纤维蛋白原相关蛋白1-淋巴细胞活化基因3与长链非编码RNA-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3共调控增强CD8^(+)T细胞抑制肝细胞癌肿瘤生长

目的体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路,联合增强T淋巴细胞活性,显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-),并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8+T亚群表达水平,并测定肿瘤生长大小体积变化。采用t和χ^(2)检验。结果实验期间,5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm^(3)/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组(t=7.582,P<0.05),HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组(t=3.953,P<0.05)。同时,5组中位CD8+T细胞亚群表达量分别为2.1×107、2.9×107、3.8×107、7.7×107、13.2×107。HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组CD8+T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组(t=2.988,P<0.05),而两个单抑制组的CD8+T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组(t=6.416,P<0.05)。结论单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性,多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控,将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3水平及意义

目的探讨老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白、类风湿因子、甘露糖凝集素(MBL)、长链非编码RNA(Ln-cRNA)MEG3水平及意义。方法选取老年类风湿关节炎患者54例为类风湿关节炎组,同期志愿者36例为健康对照组。采集空腹外周静脉血5 ml,免疫比浊法检测血清免疫球蛋白(Ig)G、IgM、IgA水平;乳胶凝集法检测血清类风湿因子表达水平,根据试剂盒说明书将类风湿因子浓度>20 IU/ml判断为阳性;酶联免疫吸附试验检测血清MBL水平;实时荧光-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清LncRNA MEG3表达水平。根据治疗预后分为:活动期组(DAS28>2.6分),缓解期组(DAS28≤2.6分)。结果类风湿关节炎组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于健康对照组,类风湿因子阳性率明显高于健康对照组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于健康对照组(P<0.01)。老年类风湿关节炎患者治疗后活动期组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于缓解期组,类风湿因子阳性率明显高于缓解期组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于缓解期组(P<0.01)。多因素Logistic回归性分析显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平是老年类风湿关节炎患者预后的独立影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平对老年类风湿关节炎患者预后均具有较高的评估价值(P<0.01);各指标联合检测的评估价值最高[曲线下面积(AUC)=0.940],敏感度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测。结论老年类风湿关节炎患者IgG、IgM、IgA浓度及类风湿因子阳性率明显升高,MBL、LncRNA MEG3表达水平明显降低,联合检测可用于治疗预后的评估。

长链非编码RNA DLGAP1-AS2在肾透明细胞癌中的作用机制与预后价值

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLGAP1-AS2在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及分子机制,以及DLGAP1-AS2表达在ccRCC患者中的预后价值。方法首先分别在人肾小管上皮细胞系HK-2和人ccRCC细胞系786-O中检测DLGAP1-AS2的表达水平,随后,通过细胞转染技术将过表达DLGAP1-AS2(Ov-DLGAP1-AS2)和过表达对照物(Ov-NC)转染到人ccRCC细胞系786-O细胞中,并检测细胞增殖活性和免疫逃逸能力的变化。检测Ov-DLGAP1-AS2对786-O细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路成员表达的影响。使用PI3K/Akt/mTOR通路激动剂740Y-P刺激786-O细胞,进一步探讨DLGAP1-AS2的作用机制。最后,在ccRCC患者中进行生存分析,并构建基于DLGAP1-AS2的ccRCC患者预后判断列线图。结果786-O细胞中DLGAP1-AS2表达水平低于HK-2细胞[(0.50±0.08)比(0.95±0.05)](P=0.002)。接种细胞48、72 h后,Ov-DLGAP1-AS2组细胞增殖活性低于Ov-NC组和对照组(均P<0.05)。Ov-DLGAP1-AS2组细胞上清液中可溶性人程序性死亡配体1(sPD-L1)浓度低于Ov-NC组和对照组(均P<0.05),将786-O细胞与T细胞共培养后,Ov-DLGAP1-AS2/T组细胞上清液中γ干扰素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)浓度高于Ov-NC/T组和T细胞组(均P<0.05)。Ov-DLGAP1-AS2组中PI3K、Akt和mTOR的表达水平低于Ov-NC组和对照组(均P<0.05)。加入740Y-P刺激786-O细胞,接种细胞48、72 h后,Ov-DLGAP1-AS2+740Y-P组细胞增殖活性高于Ov-DLGAP1-AS2组(均P<0.05),且Ov-DLGAP1-AS2+740Y-P组细胞上清液中sPD-L1的浓度高于Ov-DLGAP1-AS2组,与T细胞共培养后,Ov-DLGAP1-AS2/T+740Y-P组细胞上清液中γ干扰素、TNF-α、IL-2浓度低于Ov-DLGAP1-AS2/T组(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线表明DLGAP1-AS2高表达患者预后差于DLGAP1-AS2低表达患者(Log-rank P<0.001),且DLGAP1-AS2高表达为ccRCC患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。基于DLGAP1-AS2构建了列线图,经验证可以较好地预测ccRCC患者生存率。结论过表达DLGAP1-AS2能够通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路,抑制786-O细胞的增殖活性和免疫逃逸。DLGAP1-AS2高表达预示ccRCC患者预后不良。DLGAP1-AS2是ccRCC潜在的治疗靶点和预后标志物。

血清长链非编码RNA CRNDE-h、GAS5检测在预测多发性骨髓瘤预后中的价值分析

多发性骨髓瘤（MM）是一种以局灶性骨病变、软组织病变及弥漫性骨髓浸润为主要特征的骨髓恶性浆细胞疾病。MM患者的主要病变为异常浆细胞的增生,而这种浆细胞产生的单克隆免疫球蛋白不具有免疫功能,从而使患者出现了免疫功能降低、骨质破坏等病理改变,进而形成了骨痛、贫血、肾功能不全、感染、

LncRNA NEAT1调节miR-128-3p/HNRNPL轴对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及PD-1/PD-L1表达的影响

为探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)免疫逃逸中的作用及机制,采集96例NSCLC患者的肿瘤及邻近正常组织,应用qRT-PCR检测NEAT1表达并分析其与NSCLC患者临床病理特征的相关性。以qRT-PCR检测人支气管上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系中NEAT1、miR-128-3p、异质性胞核核糖核蛋白L(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L,HNRNPL)和PD-L1 mRNA表达。将NEAT1干扰质粒(si-NEAT1)、miR-128-3p inhibitor及其对照(si-NC、inhibitor-NC)转染A549细胞,分为正常对照组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+anti-NC组和si-NEAT1+anti-miR-128-3p组,随后检测HNRNPL、PD-L1 mRNA和蛋白表达,以RNA沉降等法验证NEAT1、miR-128-3p和HNRNPL的调控机制。A549与CD8^(+)T细胞共培养,验证敲低NEAT1在NSCLC免疫逃逸中的作用,并以ELISA检测PD-L1和IFN-γ水平。结果显示,NEAT1在NSCLC组织中高表达,且与NSCLC肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。NSCLC细胞中,NEAT1、HNRNPL和PD-L1显著过表达,而miR-128-3p显著低表达(均P<0.05)。敲低NEAT1可上调miR-128-3p,抑制HNRNPL和PD-L1表达,降低NSCLC细胞活力并诱导其凋亡(均P<0.05),而NEAT1可靶向结合NSCLC细胞中的miR-128-3p。共培养发现敲低NEAT1的A549细胞可激活CD8^(+)T细胞,抑制其凋亡并降低PD-L1和IFN-γ水平(均P<0.05),而下调miR-128-3p可增加HNRNPL和PD-L1表达,减弱NEAT1敲低对NSCLC细胞增殖、凋亡及CD8^(+)T细胞活化的影响(均P<0.05)。由此,NEAT1可能通过miR-128-3p/HNRNPL轴促进PD-L1表达,从而导致NSCLC的免疫逃逸。