术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化修饰相关长链非编码RNA预后模型的构建与验证

目的 探索胃癌组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化(trimethylation of lysine 4 on histone H3,H3K4me3)修饰相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)特征,构建相关预后模型并预测胃癌免疫治疗疗效。方法 从癌症基因组图谱数据库下载胃癌相关转录组测序数据和对应的患者临床资料,通过构建H3K4me3相关调节因子基因与LncRNA的共表达网络识别H3K4me3修饰相关LncRNA,并将癌症基因组图谱数据库中370例符合筛选标准的胃癌患者样本(整体组)按1:1随机抽样划分为训练组(n=185)和验证组(n=185)。随后基于单因素Cox回归、Lasoo回归分析构建H3K4me3相关LncRNA预后风险评分模型并进行内部验证。Kaplan-Meier生存分析和受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)被用于验证模型的预测性能。通过单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分等临床指标的预后预测价值。结合风险评分、年龄和肿瘤TNM分期构建预测胃癌患者总生存率的列线图模型,ROC曲线与校准图被用于评估列线图的预测准确性。借助共识聚类识别异质性聚类亚群并进行免疫治疗疗效预测。结果 基于共表达网络关系识别了14个具有预后价值的H3K4me3相关LncRNA并构建了相关风险模型及评价体系。根据训练组预后风险评分模型获得的中位风险评分将训练组、验证组和整体组胃癌患者划分为高、低风险,Kaplan-Meier生存曲线显示低风险患者的总体生存情况要优于高风险患者(P<0.05)。此外,该模型在训练组中预测胃癌患者1、3、5年总生存率的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.708、0.730、0.770,在验证组中分别为0.690、0.648、0.713,而在整体组中分别为0.697、0.670、0.724。多因素Cox回归分析显示基于H3K4me3相关LncRNA构建的风险评分模型是预测胃癌患者预后的独立因素(P<0.001)。构建的列线图预测胃癌患者1、2、3年总生存率的AUC分别为0.727、0.780、0.717,且其校准曲线与理想曲线相接近。基于共识聚类算法进一步识别了2种具有异质性免疫特征的H3K4me3-LncRNA亚群,其中亚组Ⅱ具有更高的免疫细胞浸润水平和更强的免疫应答潜力,并对5-氟尿嘧啶、奥沙利铂等显示出更高的药物敏感性,而亚组Ⅰ则可能对磷脂酰肌醇3-激酶特异性抑制剂具有更高的敏感性。结论 本研究构建了一个H3K4me3-LncRNA风险评分模型以预测胃癌患者的预后,并揭示了其异质性微观特征及在预测免疫治疗疗效方面的潜在价值。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

抑制长链非编码RNA MALAT1对糖脂毒性诱导的内皮细胞功能障碍的影响及可能机制

目的:探讨糖脂毒性环境中抑制长链非编码RNA(lnc RNA)人类肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达水平对人脐静脉内皮细胞功能影响的分子机制。方法:用葡萄糖和棕榈酸处理人脐静脉内皮细胞,建立体外糖脂毒性内皮细胞模型,并分为对照组、高糖高脂组、高糖高脂对照组以及小干扰RNA(si-RNA)干预的高糖高脂+si-MALAT1组、高糖高脂+si-丝裂原活化蛋白激酶1(si-MAPK1)组。应用实时荧光定量PCR检测MALAT1、MAPK1的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测自噬、线粒体融合分裂、凋亡、通路相关蛋白的表达水平;免疫荧光共聚焦定位检测自噬及溶酶体相关蛋白的荧光共定位情况;透射电镜观察内皮细胞中自噬溶酶体的数目;线粒体探针染色检测线粒体形态;免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)的产生;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡;细胞增殖及划痕实验检测不同时间点各组细胞的增殖及迁移能力;血管形成试验检测各组细胞中新生血管数量。结果:与对照组相比,高糖高脂组、高糖高脂对照组的MALAT1 mRNA、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶1(p-MAPK1)的表达水平增加,磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平下降,P均<0.05。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MALAT1组微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、螯合体1(p62)、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、p-MAPK1的表达水平均下降,线粒体融合蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)、BCL-2、p-mTOR的表达水平均增加,P均<0.05;LC3和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白的荧光共定位阳性颗粒增加(P均<0.01),溶酶体数目减少;细胞增殖、迁移、成管能力均增加(P均<0.01)。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MAPK1组内皮细胞中p-MAPK1的表达下降,p-mTOR的表达上升(P均<0.01)。结论:抑制MALAT1表达,可降低糖脂毒性环境中线粒体的自噬水平,减少内皮细胞的凋亡及改善内皮细胞的功能,可能与调节MAPK1/mTOR信号通路有关。

长链非编码RNA FGD5-AS1调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(lncRNA FGD5-AS1)调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将大鼠心肌细胞H9c2及人心肌细胞随机分为对照组、模型组、lncRNA FGD5-AS1过表达组、miR-195-5p inhibitor组、阴性对照组、lncRNA FGD5-AS1过表达+miR-195-5p mimics组,分组处理后检测其lncRNA FGD5-AS1、miR-195-5p和PIM1表达、增殖、凋亡、促炎性细胞因子水平。结果与对照组相比,模型组细胞lncRNA FGD5-AS1、PIM1 mRNA及蛋白表达、存活率,增殖率降低(P<0.05);miR-195-5p表达,凋亡率,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);过表达lncRNA FGD5-AS1可逆转模型组细胞上述变化,上调miR-195-5p可减弱过表达lncRNA FGD5-AS1的逆转作用。结论过表达lncRNA FGD5-AS1可通过下调miR-195-5p增强PIM1表达,从而抑制高糖诱导的心肌细胞炎症反应,促进细胞存活,减轻细胞凋亡。

长链非编码RNA的特异表达在糖尿病视网膜病变中的作用

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见的微血管并发症之一,高血糖的持续刺激会导致血管通透性增加、黄斑水肿、新生血管生成、纤维增殖膜等一系列病理变化,最终导致视功能丧失^([1])。现有的治疗包括视网膜激光光凝术、抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)治疗、玻璃体腔内注射长效激素以及玻璃体切割术在临床上证明有非常好的疗效,但也有部分患者治疗效果不尽如人意,因此需要寻找新的突破口对DR进行治疗。

长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。

长链非编码RNA GHRLOS2在结直肠癌中的表达及作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中的表达及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织或细胞中GHRLOS2、微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)表达水平。构建过表达GHRLOS2的结直肠癌细胞系HCT116、SW480,通过划痕实验、Transwell实验检测过表达GHRLOS2对HCT116、SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;使用葡萄糖检测试剂盒检测过表达GHRLOS2细胞及对照细胞内的葡萄糖含量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中PCK1蛋白表达水平;基于生物信息学方法预测miR-33b-5p与PCK1的靶向结合关系。结果qRT-PCR检测结果显示,结直肠癌组织样本中的GHRLOS2表达水平低于癌旁组织,结直肠癌细胞中的GHRLOS2表达水平低于正常结肠上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05);GHRLOS2表达与Grade分级、Stage分期、淋巴结转移均相关(P<0.05)。结直肠癌组织的miR-33b-5p表达水平高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。划痕实验、Transwell实验、葡萄糖含量检测结果显示,过表达GHRLOS2可显著抑制结直肠癌细胞的侵袭、迁移和葡萄糖代谢。过表达GHRLOS2可抑制miR-33b-5p表达水平;GHRLOS2是miR-33b-5p的分子海绵,PCK1是miR-33b-5p的靶标;过表达GHRLOS2可竞争性结合miR-33b-5p,促进PCK1表达增加。结论GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中表达下调,其可能通过miR-33b-5p/PCK1途径调节结直肠癌细胞的侵袭、迁移及葡萄糖代谢能力,GHRLOS2有望成为结直肠癌靶向治疗的潜在生物靶点。

高血压病人血清中长链非编码RNA MEG3、miR-142-3p表达及与内皮功能的相关性

目的:通过检测高血压病人血清中长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)的表达水平,分析两者与高血压相关内皮功能的相关性。方法:入选2018年8月—2020年10月我院门诊部收治的145例高血压病人为观察组,另入选同期在我院体检的145名健康体检者为对照组。所有研究对象空腹采集5 mL静脉血,采用反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MEG3和miR-142-3p的mRNA的相对表达水平,酶联免疫吸附技术检测血清一氧化氮(NO)、血管内皮素(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)表达水平,比较观察组和对照组各项指标表达水平。根据疾病分级标准将观察组高血压病人分为轻度组(45例)、中度组(60例)和重度组(40例),比较不同组别之间各项指标表达水平,使用Pearson法分析观察组血清lncRNA MEG3和miR-142-3p表达水平与NO、ET-1和vWF水平之间的相关性及lncRNA MEG3与miR-142-3p表达水平之间的相关性。结果:与对照组比较,观察组血清lncRNA MEG3和NO的表达水平下降(P<0.001),血清miR-142-3p、ET-1和vWF的表达水平升高(P<0.001);血清lncRNA MEG3和NO在轻度组、中度组和重度组高血压病人中的表达水平依次降低,血清miR-142-3p、ET-1和vWF的表达水平则依次增高(P<0.001);观察组血清lncRNA MEG3表达水平与NO水平呈正相关(r=0.682,P<0.001),与ET-1和vWF水平呈负相关(r=-0.500,P<0.001;r=-0.637,P<0.001);血清miR-142-3p表达水平与NO水平呈负相关(r=-0.683,P<0.001),与ET-1和vWF水平呈正相关(r=0.458,P<0.001;r=0.678,P<0.001);观察组血清lncRNA MEG3与miR-142-3p表达水平呈负相关(r=-0.607,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA MEG3、NO水平降低及miR-142-3p、ET-1、vWF水平升高均是高血压的危险因素(P<0.05)。结论:高血压病人血清中lncRNA MEG3表达水平降低,miR-142-3p表达水平升高,可能在高血压的进展中具有调节作用,其表达水平能够反映高血压病人内皮功能受损的程度。

长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞的自噬水平

目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。

佛手苷内酯通过调控长链非编码RNA阿片样受体基因表达对糖氧剥夺诱导的PC12细胞损伤的影响

目的研究佛手苷内酯(BG)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)阿片样受体基因(Oprm1)表达保护糖氧剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤。方法将PC12细胞分为对照组(Con)、OGD组、OGD+BG低浓度(BG-L)组、OGD+BG中浓度(BG-M)组、OGD+BG高浓度(BG-H)组、OGD+pcDNA组、OGD+pcDNA-Oprm1组、OGD+BG+si-NC组和OGD+BG+si-Oprm1组。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡率。Real-time PCR分析Oprm1表达水平。结果与Con组比较,OGD组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与OGD组比较,OGD+BG-L组、OGD+BG-M组、OGD+BG-H组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+pcDNA组比较,OGD+pcDNA-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+BG+si-NC组比较,OGD+BG+si-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结论BG可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调lncRNA Oprm1表达有关。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1(Lnc RNA)对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法:髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-si RNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的影响。结果:si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 m RNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05),而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论:干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA SPRY4-IT1在食管鳞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1与食管鳞状细胞癌(ESCC)的临床病理及预后的相关性,以及对细胞生长的影响。方法:收集2008年1月至2009年12月南京医科大学附属南京医院肿瘤外科50例ESCC手术切除标本(包括癌组织和癌旁组织),荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测50例ESCC中SPRY4-IT1的表达情况,分析其与临床病理及预后的关系,用小干扰RNA(siRNA)干扰SPRY4-IT1后MTT法检测其对细胞生长的影响,流式细胞检测对细胞凋亡和周期的影响。结果:45例(90%)标本中SPRY4-IT1呈阳性表达,SPRY4-IT1在癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(t=5.377,P<0.01)。SPRY4-IT1的相对表达水平与肿瘤大小、临床分期相关(P均<0.05)。SPRY4-IT1在ESCC细胞株中表达量高于正常食管上皮细胞。KYSE30细胞中干扰SPRY4-IT1的表达后可明显减慢细胞生长,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡(P<0.01)。结论:SPRY4-IT1在ESCC组织中显著高表达,并且能促进细胞生长,可能成为诊断和判断预后的重要分子标记物。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖凋亡的影响及机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制。方法采用qRT-PCR方法检测LncRNA SPRY4-IT1在结直肠癌细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)和正常肠上皮细胞(FHC)的表达。选择其相对表达最高的HT-29细胞,以慢病毒载体介导构建SPRY4-IT1过表达(上调组)和干扰的(下调组)稳转细胞株,并设立无义转染组和空白对照组;qRT-PCR检测各组HT-29细胞中SPRY4-IT1 mRNA的表达量;CCK-8法检测细胞增殖活力;克隆试验检测细胞的克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。Western blotting法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达量。结果 LncRNA SPRY4-IT1在结直肠细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)相对FHC的表达增高,以HT-29细胞株中的表达最高(P均<0.05)。相对于空白对照组、无义转染组,上调组SPRY4-IT1 mRNA表达量升高,HT-29细胞增殖活力增强,克隆形成率升高,凋亡率降低(P<0.05或<0.01);而下调组SPRY4-IT1 mRNA表达量下降,细胞增殖活力减弱,克隆形成率降低,凋亡率升高(P<0.05或<0.01);在各组细胞间,细胞周期分布比较,P均>0.05。相对于空白对照组、无义转染组,上调组细胞Bcl-2蛋白表达量增多,Bax蛋白表达量减少(P<0.05或<0.01);下调组Bcl-2蛋白表达量减少,Bax蛋白表达量增多(P均<0.01)。结论 LncRNA SPRY4-IT1可能通过促进Bcl-2表达,抑制Bax表达而促进结直肠癌细胞增殖、抑制其凋亡。

长链非编码RNA PCAT4在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA前列腺癌相关转录因子4(prostate cancer associated transcript 4,PCAT4)在前列腺癌中的表达及意义。方法:采用real-time PCR(RT-PCR)分别检测48例前列腺癌组织及其对应癌旁组织、人前列腺癌细胞PC3、22RV1和前列腺正常肌成纤维基质细胞WPMY-1中PCAT4的相对表达量;分析前列腺组织PCAT4的表达水平与患者临床病理特征的关系;采用RNA干扰技术、CCK-8法和迁移实验检测PCAT4对前列腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果:前列腺癌组织与癌旁组织PCAT4的相对表达量分别为6.15±1.58和1.77±0.65,两组相比差异有统计学意义(P<0.001);前列腺癌PC3、22RV1细胞PCAT4的相对表达量均高于前列腺正常肌成纤维基质细胞WPMY-1,差异均有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中PCAT4高表达30例,低表达18例。前列腺癌组织PCAT4表达水平与患者Gleason评分、T分期相关(P均<0.05),与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和多发病灶等均无相关性(P均>0.05)。前列腺癌22RV1细胞转染PCAT4小干扰si RNA后,前列腺癌细胞增殖和迁移能力明显减弱(P均<0.05)。结论:PCAT4在前列腺癌中呈相对高表达,可能通过影响前列腺癌细胞增殖和迁移促进前列腺癌的发生发展,可作为潜在的前列腺癌诊断新指标和治疗新靶点。

长链非编码RNA调控CD4^(+)T淋巴细胞增殖分化和在免疫性疾病中的最新研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200nt的非编码RNA,其作用机制涉及染色质重塑、DNA转录及转录后修饰、蛋白翻译及翻译后调节,与免疫性疾病关系密切。CD4^(+)T淋巴细胞在适应性免疫反应中发挥重要调控作用,体内的CD4^(+)T淋巴细胞亚群相互配合维持免疫平衡。CD4^(+)T淋巴亚群的比例失调,可能导致免疫失衡,甚至引起免疫性疾病。该文主要阐述lncRNA及其在CD4^(+)T淋巴细胞的增殖分化和免疫性疾病中的调控作用。

长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用。方法选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组､转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组､转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5p inhibitor的miR-181 d-5p inhibitor组､转染miR-181 d-5p mimic的miR-181 d-5p mimic组､转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2的靶向关系。选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放､化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织)。另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性。结果生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有可能的结合位点。与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组､miR-181 d-5p mimic组､si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组､miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高。双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有靶向关系。挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用。与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641､miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05)。Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､EIF4A2､Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性。结论LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展。

长链非编码RNA IGFBP4-1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的:探讨鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者癌组织中长链非编码RNA IGFBP4-1(LncRNA IGFBP4-1)的表达及临床意义。方法:选取2014年1月至2014年12月海南省人民医院(海南医学院附属海南医院)耳鼻喉科收治的NPC患者88例为研究组,同期慢性鼻咽炎患者66例为对照组。采用实时定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组鼻咽部组织中LncRNA IGFBP4-1表达水平,分析LncRNA IGFBP4-1表达水平与临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank分析和比较LncRNA IGFBP4-1高﹑低表达组患者总生存率差异;采用Cox风险比例模型分析影响预后的因素。结果:研究组癌组织中LncRNA IGFBP4-1表达水平高于对照组(6.24±1.09 vs 1.23±0.35,P<0.001)。NPC患者癌组织中LncRNA IGFBP4-1表达水平与性别和年龄无关(P>0.05),与临床分期、T分级、N分级、远处转移、淋巴结转移﹑复发及EBV DNA相关(P<0.05)。当截断值为4.12时,LncRNA IGFBP4-1区分诊断NPC的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.893(95%CI:0.763~0.911,P<0.001),敏感度81.3%,特异度71.4%。LncRNA IGFBP4-1高表达组5年总生存率低于LncRNA IGFBP4-1低表达组(42.26%v s57.33%,P<0.05)。多因素分析示,淋巴结转移、临床分期、T分级、LncRNA IGFBP4-1高表达及EBVDNA是影响患者总生存率的独立危险因素。结论:LncRNA IGFBP4-1可很好区分NPC和慢性鼻咽炎患者,LncRNA IGFBP4-1高表达是NPC患者预后不良的分子标志物。

长链非编码RNA MIR22HG通过微小RNA-9-3p调节CTLA4抑制前列腺癌

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG通过微小RNA-9-3p(miR-9-3p)调节细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制前列腺癌的机制。方法收集26例前列腺癌组织样本和26例前列腺增生组织样本,培养VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织、前列腺增生组织及4种前列腺癌细胞的MIR22HG和miR-9-3p mRNA水平。筛选MIR22HG和miR-9-3p mRNA表达较高的细胞。将筛选出的细胞按不同干预方法分为OE-CTLA4(CTLA4过表达组)、OE-MIR22HG(MIR22HG过表达组)、miR-9-3p mimic(miR-9-3p过表达组)、OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达组)、OE-NC+NC mimic(转染对照组)、NC mimic(miR-9-3p过表达对照组)。采用TargetScan数据库及荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-9-3p及miR-9-3p与CTLA4是否存在靶向抑制关系。采用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞MIR22HG和miR-9-3p mRNA及CTLA4蛋白表达。取裸鼠96只,按干预方法不同分为OE-NC+NC mimic组(转染对照)、OE-MIR22HG组(MIR22HG过表达)及OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达),每组32只。接种后4周期间,每周检测小鼠原位移植瘤并统计瘤体的质量和体积变化。结果前列腺癌细胞VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞中,PC3细胞MIR22HG mRNA相对较低,miR-9-3p mRNA相对较高,因此选择PC3细胞进行研究。在PC3细胞中成功过表达MIR22HG,荧光素酶报告基因实验验证了MIR22HG和miR-9-3p的靶向抑制关系,过表达MIR22HG,miR-9-3p表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。TargetScan数据库预测免疫基因CTLA4和miR-9-3p的靶向关系,荧光素酶报告基因实验验证miR-9-3p和CTLA4的靶向抑制关系,过表达miR-9-3p,CTLA4表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达MIR22HG的裸鼠皮下肿瘤的质量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组裸鼠皮下肿瘤的质量、体积与OE-NC+NC mimic组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIR22HG与miR-9-3p存在靶向负调节关系,miR-9-3p与CTLA-4存在靶向调节关系,MIR22HG/miR-9-3p可能通过抑制CTLA4达到免疫治疗前列腺癌的目的。

长链非编码 RNA FGD5-AS1通过miR-542-3p/GTPBP4对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对肝癌细胞放射敏感性的影响及其分子机制.方法:运用qRT-PCR检测FGD5-AS1、miR-542-3p和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况;采用克隆形成实验和流式细胞仪分析FGD5-AS1和GTPBP4表达变化对肝癌细胞系放射敏感性的影响.利用基因沉默、qRT-PCR和Western blot检测FGD5-AS1对miR-542-3p及其靶基因GTPBP4表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析lncRNA FGD5-AS1对miR-542-3p/GTPBP4表达的调控作用.结果:FGD5-AS1和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调,miR-542-3p在肝癌组织和肝癌细胞系中表达下调.沉默FGD5-AS1可增强肝癌细胞Huh7和PLC5的放射敏感性.沉默GTPBP4可以抑制Huh7和PLC5细胞的克隆形成,促进Huh7和PLC5细胞的凋亡,增强Huh7和PLC5细胞的放射敏感性.GTPBP4是miR-542-3p的下游靶基因,miR-542-3p可以负向调控GTPBP4的表达水平;而FGD5-AS1可负向调控miR-542-3p的表达,并正向调控GTPBP4的表达水平;FGD5-AS1对HCC细胞放射敏感性的影响又依赖于miR-542-3p.结论:FGD5-AS1作为miR-542-3p的“分子海绵”竞争性上调GTPBP4的表达进而影响肝癌细胞的放射敏感性.