长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

沉默长链非编码RNA HIF1A-AS2可抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移

目的探究长链非编码RNAHIF1A-AS2诱导宫颈癌细胞的上皮间质转换和肿瘤干细胞样特性的机制。方法设计3种可以沉默HIF1A-AS2的shRNA转染caski细胞株,选出干扰效果最好的shRNA进行后续研究;将caski细胞分为:Control组、shRNA-NC组和Sh-HIF1A-AS2组;检测各组细胞活力、侵袭能力、上皮间质转换及相关蛋白表达情况、肿瘤细胞成球情况和干细胞标记物情况;结果各组细胞活性差异无统计学意义(P>0.05);干扰结果确认使用HIF1A-AS2-shRNA1为shRNA;相比Control组,shRNA-NC组所有指标均无显著改变(P>0.05);相比shRNA-NC组,Sh-HIF1A-AS2组单位面积侵袭细胞数目、Vimrntin和N-cadherin、细胞成球数目、成球细胞直径、ABCG2阳性细胞率、Nanog、OCT4、SOX2蛋白和mRNA相对表达均显著降低,E-cadherin相对表达显著升高(P<0.05)。结论沉默长链非编码RNAHIF1A-AS2可以抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

子痫前期病人长链非编码RNA H19和长链非编码RNA HAND2-AS1表达水平与胰岛素抵抗的相关性研究

目的检测子痫前期病人胎盘组织、血清长链非编码RNA H19(LncRNA H19)与长链非编码RNAHAND2-AS1(Ln⁃cRNA HAND2-AS1)表达水平,并分析其与病人胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法将2021年1—12月在唐山市妇幼保健院建卡的子痫前期孕妇105例作为子痫前期组,根据子痫前期孕妇严重程度分为轻度子痫前期组与重度子痫前期组,另选取同期孕周、年龄相符的健康孕妇97例作为对照组,收集所有孕妇身体质量指数(BMI)、孕周、收缩压、舒张压、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)等一般资料,并计算稳态模型的IR指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定孕妇血清、胎盘组织中LncRNA H19,LncRNA HAND2-AS1水平;比较对照组与子痫前期组、轻度子痫前期组与重度子痫前期组间血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平;Pearson法分析子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1与HOMA-IR的相关性。结果子痫前期组病人收缩压、舒张压高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期病人收缩压、舒张压高于轻度子痫前期病人,孕周低于轻度子痫前期病人(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇24 h尿蛋白、FBG[(5.84±0.97)mmol/L比(4.22±0.70)mmol/L]、FINS[(13.37±2.23)mU/L比(7.52±1.25)mU/L]、HOMI-IR水平(3.47±0.57比1.41±0.23)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇24 h尿蛋白、FBG[(6.90±1.15)mmol/L比(5.24±0.85)mmol/L]、FINS[(13.97±2.32)mU/L比(13.05±2.17)mU/L]、HOMI-IR水平(4.27±0.71比3.03±0.50)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇血清、胎盘组织Ln⁃cRNA H19(2.52±1.42比1.01±0.15,3.75±0.62比1.02±0.17)与LncRNA HAND2-AS1水平(1.98±0.33比1.01±0.15,2.87±0.47比1.02±0.17)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19(2.84±0.47比2.34±0.39,4.28±0.71比3.45±0.57)与LncRNA HAND2-AS1水平(2.59±0.43比1.63±0.27,3.56±0.59比2.49±0.41)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);子痫前期病人血清与胎盘组织间LncRNA H19水平呈正相关(r=0.55,P<0.05),血清与胎盘组织间LncRNA HAND2-AS1水平呈正相关性(r=0.65,P<0.05)。子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.53、0.59,P<0.05);血清、胎盘组织LncRNA HAND2-AS1水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.60、0.61,P<0.05)。结论子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1高表达,二者与IR密切相关,可能通过影响IR参与子痫前期发生发展。

长链非编码RNA ZIM2-AS1在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据探讨长链非编码RNA(lncRNA)ZIM2-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义和诊断价值。方法:从TCGA数据库下载374例HCC组织样本和50例癌旁组织样本的转录组测序(RNA-seq)数据及相关临床资料,基于R语言进行相关生物信息学分析,以解析ZIM2-AS1在HCC中的表达模式及其与临床病理特征、预后及免疫细胞浸润的相关性,并评估其在HCC中的诊断价值;采用qRT-PCR检测ZIM2-AS1在人正常肝细胞及不同HCC细胞系中的表达情况。结果:ZIM2-AS1在HCC组织中的表达呈升高趋势(P<0.001),其表达水平与患者年龄、性别、肿瘤N分期、组织学分级和AFP水平显著相关(P均<0.05),且高表达患者的总生存期(OS)和疾病相关生存期(DSS)显著短于低表达患者(P<0.05),是影响HCC患者OS的独立危险因素。肿瘤免疫细胞浸润分析显示,ZIM2-AS1与Th2细胞、CD56brightNK细胞、滤泡辅助性T细胞(Tfh)、中性粒细胞和浆细胞样树突状细胞(pDC)的浸润水平显著相关(|Spearman's r|>0.1,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示ZIM2-AS1表达水平对HCC、N0分期、组织学分级G1和G2期、OS及DSS均具有一定诊断价值(AUC均>0.50)。qRT-PCR结果显示ZIM2-AS1在HCC细胞系中的表达水平显著高于人正常肝细胞(P均<0.05)。结论:LncRNA ZIM2-AS1的高表达是HCC预后不良的独立危险因素,具有成为HCC诊断、预后判断及肿瘤免疫微环境评估生物标志物的潜在应用价值。

长链非编码RNA UBE2Q1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的调节作用及机制实验研究

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)UBE2Q1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的影响,并探讨UBE2Q1-AS1发挥调节作用的分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测食管癌EC9706、Eca109、KYSE-510、TE-13细胞和永生化食管上皮HET-1A细胞中UBE2Q1-AS1的表达。将KYSE-510细胞分为si-NC组和si-UBE2Q1-AS1组,分别转染si-NC质粒和si-UBE2Q1-AS1质粒。集落形成实验检测各组KYSE-510细胞增殖活性。细胞划痕实验检测各组KYSE-510细胞的迁移能力。双荧光素酶报告系统验证UBE2Q1-AS1与微小RNA(miR)-377-3p的靶向关系。RT-qPCR检测各组KYSE-510细胞中miR-377-3p相对表达量。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组KYSE-510细胞中同源盒蛋白A1(HOXA1)、纤连蛋白(Fibronectin)、叉头相关转录因子C2(FOXC2)、粒状蛋白质2同源物(GRHL2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的相对表达量。结果:与HET-1A细胞比较,UBE2Q1-AS1在食管癌细胞中表达均升高(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞增殖活性低于si-NC组(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞迁移能力低于si-NC组(P<0.01)。UBE2Q1-AS1与miR-377-3p间存在靶向关系(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞中miR-377-3p表达水平高于si-NC组(P<0.01)。与si-NC组比较,si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞中HOXA1、Fibronectin、FOXC2蛋白表达降低,GRHL2和E-cadherin蛋白表达升高(均P<0.01)。结论:在食管癌细胞中,UBE2Q1-AS1表达上调,敲低UBE2Q1-AS1可能通过调节miR-377-3p/HOXA1轴抑制食管癌细胞增殖和迁移。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1在胶质瘤细胞中的表达和功能

目的研究长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1(lncRNA FOXD2-AS1)对胶质瘤生物学行为的影响。方法首先用qPCR实验检测FOXD2-AS1在U251、LN229、U87这3种胶质瘤细胞系中的表达情况,筛选出高表达的2种细胞系进行培养,再构建慢病毒载体转染2种细胞系敲低FOXD2-AS1作为实验组,将空载慢病毒颗粒转染的细胞作为阴性对照组,将常规培养未进行转染的细胞作为空白组,采用划痕实验、Transwell实验检测2种胶质瘤细胞系中各组细胞迁移及侵袭能力,将FOXD2-AS1敲低后进行转录组测序,进行差异基因取交集,并对共同差异基因进行富集分析。结果qPCR实验显示FOXD2-AS1在LN229、U251这2种胶质瘤细胞系中明显高表达,与阴性对照组和空白组相比,被慢病毒载体转染敲低FOXD2-AS1时,2种胶质瘤细胞系中实验组细胞迁移及侵袭能力明显下降。生信数据库分析敲低FOXD2-AS1时发现2种胶质瘤细胞系共有48个相关差异性表达基因,进一步通过KEGG通路富集分析发现,2种胶质瘤细胞系中FOXD2-AS1敲低都与多种信号通路(细胞过程中的聚焦粘附、环境信息处理中的神经活性配体-受体相互作用、遗传信息处理中的剪接体、人类疾病中的癌症通路、新陈代谢中的代谢途径、有机系统中的补体和凝血级联反应)存在相关性。结论LncRNA FOXD2-AS1在胶质瘤细胞迁移、侵袭中发挥作用,其可能的作用机制可还有待后续进一步研究。

长链非编码RNA EPB41L4A-AS2对乳腺癌的预后研究

目的通过检测乳腺癌组织中EPB41L4A-AS2的表达,评价其临床病理特征与乳腺癌患者预后之间的关系。方法利用癌症基因组Meta分析、TCGA和GEO数据集,评价EPB41L4A-AS2的表达量与乳腺癌的临床组织特征之间的关系。利用Western blot实验,在乳腺癌细胞水平验证EPB41L4A-AS2与凋亡通路的关联性。结果在Meta分析、TCGA和基因表达库(GEO)数据集的结果中发现,乳腺癌组织中EPB41L4A-AS2低表达,并且与不良的临床病理特征呈正相关。而在乳腺癌细胞系中的实验验证了EPB41L4A-AS2与细胞经典凋亡通路相关联。在GEO中进行Meta分析的预后研究中,发现EPB41L4A-AS2的高表达与良好的疾病预后有关。结论 EPB41L4A-AS2抑制了肿瘤的形成,对乳腺癌的临床预后分析有较高价值。

长链非编码RNA IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达对喉癌细胞迁移及增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)-AS1通过调控微RNA-375(miR-375)表达对喉癌细胞迁移和增殖的影响。方法研究时间为2022年1月至2023年11月,研究地点为郑州大学附属洛阳中心医院中心实验室,研究类型为基础研究。实时荧光定量PCR(qPCR)检测喉癌细胞系AMC-NH-8、TU159、TU138、TU686和支气管上皮细胞系16HBE中IGF2BP2-AS1的表达。以TU686细胞为研究对象,将TU686细胞分为si-NC组和si-IGF2BP2-AS1组,采用IGF2BP2-AS1小干扰RNA下调IGF2BP2-AS1表达水平。划痕愈合实验和CCK-8法分析敲降IGF2BP2-AS1对TU686细胞迁移及增殖的影响。双荧光素酶报告基因实验验证IGF2BP2-AS1与miR-375的靶向关系。qPCR检测敲降IGF2BP2-AS1对miR-375表达的影响。Western blotting检测细胞中迁移蛋白N-钙黏着蛋白(N-Cadherin)、叉头框蛋白C2(FOXC2)和增殖蛋白CDK2、细胞周期蛋白A(Cyclin A)的表达。统计学方法采用单因素方差分析、t检验。结果与16HBE细胞相比,IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中均高表达(F=37.42,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞划痕愈合率低于si-NC组[(28.16±6.13)%比(65.08±3.82)%],差异有统计学意义(t=5.11,P<0.01)。在铺板后第2、3、4、5天,si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞增殖能力均低于si-NC组(t=3.83、3.17、3.02、6.31,均P<0.01)。IGF2BP2-AS1-Wt中,miR-375组相对荧光素酶活性低于miR-NC组(t=8.95,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞中miR-375表达高于si-NC组[(4.95±0.49)比(1.02±0.40)],差异有统计学意义(t=6.23,P<0.01)。敲降IGF2BP2-AS1后TU686细胞中迁移蛋白N-Cadherin、FOXC2表达与增殖蛋白CDK2、Cyclin A表达均低于si-NC组。结论IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中呈高表达,敲降IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达抑制喉癌TU686细胞的迁移及增殖能力。

长链非编码RNA FAM83A-AS1在肺腺癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)序列相似家族83成员A-反义核糖核酸1(FAM83A-AS1)在肺腺癌(LUAD)中的表达水平,探讨lncRNA FAM83A-AS1和LUAD患者临床病理学特征及预后的关系。方法分析2015年1月至12月间80例行外科手术治疗的LUAD患者相关临床资料。采用Real-time PCR方法检测80例LUAD组织,并与癌旁正常肺组织中lncRNA FAM83A-AS1的表达水平进行对照分析。采用卡方检验LUAD患者lncRNA FAM83A-AS1水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析总生存期(OS);Cox回归模型分析影响LUAD预后的危险因素。结果与肺正常组织相比,LUAD组织中lncRNA FAM83A-AS1表达明显上调(P<0.05)。lncRNA FAM83A-AS1水平升高与肿瘤大小、淋巴结转移和临床TNM分期有关(P<0.05)。lncRNA FAM83A-AS1高表达的LUAD患者总生存期短(p<0.05)。COX生存分析显示,lncRNA FAM83A-AS1基因表达为肺癌预后的危险因素,高表达提示LUAD患者临床预后不良。结论lncRNA FAM83A-AS1在LUAD组织中表达显著升高,且与患者肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期和预后密切相关。

长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠心肌缺血再灌注损伤的调控作用

目的研究长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠缺血再灌注损伤的调控作用,并初步探索其机制。方法构建大鼠心肌缺血再灌注损伤和心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,利用实时定量PCR检测HIF1A-AS1的表达。采用siRNA抑制心肌细胞HIF1A-AS1的表达并制备缺氧/复氧损伤模型,用MTT法检测心肌细胞生长活力,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶的水平,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Beclin-1的表达变化。结果 HIF1A-AS1在缺血再灌注大鼠心肌组织和缺氧/复氧损伤心肌细胞中表达上调。抑制HIF1A-AS1表达可保护心肌细胞,逆转缺氧/复氧刺激导致的心肌细胞生长活力降低、乳酸脱氢酶分泌水平增高、自噬标志蛋白Beclin-1表达增高现象。结论抑制长链非编码RNA HIF1A-AS1,可能通过抑制心肌细胞的过度自噬抵抗缺血再灌注诱导的心肌损伤。

长链非编码RNA HNF1A-AS1在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肝细胞核因子1 alpha反义链1(hepatocyte nuclear factor 1 alpha-antisense 1,HNF1A-AS1)在胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasms,GEP-NENs)中的表达及意义。方法采用人全转录组芯片技术获得3例胃神经内分泌肿瘤(gastric neuroendocrine neoplasms,G-NENs)及其相应癌旁组织之间的多个差异表达lncRNA,并从中筛选出HNF1A-AS1作为本实验的目标lncRNA分子;采用qRT-PCR验证芯片结果的可靠性;采用质粒转染、MTT法、迁移实验检测HNF1A-AS1对GEP-NENs细胞系LCC-18和BON-1细胞增殖和迁移能力的影响;采用qRT-PCR和Western blotting分析HNF1A-AS1过表达对于GEP-NENs细胞系上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物表达水平的影响。结果人全转录组芯片结果显示,HNF1A-AS1在3例G-NENs组织中的RNA表达水平均明显低于相应癌旁组织(平均差异倍数=2. 07,P <0. 05),且qRT-PCR结果与芯片结果一致,表明芯片结果真实可靠。LCC-18和BON-1细胞转染pc DNA3. 1-HNF1A-AS1后均能显著上调两种细胞内部HNF1A-AS1的RNA表达水平(P均<0. 001)。LCC-18和BON-1细胞过表达HNF1A-AS1后,两种细胞的增殖及迁移能力明显减弱(P均<0. 05)。LCC-18过表达HNF1A-AS1之后细胞内间叶细胞标志物β-catenin mRNA水平和蛋白水平明显下调,而上皮细胞标志物E-cadherin mRNA水平和蛋白水平明显升高(P均<0. 05)。结论 HNF1A-AS1可能通过影响GEP-NENs细胞的增殖、迁移能力和EMT过程参与GEP-NENs的发生、发展,可能是GEP-NENs诊断新指标和潜在的治疗靶点。

术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

血清长链非编码RNA-XIST和HIF1A-AS1检测对非小细胞肺癌筛查的意义分析

目的 本研究旨在探讨NSCLC中lnc RNA-XIST和HIF1A-AS1表达的临床意义,并对其是否能够作为NSCLC肿瘤标志物进行评价。方法 采用定量PCR方法检测NSCLC患者组织和血清样本中XIST和HIF1A-AS表达情况,采用线性回归分析探讨XIST和HIF1A-AS表达与肿瘤组织和血清的关系。结果 lnc RNA表达谱和层序聚类分析表明,超过30种lnc RNAs在NSCLC肿瘤组织中表达异常。与癌旁组织组相比,NSCLC样本组的XIST（P〈0.05）和HIF1A-AS（P〈0.05）表达显著上调,此外NSCLC患者术后血清XIST和HIF1A-AS含量显著低于术前。ROC曲线分析结果提示两组存在较大差异,XIST的AUC值为0.834（95%CI：0.726～0.935;P〈0.001）,HIF1A-AS1的AUC值为0.876（95%CI：0.793～0.965;P〈0.001）,联合二者的AUC值则为0.931（95%CI：0.869～0.990;P〈0.001）,与上述单项相比差异显著。结论 本研究结果证实血清XIST和HIF1A-AS联合检测能作为NSCLC患者疾病诊断的辅助指标。

lncRNA-BBOX1-2通过调控成纤维细胞生长因子受体1促进胃癌的发生和发展

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)BBOX1-2通过调控成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)对胃癌的发生发展机制的影响。方法回顾性选取2017年4月至2019年1月于上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院接受胃癌根治术30例病人肿瘤组织及癌旁相应正常组织作为研究对象,采用实时定量PCT(real-time PCR,RT-PCR)检测lncRNA-BBOX1-2和FGFR1表达;si-linc-BBOX1-2转染SGC-7901细胞后,通过蛋白质印迹法/细胞存活率分析(MTT)、细胞迁移和侵袭(Transwell)实验、细胞划痕、平板克隆一系列生物学功能实验,检测肿瘤细胞生物学功能及FGFR1表达的变化。结果胃癌组织中的lncRNA-BBOX1-2(3.68±0.58比1.15±0.11)和FGFR1(4.26±0.71比1.19±0.18)表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);si-linc-BBOX1-2转染SGC-7901细胞后,FGFR1表达下调,细胞活力、迁移、侵袭和生存能力明显下降。结论LincRNA-BBOX1-2可通过调控FGFR1的表达介导胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,可能为胃癌的治疗提供了新的靶点和潜在的生物学标志物。

长链非编码LncHECW1-IT1对滑膜间充质干细胞成软骨分化的调控机制

目的 本文旨在探讨长链非编码RNAHECW1-IT1对滑膜间充质干细胞(SMSCs)成软骨分化的调控机制。方法 选取广州中医药大学深圳医院骨伤科关节镜手术或是关节置换手术患者的膝关节内滑膜,分离培养及诱导软骨分化,利用各种实验室方法,检测滑膜间充质干细胞成软骨分化的情况及分化过程中信号通路的表达。结果 从供体的滑膜组织中分离出SMSCs,并通过流式细胞术、RT-qPCR和WB鉴定出SMSCs;通过阿利新蓝染色分析了SMSCs的高软骨分化能力;采用高通量RNA测序技术分析了软骨分化诱导后lncRNA和mRNA的不同表达水平,最终共发现121个lncRNA和2539个mRNA,对所有DEmRNAs进行了GO富集和KEGG通路分析,我们发现MAPK和Wnt信号通路在软骨分化过程中显著富集。通过构建竞争的内源性RNA网络,鉴定发现LncHECW1-IT1和ATF2在SMSCs软骨分化中的重要作用,是治疗及干预骨关节炎的调节因子和重要靶点。结论 LncHECW1-IT1通过上调ATF2的表达来促进人SMSCs的软骨生成分化,LncHECW1-IT1-ATF2轴是调控SMSCs成软骨分化的新机制。

长链非编码RNA SBF2-AS1在肺癌组织中的表达及作用研究

目的探讨长链非编码RNA SBF2-AS1在肺癌组织中的表达及对非小细胞肺癌细胞系A549及H1299细胞增殖、凋亡等的影响。方法 51例肺癌组织标本(包括癌组织及癌旁组织),实时荧光定量聚合酶链反应检测SBF2-AS1的表达量,分析其与临床病例特征的关系;用siRNA干扰A549及H1299细胞SBF2-AS1的表达,MTT及流式细胞术分别检测其对细胞增殖、凋亡及周期的影响。结果 SBF2-AS1在癌组织中的表达量是癌旁组织的5.05倍;且其表达水平与淋巴结转移、临床病理分期有密切关系。A549及H1299细胞中SBF2-AS1的表达量被si RNA干扰下降后,细胞的增殖减慢,凋亡增加,细胞周期被阻滞于G1/G0期。结论SBF2-AS1在肺癌组织中高表达,可成为新的潜在的肺癌预测、预后判断的分子标志物及治疗靶点。

长链非编码RNA PCGEM1通过转化生长因子β2/Smad2信号通路调控口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PCGEM1通过转化生长因子β2(TGFβ2)/Smad2信号通路调控口腔鳞状细胞癌(OSCC)侵袭和转移的机制。方法将60例OSCC患者癌组织及距离癌组织超过2 cm处的正常组织纳入研究,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-148a、lncRNA PCGEM1在OSCC组织及正常组织、人正常口腔黏膜上皮细胞(OMEC)及人源OSCC细胞株KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15中的表达情况;分析lncRNA PCGEM1和miR-148a表达与患者临床病理信息之间的关系。构建lncRNA PCGEM1沉默细胞系KB-siPCGEM1及阴性对照(KB-NC),并以KB作为空白对照组,采用MTT、Transwell和划痕实验检测lncRNA PCGEM1对KB细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;使用生物信息学网站starBase预测lncRNA PCGEM1可以互补结合的微小RNA(miRNA),再根据www.microRNA.org网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;免疫印迹(Western blotting)检测TGFβ2/Smad2信号通路蛋白表达情况。结果qRT-PCR结果显示,OSCC组织中lncRNA PCGEM1、miR-148a的表达水平高于正常组织(P<0.05);lncRNA PCGEM1和miR-148a在不同TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度的患者癌组织中表达差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和KB-NC组相比,KB-siPCGEM1组细胞OD492 nm值下降,细胞侵袭数量及迁移率降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);生物信息学预测结果显示,lncRNA PCGEM1可与miR-148a互补结合,miR-148a与TGFβ2存在靶向结合位点;qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,KB-siPCGEM1组中miR148a、TGFβ2及p-Smad 2的表达明显低于空白对照组与KB-NC组(P<0.05),空白对照组和KB-NC组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论lncRNA PCGEM1在OSCC中高表达,高表达lncRNA PCGEM1可能通过上调miR-148a水平,强化TGFβ2/Smad2信号通路,从而促进OSCC的进展。

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。

长链非编码RNA MIR4435-2HG靶向微小RNA-1-3p调控信号通路磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)通过调控微小RNA-1-3p(miR-1-3p)的表达对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养正常胰腺细胞系hTERT-HPNE与胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PaTu8988、BxPC-3,将胰腺癌PaTu8988细胞按照随机数字表法分为si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG siRNA)、si-con组(转染siRNA Control)、miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、miR-con组(转染miR-1-3p阴性对照)、si-MIR4435-2HG+an⁃ti-miR-1-3p组(共转染MIR4435-2HG siRNA与miR-1-3p抑制剂)、si-MIR4435-2HG+anti-miR-con组(共转染MIR4435-2HG siR⁃NA与miR-1-3p抑制剂的阴性对照),同时将未经任何处理的细胞作为NC组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测细胞中MIR4435-2HG与miR-1-3p的表达;双荧光素酶报告基因检测MIR4435-2HG与miR-1-3p的相互作用。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析敲低MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果MIR4435-2HG在胰腺癌细胞中的表达水平明显高于正常胰腺细胞;MIR4435-2HG可特异性结合miR-1-3p并调控其表达活性;敲低MIR4435-2HG与上调miR-1-3p表达后,可抑制胰腺癌PaTu8988细胞增殖,明显减弱细胞迁移及侵袭能力[其中NC组、miR-con组、si-MIR4435-2HG组增殖活性分别为48 h:(1.21±0.10)、(1.18±0.12)、(0.86±0.09),细胞迁移数量分别为(90.56±9.16)、(88.56±8.91)、(26.49±2.10),细胞侵袭数量分别为(160.79±16.12)、(155.09±15.49)、(69.23±7.10),均P<0.05],下调PaTu8988细胞中cyclin D1、MMP2、MMP9、p-Akt、PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达;抑制miR-1-3p表达可促进胰腺癌PaTu8988细胞增殖、迁移及侵袭。结论敲低LncRNA MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-1-3p表达并抑制PI3K/Akt信号通路活化而降低细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达,进而减弱胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。