家蚕3-羟酰辅酶A脱氢酶基因全长cDNA克隆及其在质型多角体病毒感染家蚕的差异表达

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)是家蚕的重要病毒病原之一,往往给养蚕业生产造成极大危害。我们以前的研究运用基因芯片技术在感染质型多角体病毒的家蚕中肠中鉴定出一个差异表达的3-羟酰辅酶A脱氢酶蛋白基因(Bombyx mori3-hydroxyacyl-CoA dehyrogenase protein gene-Bm3HAD)。本研究利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了该基因,其全长cDNA序列为1168bp,包含一个83bp5'端非翻译区序列(5'-UTR)、一个930bp的开放阅读框(ORF)和一个155bp的3'端非翻译区序列(3'-UTR);基因结构分析发现该基因由5个外显子和4个内含子组成。RT-PCR结果显示该基因在家蚕中肠、脂肪体、血液、丝腺及生殖体中均有表达。荧光定量PCR结果表明该基因在BmCPV感染初期为上调表达,随着病毒感染的进展,该基因的表达水平逐渐降低,并转变为下调表达。研究结果为进一步研究BmCPV对家蚕致病的分子机制提供了有益的信息。

3-羟酰基辅酶A脱氢酶在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

目的:克隆并在大肠杆菌中表达3-羟酰基辅酶A脱氢酶(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,HCDH)并制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增HCDH基因片段,经DNA测序证实后克隆到原核表达载体pMAL-P2X,重组质粒转化大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经麦芽糖树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫獭兔,琼扩和ELISA检测抗血清的效价,Western blot检测其特异性。结果:PCR扩增得到786bp的目的片段,序列测定证实与GeneBank上登录的序列一致;成功构建了HCDH基因片段的原核表达载体;在详细探索表达条件的基础上,成功诱导HCDH的表达,并制备了相应的抗血清。结论:检测HCDH蛋白在表达水平上的变化及为HCDH基因表达调控的进一步研究奠定了基础。

长链脂肪酸氧化酶LCHAD胎盘表达与早发型重度先兆子痫的研究

目的：探讨线粒体长链脂肪酸氧化酶-长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶（10ngchain3-hydroxyacyl-CoAdehydrogenase，LCHAD）在重度先兆子痫（severepreeclampsia，S-PE）不同发病时期中的作用。方法：用免疫组化SP法，检测70例重度先兆子痫不同发病时期的伴或不伴有肝损害的胎盘组织中LCHAD蛋白的表达特点，并与54例正常妊娠早、中、晚期的绒毛和胎盘组织比较。统计学方法采用t检验。结果：正常妊娠和重度先兆子痫胎盘组织均有LCHAD表达。正常胎盘组织LCHAD表达强度随妊娠孕周的增加逐渐降低，妊娠晚期的表达强度较妊娠早期明显降低，差异有显著性（P〈0．05）。发病孕周小于28周的重度先兆子痫组LCHAD表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．019）。孕28～32周发病的重度先兆子痫伴有肝损害组LCHAD的表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．010）；无肝损害组LCHAD表达强度降低，但与相同孕周对照组比较，差异无显著性（P=0．093）。大于32孕周发病的重度先兆子痫各组LCHAD表达强度与对照组比较无明显变化。结论：LCHAD在正常妊娠及重度先兆子痫胎盘组织中均有明确表达，进一步揭示胎盘的发生和发展需要脂肪酸氧化供能，对维持胎盘正常功能和保证胎儿正常生长发育可能起重要作用。脂肪酸氧化代谢异常与早发型重度先兆子痫尤其是伴有肝损害有关。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

Peripheral SLC6A4 gene expression in obsessive-compulsive disorder in the Han Chinese population

背景:有研究提示5-羟色胺系统的功能障碍与强迫症(obsessive-compulsive disorder,OCD)有关。目标:本研究拟定量OCD患者的外周SLC6A4基因表达,以探讨SLC6A4和OCD之间的关系。方法:受试为50例首发OCD患者和60例年龄和性别匹配的健康对照,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)定量外周白细胞SLC6A4基因表达。采用Yale-Brown Obsessive Compulsive Scale(Y-BOCS)评估OCD的严重性和亚型。结果:以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)标准化定量外周SLC6A4基因表达量,在OCD组和健康对照组(z=0.79,p=0.428)之间没有显著差异。男性OCD患者显示外周SLC6A4低基因表达的倾向(z=-1.66,p=0.096)。研究也未能发现SLC6A4基因表达量与OCD的严重性和亚型之间有显著相关性。结论:SLC6A4基因表达量与OCD的严重程度和亚型之间没有相关性,但男性OCD患者呈外周SLC6A4低基因表达倾向。本研究表明,中国汉族人群的外周SLC6A4基因表达可能并非有效的生物标记物。

粘虫飞行过程中四种相关酶的活性变化

对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖代谢和脂肪代谢相关的酶活性都快速升高,这段时期脂肪代谢的酶活性也完全被活化,HOAD活性明显增强;但在随后的5～60 min持续吊飞期间与能量代谢有关的酶活性都有所下降,表明此时飞行活性趋于平稳.飞行中的粘虫具有极高的有氧代谢能力,也具备一定的无氧代谢能力.吊飞过程中HOAD∶GAPDH大于1,说明粘虫飞行过程中能源物质利用属于混合型,但动用脂肪比糖类要多.

hCG对成年小鼠睾丸Leydig细胞中睾酮生成酶的调节作用

目的 从分子水平探讨 h CG对成年小鼠睾丸 L eydig细胞中胆固醇侧链裂解酶 (P45 0 scc)、17α-羟化酶 (P45 0 c17)和 3β-羟甾脱氢酶 (3βHSD)的调节作用。 方法 体外培养成年小鼠睾丸 L eydig细胞 ,分别测定培养1、8h h CG刺激组及对照组细胞培养上清中睾酮含量 ,同时运用半定量 RT- PCR及核酸内切酶酶切方法测定两组细胞中 P45 0 scc、P45 0 c17及 I、VI两型总的 3βHSD的 m RNA水平 ,并测定了 I、VI两型 3βHSD m RNA的比值。 结果 1.培养 1、8h刺激组睾酮含量均明显高于对照组 (1h P<0 .0 1,8h P<0 .0 0 5 ) ;2 .培养 8h,刺激组 P45 0 scc和P45 0 c17m RNA水平明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;而培养 1、8h刺激组 I、VI两型总的 3βHSD m RNA水平和对照组相比均无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但 VI型 3βHSD m RNA和 I型 3βHSD m RNA的比值逐渐增高。 结论 h CG能在转录水平刺激 P45 0 scc、P45 0 c17及 VI型 3βHSD的表达 ,促进睾酮生成。

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制。方法将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只。对照组大鼠腹腔注射等量的pH8.0 Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20 d。用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化。结果与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04)vs(0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10)vs(1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14)vs(1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义。结论膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成。

卡前列甲酯合并酪氨酰肼对小鼠的抗早孕作用

目的观察卡前列甲酯（ＰＧ０５）合并酪氨酰肼对小鼠抗早孕作用。方法小鼠于妊娠第７～９天给药，观察妊娠率；用放射免疫法测定血清孕酮水平。结果小鼠口服９０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）能显著增强皮下注射０．２ｍｇ／ｋｇＰＧ０５（２ｄ）的抗早孕作用，并协同ＰＧ０５降低孕小鼠血清孕酮的水平。３０μｇ／ｍｌ酪氨酰肼对大鼠黄体细胞３β－ＨＳＤ的活性有明显的抑制作用。口服１５０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）对假孕大鼠子宫孕激素受体数目无显著影响。结论酪氨酰肼抑制体内孕酮的生成可能是其协同ＰＧ０５抗早孕作用的主要机制。

普伐他汀对子痫前期样小鼠模型中长链脂肪酸氧化酶的调节作用

目的探讨普伐他汀（Pra）对子痫前期（PE）样小鼠模型中长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）的调节作用。方法将32只C57BL／6J小鼠随机于孕7—18d每天注射亚硝基左旋精氨酸甲酯以建立PE样模型（即PE），或同期注射等剂量生理盐水为正常对照（即Con），再分别于孕8d始每天Pra灌胃（PE＋Pra、Con＋Pra组）或生理盐水灌胃（PE＋N、Con＋N组）；孕鼠共4组，每组各8只。于孕18d时收集孕鼠的肝脏及胎盘组织。通过蛋白印迹法、实时荧光定量PCR技术、免疫组化法检测，并比较LCHAD在各组孕鼠肝脏及胎盘中的表达。结果（1）PE＋N组孕鼠的动脉压自孕8d至孕18d逐渐升高，而PE＋Pra组孕鼠自孕10d始开始下降；PE＋N组孕鼠孕18d时的24h尿蛋白量[（1494±201）μg]明显高于Con＋N组[（935±128）μg]，两组比较，差异有统计学意义，（P〈0．01），也明显高于PE＋Pra组孕鼠[（981±116）μg，P〈0．01]。（2）蛋白印迹法：PE＋N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平（肝脏：0．64±0．11，胎盘：0．48±0．06）明显低于Con＋N组（肝脏：1．06±0．10，胎盘：0．60±0．10；P均〈0．01），也明显低于PE＋Pra组（肝脏：0．99±0．04，胎盘：0．60±0．08；P均〈0．01）。（3）实时荧光定量PCR技术：PE＋N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHADmRNA的表达水平（肝脏：0．621±O．128，胎盘：0．646±0．129）明显低于Con＋N组（肝脏：1.007±0．130，胎盘：1．004±0．103；P均〈0．01），而与PE＋Pra组（肝脏：0．693±0．678，胎盘：0．662±0．183）比较，差异无统计学意义（P均〉0．05）。（4）免疫组化法：4组孕鼠肝脏组织中均有LCHAD蛋白的广泛表达，在胎盘组织中以迷路滋养层绒毛干外层绒毛滋养细胞及合体滋养细胞中表达最多。LCHAD蛋白在PE＋N组孕鼠的表达水平（肝脏：0．062±0．016，胎盘：0．147±0．018）明显低于Con＋N组（肝脏：0．126±0．013，胎盘：0．183±0．024；P均〈0．05），也明显低于PE＋Pra组（肝脏：0．111±0．017，胎盘：0．174±0．027；P均〈0．05）。结论Pra可上调PE样模型孕鼠肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平，其可能为调节PE临床表现的机制。

LCHAD基因表达及甲基化与病理妊娠状态相关性研究

目的:探讨长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因表达及甲基化与病理妊娠状态的相关性。方法:选取早发重度子痫前期病人18例(A组)、溶血、肝酶升高和血小板减少(HELLP)综合征15例(B组)、抗磷脂综合征17例(C组),同时选取正常妊娠女性20名作为对照组。比较各组一般资料、LCHAD基因启动子区甲基化及LCHAD mRNA表达水平,分析LCHAD基因启动子区甲基化水平与mRNA表达相关性。结果:A、B组分娩孕周低于对照组(P<0.05),C组分娩孕周高于B组(P<0.05);A、B组收缩压、舒张压及24 h尿蛋白水平均高于对照组(P<0.05);B组丙氨酸氨基转移酶和血肌酐水平均高于对照组(P<0.05)。A组LCHAD基因-899、-853、-615、-984、-774、-727及-579位点甲基化水平高于对照组,-853位点甲基化水平高于B组,-899、-853及-615位点甲基化水平高于C组(P<0.05);B组-899、-853、-774及-615位点甲基化水平高于对照组,-899、-853及-615位点甲基化水平高于C组(P<0.05)。A组、B组、C组LCHAD mRNA表达水平均低于对照组(P<0.05)。A组LCHAD基因-899、-853、-727、-615及-579位点甲基化水平与mRNA表达水平均呈负相关关系(P<0.05);B组LCHAD基因-899、-853及-615位点甲基化水平与mRNA表达水平均呈负相关关系(P<0.05);C组和对照组LCHAD基因全部位点甲基化水平与mRNA表达水平均无明显相关关系(P>0.05)。结论:合并早发重度子痫前期和HELLP综合征孕妇LCHAD基因甲基化修饰处于高水平,且与mRNA表达密切相关。

妊娠合并HELLP综合征发病机理的新进展

HELLP综合征是产科严重并发症之一 ,它可能是一种独立的疾病 ,也可能是先兆子痫的严重并发症形式 ,其发病机理目前尚不清楚。现将HELLP综合征发生的有关因素进行综述 。

运动对ApoE基因敲除小鼠骨骼肌脂代谢及PPAR-α mRNA表达的影响

目的 观察运动对胰岛素抵抗小鼠骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）及靶基因脂酰辅酶A氧化酶（ACO）、烯酰辅酶A水解酶/L-3羟-CoA脱氢酶（EHHADH）mRNA表达的影响,并初步探讨运动改善脂代谢的可能机制.方法 将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为高脂组及运动组,高脂组小鼠给予高脂饮食喂养,运动组小鼠在高脂饮食基础上增加游泳训练,另选取C57BL/6J小鼠作为对照组.经干预12周后,测定各组小鼠空腹血脂、血糖及胰岛素浓度,并计算胰岛素抵抗指数;同时取各组小鼠腓肠肌进行电镜超微结构观察,采用RT-PCR方法检测各组小鼠骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA水平.结果 通过电镜观察发现,高脂组可见肌细胞线粒体水肿、肌膜下水肿、肌原纤维间水肿,伴有肌溶解灶,该组小鼠血脂（总胆固醇、低密度脂蛋白、游离脂肪酸）、空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数均较对照组明显升高（均P ＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达均较对照组明显下调（均P＜0.05）.运动组小鼠经游泳干预后,发现其肌细胞肌原纤维间有轻度水肿,肌纤维排列整齐,未见肌溶解及肌膜下水肿;血脂水平较高脂组明显降低（均P＜0.05）,高密度脂蛋白较高脂组明显升高（P＜0.05）;空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数较高脂组明显降低（均P＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达较高脂组明显上调（均P＜0.05）.结论 游泳运动可显著改善ApoE基因敲除小鼠脂代谢紊乱及胰岛素抵抗,其治疗机制可能与上调骨骼肌中PPAR-α,进一步激活其下游靶基因ACO及EHHADH,从而提高脂肪酸氧化代谢能力有关.

ABAD/HADH Ⅱ在喉鳞状细胞癌与声带息肉组织中的表达

目的：检测喉癌组织中ABAD／HADHⅡ的表达，探讨ABAD／HADHⅡ在喉鳞状细胞癌增殖中的作用。方法：选用福建医科大学附属第一医院2002—2005年的27例喉癌手术标本及12例声带息肉手术标本，采用免疫组化检测ABAD／HADHⅡ的表达及分布情况。结果：ABAD／HADHⅡ主要表达在鳞状细胞癌的细胞浆，在生长活跃的细胞表达较高；ABAD／HADHⅡ在喉鳞状细胞癌组织中的表达比在息肉组织中的表达高（P〈0．05）。结论：ABAD／HADHⅡ在喉癌组织中表达较正常组织高，与喉鳞状细胞癌的增殖有一定的关系。

HELLP综合征的研究进展

HELLP综合征是妊娠期高血压疾病的严重并发症,常危及母婴生命,是导致孕产妇及围生儿死亡的原因之一。近年来,国内外学者对其发病机制进行了大量研究,有母胎免疫失衡,血小板聚集与消耗,血管内皮功能障碍及先天性固有脂肪酸氧化失调等学说,但其发病机制目前尚未阐明,可能是子痫前期或子痫的严重并发症,也可能是一种独立的疾病。

线虫β-氧化循环的结构生物学研究

β-氧化循环是生物体脂肪酸的氧化分解的主要途径。在真核细胞内脂肪酸经过活化生成脂酰CoA,而后在线粒体基质中进入β氧化循环被逐步氧化分解。

低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为常氧、低氧5 d、低氧15 d和低氧30 d组。运用放射免疫测定法和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,研究了模拟海拔5000 m高度低氧5 d、15 d、30 d对雄性Wistar大鼠血中睾酮浓度的影响,以及对睾丸组织中睾酮合成相关的类固醇急性调节蛋白(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的影响。结果模拟海拔5000 m高度低氧15 d,大鼠血中睾酮浓度显著高于常氧组(P＜0．05),低氧30 d,大鼠血中睾酮浓度显著低于对照组(P＜0．05);低氧不引起雄性大鼠睾丸组织StAR mRNA表达改变;低氧15 d、30 d,大鼠睾丸组织P450scc mRNA和3β-HSD mRNA表达分别显著低于常氧组(P＜0．05)。结论慢性低氧抑制了睾酮的分泌,并抑制了睾丸组织睾酮合成相关酶P450scc mRNA和3β-HSD mRNA的表达。低氧15 d大鼠血中睾酮浓度升高的机制需进一步研究。

子痫前期对滋养细胞脂肪酸氧化的影响及其与p38MAPK信号通路的相关性

目的 探讨重度子痫前期对胎盘滋养细胞线粒体长链脂肪酸氧化酶——长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路的相关性.方法 体外培养胎盘滋养细胞,分别用早发型重度子痫前期、晚发型重度子痫前期、重度子痫前期伴发HELLP综合征及正常妊娠妇女的血清刺激胎盘滋养细胞（分别命名为早发组、晚发组、HELLP组、正常对照组）,每组再分别加入DMEM/F12培养基、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抑制剂（NADPH-Ⅰ）和p38MAPK抑制剂（p38-Ⅰ）处理细胞.采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测各组滋养细胞LCHAD mRNA和蛋白的表达.结果 （1）LCHAD mRNA的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ滋养细胞LCHAD mRNA的相对表达量分别为1.00±0.03、0.14±0.08、0.95±0.20、1.43±1.02、0.37±0.18、1.51 ±0.36、1.60±0.31、0.10 ±0.04、0.49 ±0.10、0.44±0.21.早发组＋培养基、晚发组＋培养基、HELLP组＋培养基与正常对照组＋培养基比较,LCHAD mRNA的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与正常对照组比较,晚发组＋ NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHADmRNA的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而HELLP组LCHAD mRNA的相对表达量均有明显降低,差异也有统计学意义（P＜0.05）.（2） LCHAD蛋白的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋ p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ组LCHAD蛋白的相对表达量分别为19.4±2.2、10.7±1.1、17.9±3.3、19.1 ±2.9、16.4±2.3、20.3±2.3、20.9 ±4.3、12.4±2.3、17.6±2.6、17.7 ±2.0.与正常对照组比较,早发组＋培养基、晚发组＋培养基及HELLP组LCHAD蛋白的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而早发组＋NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHAD蛋白的相对表达量无明显变化（P＞0.05）.早发组、晚发组、HELLP组中,NADPH-Ⅰ亚组、p38-Ⅰ亚组与培养基亚组比较,LCHAD蛋白的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 重度子痫前期对胎盘滋养细胞中的脂肪酸氧化代谢有一定的影响,尤其以HELLP综合征最为明显.NADPH-Ⅰ、p38-Ⅰ能缓解早、晚发型重度子痫前期和HELLP综合征中的脂肪酸氧化代谢障碍,p38MAPK信号通路可能参与了该过程.

红色红曲菌M7的丝衣霉酸基因簇及其功能研究

【目的】明确红色红曲菌(Monascus ruber) M7的基因组中是否存在丝衣霉酸(byssochlamic acid, BA)基因簇,并探讨BA基因簇中聚酮合酶基因mr-Bys及3-羟酰基辅酶A脱氢酶基因mr-hdh对BA产生的影响。【方法】采用生物信息学方法对M7基因组进行分析,以确定BA候选基因簇;以基因敲除及过表达方法研究mr-Bys和mr-hdh对BA产生的影响;以超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography, UPLC)和质谱(mass spectrometry, MS)方法分析BA。【结果】在红色红曲菌M7基因组中发现了BA基因簇,敲除mr-Bys后,BA消失,而敲除和过表达mr-hdh均可影响BA的产生。【结论】红色红曲菌M7基因组中存在BA基因簇,可产生BA。研究结果不仅丰富了红曲菌次生代谢产物及其合成途径的相关研究,也为以红曲菌为菌种开发新产品奠定了基础。

不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD表达与氧化应激、炎性反应及血清游离脂肪酸和甘油三酯水平的相关性

目的探讨不同临床发病特征的子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶表达与氧化应激、炎性反应及其与血清游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）水平的相关性。方法采用前瞻性队列研究方法，选择2012年1月1日至5月31日在北京市海淀区妇幼保健院行产前检查的单胎孕妇，于孕22～24周行B超检查，发现有子宫动脉舒张早期切迹（简称切迹）的101例孕妇纳入有切迹组，无切迹的377例孕妇为无切迹组，随访两组孕妇的妊娠结局及妊娠期高血压疾病发病情况。检测两组孕早中期血清FFA、TG水平，采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶P47-phox亚基（NADPH P47-phox）、p38丝裂原活化蛋白激酶α（p38MAPK-α）和环氧合酶2（COX-2） mRNA和蛋白的表达；分析孕妇血清FFA、TG水平与胎盘组织中LCHAD、NADPH P47-phox、p38MAPK-α和COX-2 mRNA 和蛋白表达的相关性。结果（1）有切迹组发生早发型子痫前期9例，晚发型子痫前期15例，妊娠期高血压10例；无切迹组发生晚发型子痫前期8例，妊娠期高血压18例。随机选取两组孕妇中血压正常者各15例共计30例为对照组。（2）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（2.0±0.8）、（1.8±0.6）及（1.9±0.7）mmol/L，FFA水平分别为（0.68±0.26）、（0.52±0.10）及（0.52±0.17）mmol/L；无切迹组晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（1.6±0.6）及（1.4±0.4）mmol/L，FFA水平分别为（0.49±0.11）及（0.48±0.05）mmol/L；对照组TG及FFA水平分别为（1.4±0.5）及（0.52±0.06）mmol/L；有切迹组孕妇TG水平均显著高于对照组（P〈0.05）；有切迹组早发型子痫前期孕妇FFA水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。（3）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平均显著低于有切迹组和无切迹组的晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中p38MAPK-α mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织COX-2 mRNA表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。（4）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期、妊娠期高血压孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平均显著低于对照组（P〈0.01）；有切迹组早发型子痫前期显著低于无切迹组晚发型子痫前期（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox蛋白表达水平高于无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中p38MAPK-α蛋白表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇，及无切迹组孕妇胎盘组织中COX-2蛋白表达水平均显著高于对照组（P〈0.01）。（5）有切迹组早发型子痫前期孕妇血清FFA 水平与胎盘组织中LCHAD mRNA 和蛋白表达呈显著负相关（r=-0.810、-0.932，P〈0.01），两组孕妇血清TG水平与胎盘组织中LCHAD mRNA和蛋白表达均无显著相关性（P〉0.05）。（6）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平与NADPH P47-phox mRNA、COX-2 mRNA 表达呈显著负相关（r=-0.877、-0.762，P〈0.05）；对照组胎盘组织中 LCHAD mRNA表达水平与COX-2 mRNA表达呈显著负相关（r=-0.565，P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与NADPH P47-phox蛋白表达呈显著负相关（r=-0.818， P〈0.01）；对照组胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与COX-2蛋白表达呈显著负相关（r=-0.502，P〈 0.01）。结论不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平不同，伴有切迹的早发型子痫前期孕妇的长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平较晚发型降低更为明显，且与早中孕期升高的血清FFA水平以及显著增强的氧化应激和炎性反应有负相关性，与血清TG水平无相关性。