LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。

长链非编码RNA SNHG16对人宫颈癌细胞SiHa迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG16通过调控微RNA(miR)-216-5p/锌指E盒结合同源框1(ZEB1)轴对人宫颈癌细胞SiHa迁移、侵袭的影响及机制。方法将对数生长期人宫颈癌细胞SiHa随机分为干扰小RNA(siRNA)组、阴性对照组和空白组。siRNA组、阴性对照组SiHa细胞应用脂质体转染法分别进行lncRNA SNHG16-siRNA、阴性对照-siRNA质粒转染,空白组细胞不作处理。转染后48 h,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定各组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量,生物信息学软件靶向预测和双荧光素酶实验验证lncRNA SNHG16与miR-216-5p的靶向关系,划痕实验测定各组细胞迁移能力,Transwell小室实验测定各组细胞侵袭能力,qRT-PCR测定各组细胞miR-216-5p、ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA相对表达量,Western blot法测定各组细胞ZEB1、E-cadherin相对表达量。结果转染48 h后,各组细胞转染效率均>80%;siRNA组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA SNHG16与miR-216-5p基因3′UTR存在互补结合位点;siRNA组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞迁移率显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组每个视野平均穿膜细胞数显著少于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组每个视野平均穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量均高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组SiHa细胞ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论沉默lncRNA SNHG16可抑制人宫颈癌细胞SiHa的迁移与侵袭能力,其作用机制可能与调控miR-216-5p/ZEB1轴相关基因和蛋白表达有关。

长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1对肺腺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并基于锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)探讨其潜在作用机制。方法取对数生长期的肺腺癌A549细胞,分为对照组、si-NC组、si-CCAT1组、CCAT1-NC组和CCAT1组。除对照组外,其余组分别转染si-NC、si-CCAT1、CCAT1 mimic NC以及CCAT1 mimic,转染48 h后,检测细胞中LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、细胞凋亡率,以及ZEB1、上皮钙黏蛋白(E-cad)和神经钙黏蛋白(N-cad)表达量。通过Starbase软件预测LncRNA CCAT1与ZEB1之间的靶向关系,并应用双荧光素酶报告基因法验证LncRNA CCAT1与ZEB1的靶向关系。结果(1)与对照组和si-NC组比较,si-CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、ZEB1和N-cad蛋白表达量降低,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量升高(均P<0.05)。与对照组、CCAT1-NC组、si-CCAT1组比较,CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、ZEB1和N-cad蛋白表达量升高,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量降低(均P<0.05);此外,CCAT1组细胞存活率高于si-CCAT1组(P<0.05)。(2)ZEB1与CCAT1存在高度互补序列;转染CCAT1 mimic可明显降低ZEB1野生型质粒的相对荧光素酶活性,对ZEB1突变型质粒的相对荧光素酶活性无影响。结论LncRNA CCAT1可以促进肺腺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,其可能是通过上调ZEB1蛋白表达发挥作用。

LncRNACRNDE、miR-4262、ZEB1在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨宫颈癌患者中长链非编码RNA(LncRNA)CRNDE、微小RNA(miRNA)-4262、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)表达水平变化及与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年6月至2019年6月海南西部中心医院收治的100例宫颈癌患者作为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA的表达。通过在线网站预测LncRNA CRNDE与miR-4262的结合位点,miR-4262与ZEB1的结合位点,分析三者表达的相关性及与临床病理特征的关系。根据宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达分为高表达组、低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达宫颈癌患者的生存曲线。结果宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA表达高于癌旁组织,miR-4262表达低于癌旁组织(t=13.198、25.123、11.843,P<0.01)。宫颈癌组织中LncRNA CRNDE与miR-4262表达呈负相关,与ZEB1 mRNA表达呈正相关,miR-4262与ZEB1 mRNA表达呈负相关(r=-0.654、0.701、-0.687,P<0.01)。LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达与国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访6~36个月,失访9例,死亡13例,100例宫颈癌患者3年累积生存率为86.93%。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,LncRNA CRNDE高表达组、miR-4262低表达组及ZEB1 mRNA高表达组3年累积生存率均较低(Log-rankχ^(2)=3.899、4.132、3.891,P<0.05)。结论宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA高表达,miR-4262低表达,三者表达变化与FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

目的探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的机制。方法在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。

敲低锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的通过RNA靶向干扰降低人胃癌BGC823细胞中锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)基因表达,观察ZEB1低表达对胃癌BGC823细胞的侵袭、迁移及增殖能力的影响,并检测相关基因lncRNA HOTAIR、上皮钙黏素(E-cadherin)表达情况。方法用载体构建针对人ZEB1基因表达的干扰质粒sh ZEB1,脂质体转染胃癌BGC823细胞后,经G418及有限稀释法筛选稳定转染细胞株。通过实时定量PCR和Western blot法检测BGC823细胞ZEB1 mRNA和蛋白水平,MTT法检测其增殖能力,TranswellTM小室侵袭试验检测转染细胞侵袭能力、划痕试验检测细胞迁移能力,实时定量PCR检测lncRNA HOTAIR、E-cadherinmRNA水平。结果成功构建干扰质粒sh ZEB1,敲低BGC823细胞ZEB1水平后,BGC823细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低、lncRNA HOTAIR水平降低、而E-cadherin表达增高。结论靶向降低BGC823胃癌细胞ZEB1的水平,可降低lncRNA HOTAIR水平及细胞增殖、侵袭、迁移力。

下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达抑制口腔鳞癌细胞SCC15侵袭和迁移的分子机制

目的 研究下调长链非编码RNA(lncRNA)锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(ZEB1-AS)1靶向促进miR-133a-3p体外调控口腔鳞癌细胞SCC15迁移及侵袭的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Rt-PCR)分析并检测不同的口腔鳞癌细胞HN-6、SCC15、CAL27及正常口腔上皮细胞HOK中ZEB1-AS1表达变化。将口腔鳞癌细胞SCC15分成Control组、sh-NC(转染shRNA control)组、sh-ZEB1-AS1(转染ZEB1-AS1 shRNA)组,利用CCK-8方法分析检测细胞的增殖情况,利用Transwell小室分析并检测细胞的迁移及侵袭能力变化,Western印迹并检测N-钙黏蛋白(cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-cadherin的表达情况。利用Starbase生物信息学软件预测ZEB1-AS1靶基因,荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在口腔鳞癌细胞SCC15中将ZEB1-AS1 shRNA、miR-133a-3p inhibitor转染,同样分析并检测各组细胞的增殖水平及迁移、侵袭能力变化和各组细胞内N-cadherin、MMP-2、E-cadherin、MMP-9蛋白的表达情况。结果 口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6、SCC15中ZEB1-AS1水平明显高于正常口腔上皮细胞HOK(P<0.05)。口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6中ZEB1-AS1水平明显低于口腔鳞癌细胞SCC15(P<0.05)。与Control、sh-NC组比较,sh-ZEB1-AS1组口腔鳞癌细胞SCC15中ZEB1-AS1水平明显降低,增殖能力明显降低,同时细胞的迁移及侵袭能力也明显下降,蛋白MMP-9、N-cadherin、MMP-2的表达水平明显降低,而E-cadherin表达水平明显升高(P<0.05)。下调ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达。miR-133a-3p inhibitor逆转下调ZEB1-AS1对口腔鳞癌细胞SCC15增殖、迁移、侵袭和MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达作用。结论 下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p抑制口腔鳞癌细胞SCC15增殖、侵袭和迁移。

LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移

目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-(1zine finger E box binding homeobox 1, ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制。方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况。通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、ɑ-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系。建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P<0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P<0.05或P<0.01)。敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P<0.05)。敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P<0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P<0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P<0.05)。结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点。

LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b/IL-6轴影响食管癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA1(homeobox transcription factor 6 antisense RNA1,DLX6-AS1)调控miR-181b/白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轴对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取人食管上皮细胞株HEEC和人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、miR-181b及IL-6的表达水平。将si-DLX6-AS1、miR-181b mimics、pcDNA-IL-6、pcDNA-IL-6+miR-181b mimics及其相应阴性对照分别转染至Eca-109细胞,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8法和EdU染色实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移与侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-181b、miR-181b与IL-6的靶向关系。结果与HEEC细胞相比,Eca-109细胞中lncRNA DLX6-AS1、IL-6 mRNA的表达水平升高(P=0.005,0.006),但miR-181b表达水平降低(P=0.004)。与相应阴性对照组比较,si-DLX6-AS1组和miR-181b mimics组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率均降低(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目均减少(均P<0.05),而pcDNA-IL-6组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率升高(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目增加(均P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1与miR-181b存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型DLX6-AS1载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P=0.006);下调DLX6-AS1表达后Eca-109细胞中miR-181b表达水平升高(P=0.010)。miR-181b与IL-6存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型IL-6载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);过表达miR-181b后Eca-109细胞中IL-6的表达水平降低(P<0.05)。与pcDNA-IL-6组比较,pcDNA-IL-6与miR-181b mimics共转染后,Eca-109细胞中IL-6 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低,细胞迁移数目与侵袭数目也减少(均P<0.05)。结论LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b靶向负调控IL-6表达而促进食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭。

ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1在肿瘤免疫微环境中的作用研究进展

锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1 (ZEB1-AS1)属于长链非编码RNA (Lnc RNA)家族,是E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)的反义蛋白产物,可通过上调ZEB1的活性促进肿瘤浸润、转移,其表达的失调与多种肿瘤的发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的重要分子靶点。近年来,大量研究表明ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1可通过调节肿瘤免疫微环境影响肿瘤恶性进展及治疗效果。本文主要阐述ZEB1-AS1及ZEB1与肿瘤相关免疫细胞、炎症相关细胞因子、炎性信号通路之间的相互作用,为肿瘤的靶向及免疫治疗提供新思路。

ZEB1-AS1在结肠癌中表达及与铂类药物化疗敏感性的关系

目的探讨结肠癌组织中锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1-反义链(AS)1的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系。方法选取结肠癌患者120例为研究组,收集患者手术过程中切除的癌组织及癌旁正常组织,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测癌组织及癌旁组织中ZEB1-AS1的表达情况;分析ZEB1-AS1高低表达与临床病理特征的相关性;分析ZEB1-AS1高低表达与铂类化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析ZEB1-AS1与5年生存期的关系;Cox回归模型分析影响患者预后不良的因素。结果研究组ZEB1-AS1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌患者ZEB1-AS1表达与年龄、性别、肿瘤直径不相关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。ZEB1-AS1低表达患者治疗有效率显著高于ZEB1-AS1高表达患者(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,ZEB1-AS1高表达患者5年生存率显著低于ZEB1-AS1低表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅳ期、淋巴结转移、化疗无效、ZEB1-AS1高表达均是影响结肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论ZEB1-AS1在结肠癌患者组织中表达水平升高,其高表达与TNM分期、淋巴结转移有关,ZEB1-AS1低表达者应用奥沙利铂辅助治疗有效率高,ZEB1-AS1是影响结肠癌患者预后不良的危险因素。

lncRNA MALAT1调控miR-144-3p/ZEB1对肺癌放射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控miR-144-3p/E盒结合锌指蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)对肺癌放射敏感性的影响。方法采用RT-qPCR检测人正常肺HBE细胞和肺癌A549细胞中MALAT1及miR-144-3p的表达情况。将A549细胞分别设置为A549组(不进行处理)、放射组(6MVX线垂直照射)、MALAT1沉默对照组(转染阴性对照慢病毒)、MALAT1沉默组(转染sh-MALAT1慢病毒)、过表达对照组(转染过表达对照慢病毒)、miR-144-3p过表达组(转染miR-144-3p模拟物)、MALAT1沉默+沉默对照组(sh-MALAT1慢病毒与沉默对照慢病毒共转染)和MALAT1沉默+miR-144-3p沉默组(sh-MALAT1慢病毒与miR-144-3p抑制剂共转染),经不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)放射处理,培养48 h,集落形成实验测定细胞放射敏感性。以4Gy放射剂量处理各组细胞,培养48h,MTT法检测各组A549细胞增殖情况,流式细胞仪检测A549细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测MALAT1、miR-144-3p和ZEB1三者的靶向关系,Westernblot检测ZEB1以及增殖和凋亡相关蛋白表达情况。结果与HBE细胞比较,A549细胞中MALAT1表达水平增加,而miR-144-3p表达水平降低(均P<0.05)。抑制MALAT1或miR-144-3p过表达均增加A549细胞放射敏感性,抑制细胞增殖及c-Myc表达,促进细胞凋亡及caspase-3和Bax表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,MALAT1与miR-144-3p存在靶向关系,miR-144-3p与ZEB1存在靶向关系。miR-144-3p抑制剂可逆转sh-MALAT1对细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MALAT1沉默通过促进miR-144-3p/ZEB1轴增强肺癌细胞的放射敏感性。

LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达对骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(Zeb1-AS1)和微小RNA(miR)-335-5p在骨关节炎(OA)中的表达及其对软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p在OA膝关节软骨组织和正常软骨组织中的表达,并进行Spearman相关分析,双荧光素酶检测LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p的关系。分别以阴性对照scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)转染OA细胞,同时设立空白OA细胞(Control)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。采用右膝接受内侧半月板不稳定(DMM)术制作OA大鼠模型,并将scramble、过表达pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1(pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LncRNA Zeb1-AS1-miR-335-5p-agomir(pcDNA3.1+agomir)注射至大鼠的膝关节腔内,苏木素-伊红(HE)染色检测各组膝关节的病理损伤。结果与正常组相比,LncRNA Zeb1-AS1在骨性关节炎中表达明显升高,miR-335-5p表达明显下降(均P<0.05);Spearman相关分析结果显示,在OA软骨细胞中LncRNA Zeb1-AS1和miR-335-5p表达呈明显负相关(r=-0.819,P=0.000);双荧光素酶实验结果显示,LncRNA Zeb1-AS1能靶向调控miR-335-5p表达;与Control组细胞相比,pcDNA3.1组、pcDNA3.1+agomir组细胞的增殖活性和PCNA蛋白表达明显升高,细胞凋亡率和caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与pcDNA3.1组细胞相比,pcDNA3.1+agomir组细胞增殖活性和PCNA表达明显下降,细胞的凋亡率和caspase-3表达明显升高(P<0.05);动物实验结果显示,与Model组和scramble组相比,pcDNA3.1组膝关节软骨损伤最为严重,pcDNA3.1+agomir组较pcDNA3.1组损伤明显缓解。结论LncRNA Zeb1-AS1靶向调控miR-335-5p的表达影响骨关节炎的进展,过表达LncRNA Zeb1-AS1后,OA细胞增殖活性升高,凋亡率下降,而miR-335-5p激动剂agomir可部分逆转这一作用。

LncRNA ZEB2-AS1在Ⅲ期大肠癌中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白(ZEB)2-AS1在Ⅲ期大肠癌中的表达及意义。方法诊断为Ⅲ期大肠癌并行手术切除患者87例,采用实时定量PCR法检测其大肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中lncRNA ZEB2-AS1的表达,分析其与临床病理参数及预后的关系。结果大肠癌组织中lncRNA ZEB2-AS1表达较癌旁正常黏膜组织增高18.75倍(P<0.01),其增高与患者死亡相关(P<0.01)。LncRNA ZEB2-AS1高表达(≥381.5)组5年生存率低于低表达(<381.5)组(43.2%vs.76.7%)(P<0.01)。LncRNA ZEB2-AS1表达、淋巴结分期和肿瘤部位是Ⅲ期大肠癌患者预后的独立影响因素(P<0.05或P<0.01)。结论 LncRNA ZEB2-AS1参与大肠癌的发生和发展,是影响预后的独立因素。