34±0.07 vs 1.15±0.21)明显升高,差异有统计学意义(t=16.364,P<0.001)。与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞(1.00±0.01)相比,膀胱癌细胞T24,5637,UM-UC-3和TCC-SUP中LncRNA NNT-AS1表达(6.03±0.17,4.66±0.36,5.47±0.26,3.02±0.20)明显升高,差异有统计学意义(t=17.472~51.160,均P<0.001)。与sh-NC组相比,在24,48和72 h时sh-NNT-AS1组细胞增值能力(A值)均显著降低(0.80±0.01 vs 1.07±0.06,1.18±0..07 vs 1.83±0.03,1.89±0.07 vs 2.53±0.06),差异有统计学意义(t=7.688,14.783,12.024,均P<0.05);sh-NNT-AS1组细胞迁移穿膜数(55.00±2.65个vs 354.30±7.84个)、细胞侵袭穿膜数(45.67±2.33个vs 303.00±9.07个)及膀胱癌干细胞成球数(20.85±2.17个vs 41.35±3.67个)显著降低,差异具有统计学意义(t=-62.641,-47.596,8.328,均P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-NNT-AS1组细胞中CD44(0.04±0.01 vs 1.12±0.02),ALDH1A1(0.23±0.01 vs 1.16±0.05),Oct4(0.17±0.02 vs 1.10±0.04),Nanog(0.49±0.03 vs 1.24±0.03)的蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=83.656,31.591,36.019,30.619,均P<0.001)。与si-NC组相比,sh-NNT-AS1组CD44+CD133+细胞比例(9.30%±0.79%vs 88.50%±2.77%)明显降低,差异有统计学意义(t=-47.624,P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-582-5p为LncRNANNT-AS1靶基因,NCKAP1为miR-582-5p靶基因;LncRNA NNT-AS1靶向调控miR-582-5p/NCKAP1轴。与sh-NNT-AS1组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞增值能力(A值)均明显升高(0.98±0.03 vs 0.73±0.06,1.74±0.04 vs 1.22±0.05,2.33±0.16 vs 1.69±0.14),差异有统计学意义(t=5.977~11.628,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞增值能力(A值)显著降低(0.69±0.04,1.01±0.07,1.39±0.08),差异有统计学意义(t=7.877~16.323,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞迁移穿膜数(322.31±28.45个vs 81.42±13.22个)、细胞侵袭穿膜数(316.07±30.21个vs 92.13±12.65个)及膀胱癌干细胞成球数(38.55±2.20个vs 18.98±1.16个)显著增加,差异具有统计学意义(t=15.115,13.158,14.592,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞CD44(1.05±0.08 vs 0.10±0.01),ALDH1A1(1.20±0.16 vs 0.22±0.02),Oct4(1.32±0.14 vs 0.19±0.03),Nanog(0.97±0.12 vs 0.15±0.04),YAP(1.29±0.11 vs 0.42±0.07)和TAZ(1.41±0.16 vs 0.35±0.05)蛋白表达灰度值均显著增加,差异具有统计学意义(t=10.650~21.243,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞迁移穿膜数(65.33±12.60个)、细胞侵袭穿膜数(71.08±15.19个)、膀胱癌干细胞成球数(11.36±1.05个)均显著降低,差异具有统计学意义(t=16.125,14.395,21.365,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞CD44(0.25±0.05),ALDH1A1(0.61±0.11),Oct4(0.22±0.08),Nanog(0.44±0.07),YAP(0.25±0.09)和TAZ(0.30±0.04)蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=6.412~17.889,均P<0.001)。结论膀胱癌中LncRNA NNT-AS1表达上调,其对膀胱癌细胞增殖、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响,可能是通过调控miR-582-5p/NCKAP1分子轴,激活Hippo-YAP/TAZ信号通路完成。

lncRNA NNT-AS1和miR-424在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的分析长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(lncRNA NNT-AS1)、微小RNA-424(miR-424)在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法收集60例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织,检测lncRNA NNT-AS1、miR-424的相对表达水平,分析二者的相对表达水平与患者临床病理特征及预后的关系,以及二者的相关性。结果lncRNA NNT-AS1在子宫内膜癌组织中高表达,并与国际妇产科联盟(FIGO)分期、脉管浸润和淋巴结转移相关(P<0.05)。miR-424在子宫内膜癌组织中低表达,与FIGO分期、肌层浸润程度、脉管浸润和淋巴结转移相关(P<0.05)。lncRNA NNT-AS1高表达、miR-424低表达的患者5年生存率较低(P<0.05)。lncRNA NNT-AS1高表达和miR-424低表达是患者预后不良的影响因素。lncRNA NNT-AS1相对表达水平与miR-424呈负相关(r=-0.368,P<0.05)。结论lncRNA NNT-AS1和miR-424在子宫内膜癌中均异常表达,且与子宫内膜癌患者不良病理特征和预后相关。

胃癌组织中LncRNA NNT-AS1的表达及意义

目的观察胃癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)的表达并探讨其意义。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测77例份胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中LncRNA NNT-AS1的表达,并分析LncRNA NNT-AS1表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果胃癌及癌旁正常组织中LncRNA NNT-AS1相对表达量分别为0. 509±0. 110、0. 103±0. 004,二者比较差异有统计学意义(t=32. 366,P=0. 000)。LncRNA NNT-AS1在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、脉管侵袭、淋巴结转移相关(P均<0. 05),而与患者年龄、性别、神经侵袭无关(P均> 0. 05)。胃癌组织中LncRNA NNT-AS1表达较低者生存率与生存时间均高于LncRNA NNT-AS1表达较高者(P均<0. 05)。结论胃癌组织中LncRNA NNT-AS1呈异常高表达,LncRNA NNT-AS1可能是胃癌发生及恶性进展的重要因素,检测LncRNA NNT-AS1表达有助于患者预后判断。

干扰LncRNA表达减轻非小细胞肺癌细胞对紫杉醇耐药的机制研究

目的研究干扰长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(LncRNA NNT-AS1)表达减轻非小细胞肺癌(NSCLC)细胞对紫杉醇(TAX)耐药的机制。方法构建NSCLC TAX耐药细胞系(A549/TAX),检测正常、亲本、耐药细胞中LncRNA NNT-AS1的表达情况,并验证miR-582-5p与LncRNA NNT-AS1、HMGB2的靶向关系;体外培养A549/TAX细胞,观察单独干扰LncRNA NNT-AS1或同时干扰LncRNA NNT-AS1、miR-582-5p对细胞中LncRNA NNT-AS1、miR-582-5p、HMGB2 mRNA及其蛋白表达以及细胞活力、克隆形成、凋亡的影响;通过裸鼠成瘤实验观察干扰LncRNA NNT-AS1对肿瘤生长及肿瘤组织中miR-582-5p、HMGB2 mRNA及其蛋白表达的影响。结果与正常细胞比较,LncRNA NNT-AS1在亲本、耐药细胞中均呈高表达(P<0.05),且有递增趋势。经验证,miR-582-5p与LncRNA NNT-AS1、HMGB2均存在靶向关系。干扰LncRNA NNT-AS1表达后,A549/TAX细胞中LncRNA NNT-AS1、HMGB2 mRNA及其蛋白的表达水平以及细胞活力、克隆形成数均显著降低,而miR-582-5p的表达水平、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);同时干扰miR-582-5p表达可使上述改变得以逆转(P<0.05)。干扰肿瘤细胞中LncRNA NNT-AS1的表达后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量均显著降低,miR-582-5p的表达水平显著升高,HMGB2 mRNA及其蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论干扰LncRNA NNT-AS1的表达可靶向上调miR-582-5p的表达并下调HMGB2的表达,进而减轻NSCLC TAX化疗耐药。

lncRNA NNT-AS1对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用

目的研究卵巢癌细胞中NNT-AS1的表达情况,探索NNT-AS1沉默后对卵巢癌细胞增殖、凋亡及转移的影响。方法使用qRT-PCR检测卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞的NNT-AS1表达情况。随后将卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞分别分为siNNT-AS1组(NNT-AS1沉默组)、siNC组(阴性对照组)和control组(对照组),siNNT-AS1组和siNC组分别转染NNT-AS1沉默质粒siNNT-AS1和阴性对照质粒siNC,control组给予空载体。72 h后采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,并采用比色法检测caspase-3、caspase-9活力。结果卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞中NNT-AS1表达均低于正常卵巢细胞T29,差异有统计学意义(P<0.05)。与siNC组及control组HO-8910细胞系、SK-OV-3细胞系相比,siNNT-AS1组24,48,72 h的细胞增殖活性均增高(均P<0.05),细胞凋亡率均下降(均P<0.05),细胞侵袭能力均升高(均P<0.05),caspase-3、caspase-9活性均降低(均P<0.05)。结论NNT-AS1在人卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞中表达降低,NNT-AS1表达下降可能与卵巢癌细胞的增殖和侵袭增加及凋亡下降有关;NNT-AS1可能通过抑制内源性途径进而调控卵巢癌细胞凋亡。

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达。收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05)。以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例。lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ^(2)分别为4.783、5.383,P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。

膀胱尿路上皮癌组织中LncRNA NNT-AS1、miR-22表达与预后的关系

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)及微小RNA-22(miR-22)在膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中的表达以及二者与患者预后的关系。方法选取本院收治的BUC患者39例,留取患者术中切除的癌组织及癌旁正常组织;另选取人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1作为对照组,人膀胱癌细胞株T24作为BUC细胞组。采用qRT-PCR法检测细胞及组织中LncRNA NNT-AS1、miR-22的表达水平,分析二者与患者临床病理特征的关系;采用Pearson法分析癌组织中LncRNA NNT-AS1、miR-22的相关性,Kaplan-Meier法评估LncRNA NNT-AS1、miR-22表达与BUC患者总生存率的关系。结果BUC细胞组中LncRNA NNT-AS1水平高于对照组(P<0.05),miR-22水平低于对照组(P<0.05)。BUC患者癌组织中LncRNA NNT-AS1水平高于癌旁正常组织(P<0.05),miR-22水平低于癌旁正常组织(P<0.05)。LncRNA NNT-AS1、miR-22水平与患者肿瘤浸润、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05),且miR-22水平与患者临床分期有关(P<0.05)。癌组织中LncRNA NNT-AS1水平与miR-22水平呈负相关(P<0.05)。LncRNA NNT-AS1高表达组总生存率低于LncRNA NNT-AS1低表达组(P<0.05);miR-22高表达组总生存率高于miR-22低表达组(P<0.05)。LncRNA NNT-AS1高表达+miR-22低表达患者总生存率低于LncRNA NNT-AS1低表达+miR-22高表达患者及其他患者,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA NNT-AS1、miR-22在BUC细胞及癌组织中异常表达,二者呈负相关,且均与患者临床病理特征及预后有关。

lncRNA HAGLR促卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化的机制研究

目的研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用。方法培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组)。然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组)。qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达。Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达。CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性。Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力。细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力。TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡。结果与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05)。与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05)。与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05)。结论lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT。

LncRNA NNT-AS1对肺癌细胞行为的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(NNT-AS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)进展中的潜在机制。方法30例NSCLC组织和癌旁正常组织获自于2020年6-12月在空军军医大学第二附属医院接受手术切除的NSCLC患者,NSCLC细胞系H1650、A549、H1299、H2170以及人肺上皮细胞BEAS-2B常规培养。将A549细胞分为siRNA阴性对照(si-con)组、靶向NNT-AS1的siRNA(si-NNT-AS1)组、miR-142-3p抑制物阴性对照(si-NNT-AS1+in-miR-con)组、miR-142-3p抑制物(si-NNT-AS1+in-miR-142-3p)组、锌指E结合蛋白1(ZEB1)阴性对照空载(si-NNT-AS1+vector)组和ZEB1过表达质粒(si-NNT-AS1+ZEB1)组。BALB/c雄性裸小鼠随机分为sh-NC组(n=5)和sh-NNT-AS1组(n=5),分别将转染sh-NC或sh-NNT-AS1慢病毒的A549细胞皮下注射到裸小鼠背部。35 d后切除肿瘤,测量肿瘤组织重量和体积。qRT-PCR检测NSCLC组织和细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1水平;双荧光素酶报告基因实验探究3个因子之间的作用关系。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖,集落形成实验测定集落形成数量,Tranwell测定迁移和侵袭细胞数量,肿瘤异种移植实验检测体内肿瘤生长情况。结果与癌旁正常组织比较,NSCLC组织中NNT-AS1和ZEB1 mRNA上调[(3.28±0.26)vs.(1.05±0.04),(2.65±0.22)vs.(1.04±0.06)],miR-142-3p下调[(0.43±0.03)vs.(1.02±0.08)],差异均有统计学意义(P均<0.05)。与人肺上皮细胞BEAS-2B比较,NSCLC细胞系H1650、A549、H1299、H2170中NNT-AS1和ZEB1 mRNA上调,miR-142-3p下调,差异均有统计学意义(P均<0.05);且A549细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1 mRNA表达差异变化最大,因此选择A549细胞继续进行后续的探究。与miR-NC组比较,A549细胞中miR-142-3p转染后降低了NNT-AS1-WT或ZEB1-WT的荧光素酶活性,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与si-con组比较,si-NNT-AS1组A549细胞中NNT-AS1和ZEB1 mRNA、蛋白表达降低,miR-142-3p表达增高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+in-miR-con组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,miR-142-3p表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS1+ZEB1组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与si-con组比较,si-NNT-AS1组A549细胞活力[(0.42±0.04)vs.(0.84±0.07)]、集落形成数量[(54.23±5.64)个vs.(117.36±11.24)个]、迁移和侵袭细胞数量[(72.16±6.54)个vs.(164.23±12.34)个和(65.23±5.27)个vs.(123.18±10.21)个]均下调,细胞凋亡率[(21.69±2.54)%vs.(7.54±0.72)%]上调,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+in-miR-con组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p组A549细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS1+ZEB1组A549细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。体内实验表明,与sh-NC组比较,sh-NNT-AS1组肿瘤组织中NNT-AS1和ZEB1 mRNA表达降低,miR-142-3p表达增高,肿瘤体积、重量以及增殖细胞核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论沉默NNT-AS1抑制NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与miR-142-3p/ZEB1轴有关。

LncRNA NNT-AS1、HMGB1在膀胱癌组织中的表达水平及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在膀胱癌组织中的表达水平及其与预后关系。方法选取广州医科大学附属中医医院2010年1月-2014年12月诊治的膀胱癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织各73例标本进行研究。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌癌组织及对应癌旁正常组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平;分析膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平与膀胱癌患者临床病理特征、预后的关系;Pearson法分析LncRNA NNT-AS1表达水平与HMGB1相关性。结果膀胱癌患者癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平均明显高于癌旁正常组织(t=8.769、9.423,P均<0.05);膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平与膀胱癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度相关(P<0.05);膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1表达水平与HMGB1呈正相关(r=0.394,P<0.05);膀胱癌患者LncRNA NNT-AS1、HMGB1高表达组术后60个月生存率均明显低于LncRNA NNT-AS1、HMGB1低表达组(P均<0.05)。结论 LncRNA NNT-AS1、HMGB1在膀胱癌癌组织中均呈高表达,两者均与膀胱癌患者预后有关,有助于评估膀胱癌患者预后情况。