利用门多萨假单胞菌NK-01合成中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)

从土壤中分离到1株能够合成中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的细菌,经分类鉴定命名为Pseudomonas mendocina NK-01。对于该菌株在氮源限制的情况下,利用葡萄糖合成的PHAMCL进行了结构分析。同时,获得了该菌株PHA合成酶基因phaC1,利用大肠杆菌表达载体pBluescript SK-构建了重组载体pBSphaC1,并在E.coli JM109中成功表达。以所构建的工程菌株进行了发酵合成。

门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina P10脂肪酶基因的克隆及其在酵母中的表达

采用同源克隆法获得了门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina P10脂肪酶基因的全长序列,DNA测序结果表明,该基因的DNA全长序列为801bp,编码267个氨基酸,推测蛋白相对分子量为29.95ku。将该脂肪酶基因连接到pPICZαA载体上得到重组表达质粒,转化Pichia pastoris X-33。脂肪酶基因在Pichia pastoris X-33中实现了分泌性表达,摇瓶发酵液上清酶活最大可达8U/mL。

游离和聚乙烯醇包埋门多萨假单胞菌好氧反硝化脱氮的研究

以从采自温州西片污水处理厂的活性污泥样品中分离的好氧反硝化门多萨假单胞菌（Pseudmonas mendocina）WZUF20为受试对象,以聚乙烯醇（PVA）-海藻酸钙-活性炭包埋固定化,研究游离和固定化细胞在人工硝态氮污水中好氧反硝化去除硝态氮的条件,以及它们对人工氨氮、硝态氮和亚硝态氮污水的氨氮、硝态氮和亚硝态氮的去除能力。结果表明：（1）游离细胞和固定化细胞去除硝态氮的适宜条件是相似的,适宜碳源为丁二酸钠、乙酸钠和柠檬酸钠,适宜碳源和KNO3质量比为10∶1,适宜温度、转速和pH分别为20~35℃、100~200r/min和6.0~9.5;（2）在适宜条件下,游离细胞和固定化细胞对人工氨氮污水氨氮的去除速率分别为8.79、1.67mg/（L·h）,对人工硝态氮污水硝态氮的去除速率分别为8.17、4.54mg/（L·h）,对人工亚硝态氮污水亚硝态氮的去除速率分别为16.42、7.67mg/（L·h）;（3）在人工硝态氮污水中连续5批次的去硝态氮试验表明,PVA-海藻酸钙-活性炭固定化细胞是稳定的。说明门多萨假单胞菌（Pseudmonas mendocina）WZUF20以及PVA-海藻酸钙-活性炭包埋制备的固定化细胞具有应用于实际废水脱氮的潜力。

从慢性阻塞性肺病患者痰液中分离出1株门多萨假单胞菌

2011年2月，我们从一慢性阻塞性肺病（COPD）患者痰液中连续3次均分离出门多萨假单胞菌（Pseudomonas mendocina），报道如下。

门多萨假单胞菌DS04-T对Poly(3HB-co-4HB)的降解研究

考察了门多萨假单胞菌DS04-T对Poly(3HB-co-4HB)的降解行为。以Poly(3HB-co-4HB)为唯一碳源,分别考察培养时间、培养温度、摇床转速、装液量、培养基起始pH值、接种量等因素对降解行为的影响。结合正交试验优化获得了菌株的最佳产酶条件:培养时间为28h,培养温度为30℃,培养基初始pH值为7.3,摇床转速为150r/min,培养基装液量为120mL(250mL三角瓶),接种量为1.5%(体积分数),此条件下菌株对Poly(3HB-co-4HB)的降解酶活力可达(26.2±0.7)U.mL-1。

门多萨假单胞菌DS04-T对PHBV降解性能研究

以3-羟基丁酸-co-3-羟基戊酸共聚物(PHBV)为唯一碳源培养PHBV降解菌DS04-T,考察培养时间、温度、培养基起始pH、摇床转速、接种体积分数以及装液量等环境因素对菌株产生PHBV降解酶的影响,进而考察菌株对PHBV的降解能力。并结合正交试验优选适宜的产酶条件如下:培养温度28℃;培养时间32h;摇床转速150r/min;装液量100mL培养基;培养基起始pH为7.5;接种体积分数1.5%。在此优化条件下菌株产生的PHBV降解酶有较高的活力,达(18.9±1.2)U/mL。

门多萨假单胞菌NK-01合成中长链聚羟基脂肪酸酯的发酵条件优化

为了提高PHAMCL在门多萨假单胞菌NK-01中的积累,采用单因素实验和正交实验确立了发酵生产PHAMCL的最佳条件,即以PHA产量为指标的最佳发酵条件为15 g/L葡萄糖浓度、C/N=50、发酵时间48h,该条件下获得产量0.8 g/L以上的PHA;以PHA占菌体干重百分含量为指标的最佳发酵条件为10 g/L葡萄糖浓度、C/N=60、发酵时间48 h,该条件下获得占菌体干重50%以上的PHA。该研究将为门多萨假单胞菌NK-01用于PHAMCL的规模化生产提供理论依据。

一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-Ⅱa、aac(6)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。

临床药师参与1例门多萨假单胞菌感染病例的治疗实践与体会

临床药师参与1例门多萨假单胞菌感染病例的治疗,根据患者的感染部位,结合药敏结果、药物特性,从抗菌药物选择、致病菌特性等方面对治疗方案提供信息和帮助,为患者制定了合理的治疗方案,为医生的抗感染治疗方案提供了有力的药学技术支持,促进了临床药物的合理应用,发挥了临床药师的价值。

铜绿假单胞菌的Quorum-sensing系统

20世纪90年代以来由于研究和诊断技术的进步,尤其是激光扫描共聚焦显微镜的诞生,人们发现,大多数细菌的生存方式是以生物膜为主、浮游状态为辅的。据统计,65%的人类细菌感染与生物膜有关。近年来的研究表明,由于细菌生物膜的QS系统对生物膜的形成和生物膜结构的稳定起着关键性作用,该系统被认为是消灭细菌生物膜最有希望的突破口之一。铜绿假单胞菌是一种临床上最常见的引起严重院内获得性感染的机会致病菌。由它引起的院内感染高达30%以上,其中以呼吸道感染为首。而且铜绿假单胞菌是一种极为常见的细菌生物膜相关感染病原菌,所引起慢性难治性感染往往反复发作、进行性进展并且难以根治。因此铜绿假单胞菌QS系统的研究已成为国内外医学、药学、微生物学等众多领域关注的热点。

复方MYZ-20对耐药铜绿假单胞菌的抑制机制

目的研究复方MYZ-20对耐药铜绿假单胞菌的抑制作用及机制。方法采用倍比稀释法确定MYZ-20的最低抑菌浓度和最小杀菌浓度;通过检测相对电导率、胞外碱性磷酸酶活性确定MYZ-20的杀菌功效;测定绿脓素、绿色荧光素、生物膜形成,探究MYZ-20对耐药铜绿假单胞菌毒力因子的抑制作用;建立小鼠烫伤感染模型,观察MYZ-20抗感染与创口修复的效果。结果MYZ-20通过破坏膜结构杀伤铜绿假单胞菌,显著降低细菌毒力因子水平,促进小鼠伤口修复及降低炎症水平。结论MYZ-20对耐药铜绿假单胞菌具强杀伤作用,并具有抗炎及伤口修复作用。

一株甜瓜枯萎病拮抗菌的筛选、鉴定及生防效果

为获得对甜瓜病原菌具有生防潜力的菌株,采用稀释涂平板和分子鉴定的方法,从连续多年种植甜瓜大棚的土壤中分离获得菌株Bc1-20,鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。为筛选到对甜瓜多种病害的病原菌具有拮抗作用和对甜瓜具有促生作用的菌株,采用平板对峙法、苗期灌根和盆栽接种试验。结果表明,Bc1-20对甜瓜多种真菌病害的病原菌均有抑制作用,例如,尖孢镰刀菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.melonis)、黑点根腐病菌(Monosporascus cannonballus)、蔓枯病菌(Stagonosporopsis cucurbitacearum)、腐皮镰刀菌(F.solani)和亚洲镰刀菌(F.asiaticum);Bc1-20处理甜瓜幼苗的茎粗、茎长、鲜质量、子叶长宽及最大真叶的长和宽方面都极显著高于空白对照,表明铜绿假单胞菌Bc1-20对甜瓜幼苗有促生作用;Bc1-20处理的甜瓜幼苗枯萎病的病情指数为40.80,空白对照组的病情指数为85.65,Bc1-20处理的相对防治效果为52.34%。综上,铜绿假单胞菌Bc1-20具有生防潜力,可很好地防治甜瓜枯萎病。

门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina NK-01合成褐藻寡糖及其结构鉴定

研究发现门多萨假单胞菌NK-01在菌体内积累中长链聚羟基脂肪酸酯(PHAMCL)的同时也能够合成褐藻寡糖分泌到发酵液中,其产量与培养基的碳氮比有关,高碳氮比有利于褐藻寡糖的合成。本研究利用紫外-可见分光光度法、傅立叶红外光谱分析、1H和13C核磁共振对褐藻寡糖的结构进行了分析鉴定,发现褐藻寡糖的结构是由β-D-甘露糖醛酸、α-L-古洛糖醛酸通过β-(1→4)/α-(1→4)键连接而成的无支化线性多糖,并且在单体的2位或3位羟基上部分乙酰化。凝胶渗透色谱(GPC)对分子量的测定结果为2054。

单甲脒降解菌的分离筛选

从土壤、水体和受单甲脒长期污染的样品中通过富集培养，从中分离筛选到一株单甲脒耐性较高的ＤＲ－８菌株。该菌株在牛肉汁培养基中对单甲脒的耐性可达１２５０ｍｇ／Ｌ，而在无机盐培养基中的耐性则为５００ｍｇ／Ｌ。该菌株可以利用单甲脒作为唯一氮源，但是不能以单甲脒作为碳源和能源而生长。降解单甲脒的最适温度为３７℃，最适ｐＨ为７．０，其完整细胞悬液对５５０ｍｇ／Ｌ左右单甲脒的降解率最高可达６４．８２％。经鉴定该菌株为门多萨假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍｅｎｄｏｃｉｎａＤＲ－８）。１ｍｌ。１．１．３无氮培养基：同培养基２，加３．０ｇ葡萄糖，以ＤＭＡ代替ＮＨ＿４Ｃｌ。１．１．４普通牛肉汁培养基：作为收集细胞用。以上培养基在灭菌后加入一定量的单甲脒即为含单甲脒培养基。１．２单甲脒实验中所用的单甲脒为一种市售农药。

两株溶藻细菌的分离及初步研究

选择藻华现象严重的巢湖作为采样点,取3个不同位置的水样通过0.22μm的纤维滤膜过滤,培养后加入适应期的藻液中,取黄化藻液作为分离菌种的材料,初筛菌株经反复试验获得有较强抑藻能力的菌株,经生理生化鉴定及16S rDNA分子鉴定其种属。初筛得到45个菌株,有两个菌株WD1和WD2表现出溶藻作用。两株细菌的菌液经离心、高温灭菌、细胞破碎等处理对供试藻鱼腥藻也均有不同程度的抑制作用。分离得到两株溶藻细菌,WD1为约氏不动杆菌,WD2为门多萨假单胞菌。

一株石化废水中脱氮产微生物絮凝剂菌株的鉴定与性能

筛选出了一株适用于石化污水处理的异养硝化-好氧反硝化产微生物絮凝剂菌株HAD-2,鉴定其为门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina),考察了其最佳硝化条件、反硝化性能及在模拟污水中的脱氮能力。菌株为耐热菌,偏碱性(pH=8.5)和高碳氮比(25∶1)时硝化性能最佳。在异养硝化体系中,12 h时菌株对氨氮的去除率达到92.29%,硝酸盐和亚硝酸盐积累少;在反硝化体系中,12 h时菌株对亚硝酸盐和硝酸盐的去除率分别达到86.40%和84.92%;在模拟废水中,48 h时菌株对氨氮、硝态氮和亚硝态氮的降解率分别达到95.25%、65.47%和72.40%。菌株在多种培养基中可产微生物絮凝剂,在葡萄糖培养基中絮凝能力最佳,絮凝率为94%。

聚乳酸降解菌的分离鉴定及其产酶和降解特性

以山东潍坊使用聚乳酸/聚己二酸-对苯二甲酸丁二酯共混物(PLA/PBAT)地膜的土壤为样本,采用以聚乳酸(PLA)为惟一碳源的无机盐培养基筛选PLA降解菌。使用形态学观察、生理生化实验、16Sr RNA基因序列分析及构建系统发育树等方法鉴定降解菌。通过水解圈法确认产蛋白酶活性高的降解菌为研究对象,并采用福林酚法结合单因素及响应曲面法对外源营养源与产酶条件进行了优化。采用SEM、FTIR和XRD等方法分析了降解前后PLA的形貌和结构变化,研究了降解菌对PLA的降解情况。结果表明:从土壤中筛选获得了一株产蛋白酶的PLA降解菌(门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina);优化得到的最佳产酶条件为:在100 mL筛选培养基中,加入质量分数为2%的葡萄糖和质量分数为1%的胰蛋白胨作外源营养源,pH为7.4,接种量为1.4 mL,培养温度32℃。在此条件下,蛋白酶活性最高为32.15 U/mL,较未优化前提高约26倍;PLA降解菌产蛋白酶可催化降解PLA材料中的酯键,5 d内PLA降解率可达29.35%。

一株脱氮菌的氮代谢路径研究

从环境中筛选出一株异养硝化-好氧反硝化门多萨假单胞细菌P.mendocina L2,通过实验发现L2细菌的生长和脱氮最适碳源为柠檬酸钠,最适C/N为15,最适培养温度为30℃,最适培养转速为200 r/min,最佳接种量为1%。其在该条件下能够使用氨氮、亚硝态氮和硝态氮作为反应底物进行硝化或反硝化反应,48 h后总氮去除率达40%以上。使用分子生物学手段从L2细菌中扩增出氮转化途径相关基因,推测菌株L2的完整硝化及反硝化路径为NH_(4)^(+)→NH_(2)OH→NO_(2)^(-)→NO_(3)^(-)→NO_(2)^(-)→NO→N_(2)O→N_(2),为异养硝化-好氧反硝化现象发生机理的研究提供参考。

API法与国标法检测饮用天然矿泉水铜绿假单胞菌效果分析

近年来,瓶装天然矿泉水铜绿假单胞菌污染情况日渐受到重视,国内外研究报告的检出率在1.2%～23.6%之间,另福建省对饮用天然矿泉水水源铜绿假单胞菌污染情况调查中,阳性率23.08%。鉴于此,国家于2009年10月1日制定并实施了国标GB/T8538-2008增加了铜绿假单胞菌的微生物检测指标。