通腑理肺汤对脓毒症肠屏障损伤大鼠肠黏膜组织闭锁小带蛋白-1、闭合蛋白mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨通腑理肺汤(TFL)对脓毒症肠屏障损伤大鼠肠黏膜组织闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)mRNA及蛋白表达影响的实验研究。方法:随机抽取纯种SD大鼠40只,依次分为假手术组、模型组、TFL低剂量组和TFL高剂量组,共四组,每组10只。应用盲肠结扎穿孔(CLP)的造模方式制作脓毒症肠屏障损伤大鼠模型;假手术组只暴露盲肠,不做穿孔处理。TFL低剂量组造模成功后给予3.6 g/kg体重TFL灌胃;TFL高剂量组采用相同方法造模后,按7.2 g/kg体重TFL进行灌胃处理;模型组和假手术组按蒸馏水10 ml/kg体重灌胃,以上各组均每天干预1次,共7 d。7 d后处死各组大鼠,分离肠黏膜组织,采用RT-qPCR法检测肠黏膜组织ZO-1、Occludin mRNA基因,Western blot检测ZO-1、Occludin蛋白表达;同时取出各组相同部位的肠黏膜组织,光镜及透射电镜下观察肠黏膜组织病理及超微结构变化。结果:模型组大鼠肠黏膜组织中ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白表达对比假手术组均显著降低(P<0.05)。TFL低剂量组、高剂量组大鼠肠黏膜组织中ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白表达对比模型组均显著升高(P<0.05)。光镜下观察肠黏膜组织病理显示TFL低剂量组及高剂量组肠黏膜上皮细胞水肿、肠黏膜绒毛受损以及基底层、固有层水肿、淋巴细胞及中性粒细胞浸润明显减轻。透射电镜下肠黏膜组织超微结构亦显示TFL低剂量组及高剂量组微绒毛密集且规则,肠细胞间呈锯齿状和互锁模式,线粒体清晰,紧密连接轻微受损。结论:脓毒症肠屏障损伤大鼠模型病理损害的减轻,可能是TFL上调了肠黏膜组织紧密连接ZO-1、Occludin mRNA基因及蛋白的表达,改善肠上皮细胞间的紧密连接作用来实现的。

小檗碱对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型的治疗作用及其对肠黏膜闭合蛋白的影响

目的观察小檗碱对于葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型的治疗作用及其对肠黏膜闭合蛋白(occludin)表达的影响。方法于2021年6—12月建立DSS诱导的小鼠UC模型进行基础性研究。将30只BALB/c小鼠采用抽签法随机平均分为对照组、模型组和治疗组,除对照组(不造模、不干预)外,其余两组小鼠自由饮用3%DSS溶液7 d建立急性UC模型。治疗组每只小鼠每日予小檗碱(20 mg/kg)灌胃,其余两组则每日予双蒸水0.2 mL灌胃。使用疾病活动系数(DAI)评估小鼠临床症状的严重程度,结肠黏膜损伤评分(CMDI)、组织病理评分及结肠组织髓过氧化物酶(MPO)对结肠炎症程度进行评估。用蛋白质印迹法及免疫组织化学染色观察结肠黏膜中occludin的表达情况。结果对照组、模型组及治疗组第7日DAI评分分别为(0.00±0.00)、(3.23±0.94)、(1.87±0.67)分(P<0.001);对照组、模型组及治疗组病理组织学评分分别为(0.40±0.84)、(8.20±1.70)、(4.85±0.97)分(P<0.001);对照组、模型组及治疗组MPO分别为(1.94±0.58)、(4.46±1.13)、(3.11±1.05)U/g(P<0.001)。与对照组相比,模型组小鼠的DAI、CMDI及组织病理评分及MPO升高,而occludin蛋白水平降低;而与模型组相比,治疗组小鼠的临床症状及肠道的炎症程度明显减轻。结论小檗碱可能通过上调occludin蛋白的表达保护肠黏膜屏障,进而改善DSS诱导小鼠UC模型的炎症程度。

降钙素原通过影响磷酸化蛋白激酶Cα、闭合蛋白表达损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能

目的研究降钙素原(procalcitonin,PCT)是否通过增加肠黏膜磷酸化蛋白激酶Cα(p-protein kinase Cα,p-PKCα)表达,减少闭合蛋白表达,从而损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障。方法120~150g SPF级SD雄性大鼠20只,使用随机数表法随机分5组(每组4只)。(1)正常组:不做任何处理;(2)脓毒症组:盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)造模;(3)脓毒症+PCT组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射PCT;(4)脓毒症+PCT+Go6983组:大鼠CLP造模后,先后经尾静脉注射PCT及Go6983(PKCα磷酸化抑制剂);(5)脓毒症+Go6983组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射Go6983。术后24h于眼静脉取血1ml行血清D-乳酸(D-lactic acid,D-lac)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)浓度测定,取血后处死大鼠,留取回肠末端肠道组织行组织学、免疫组化、免疫荧光、原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检查。结果与正常组比较,脓毒症组大鼠血清D-lac、DAO水平水平明显升高[(0.39±0.14)mmol/L比(5.15±0.66)mmol/L,(12.17±3.34)U/L比(31.43±3.94)U/L,P均<0.001];肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(58.85±11.43)×10^(3)IOD比(111.25±14.96)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(317.41±23.46)×10^(3)IOD比(192.98±15.97)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(15.93±0.87)×10^(3)IOD比(20.53±1.87)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症组比较,脓毒症+PCT组大鼠血清D-lac、DAO水平升高[(5.15±0.66)mmol/L比(7.55±0.76)mmol/L,(31.43±3.94)U/L比(58.71±7.54)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(111.25±14.96)×10^(3)IOD比(220.51±24.04)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(192.98±15.97)×10^(3)IOD比(91.28±9.7)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(20.53±1.87)×10^(3)IOD比(28.05±1.48)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症+PCT组相比,脓毒症+PCT+Go 6983组大鼠血清D-lac、DAO水平升高程度减少[(7.55±0.76)mmol/L比(5.55±0.73)mmol/L,(58.71±7.54)U/L比(42.68±2.78)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(220.51±24.04)×10^(3)IOD比(157.13±12.79)×10^(3)IOD,P=0.002],闭合蛋白表达量增多[(91.28±9.7)×10^(3)IOD比(131.23±11.58)×10^(3)IOD,P<0.001],肠黏膜细胞凋亡减少[(28.05±1.48)×10^(3)IOD比(22.66±0.72)×10^(3)IOD,P<0.001],肠道组织病理损伤减轻。与脓毒症+PCT+Go 6983组相比,脓毒症+Go6983组大鼠血清D-lac、DAO水平下降[(5.55±0.73)mmol/L比(2.82±0.49)mmol/L,(42.68±2.78)U/L比(23.28±3.86)U/L,P<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(157.13±12.79)×10^(3)IOD比(81.84±11.53)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量增加[(131.23±11.58)×10^(3)IOD比(260.37±11.44)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡减少[(22.66±0.72)×10^(3)IOD比(19.14±1.05)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤减轻。结论PCT使脓毒症大鼠肠黏膜细胞p-PKCα表达增加,闭合蛋白表达减少,加重脓毒症大鼠肠屏障功能损害。

血清闭合蛋白水平与急性脑卒中患者静脉溶栓后出血转化风险和预后的相关性

目的探讨血清闭合蛋白水平与急性缺血性脑卒中(AIS)患者静脉溶栓后出血转化风险和预后的相关性。方法选取2021年2月至2022年10月聊城市人民医院经静脉溶栓治疗的AIS患者186例作为研究对象,根据溶栓后36 h头颅CT或MRI结果分为出血组26例和未出血组160例。对比2组临床资料、血清闭合蛋白水平,采用多因素logistic回归分析和ROC曲线评价血清闭合蛋白水平对AIS患者静脉溶栓后出血转化风险预测价值。随访观察90 d,采用Kaplan-Meier曲线分析血清闭合蛋白水平与AIS溶栓后预后的相关性。结果出血组心房颤动、基线美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、闭合蛋白水平显著高于未出血组,发病至溶栓时间较未出血组长(P<0.01);多因素logistic分析显示,心房颤动(OR=5.475,95%CI:1.317~22.758)、发病至溶栓时间(OR=1.040,95%CI:1.016~1.065)、基线NIHSS评分(OR=1.482,95%CI:1.196~1.838)、血清闭合蛋白(OR=3.565,95%CI:1.959~6.488)为AIS患者静脉溶栓后出血转化的危险因素(P<0.05,P<0.01);ROC曲线显示,血清闭合蛋白水平预测AIS患者静脉溶栓后出血转化风险的曲线下面积为0.758(95%CI:0.689~0.817);Kaplan-Meier曲线分析显示,血清闭合蛋白高水平患者预后不良发生率高于低水平患者(logrankχ^(2)=6.159,P=0.013)。结论高血清闭合蛋白与AIS患者静脉溶栓后出血转化风险和预后相关。

卵巢上皮性癌组织中闭合蛋白-3和闭合蛋白-4蛋白的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中闭合蛋白(Claudin)-3和Claudin-4蛋白的表达及其相关性。方法:采用免疫组化方法检测65例卵巢上皮性癌、12例交界性卵巢肿瘤、15例良性卵巢肿瘤和10例正常卵巢组织中Claudin-3和Claudin-4蛋白的表达情况,并分析Claudin-3和Claudin-4蛋白表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系以及2者的相关性。结果:①卵巢上皮性癌组织中Claudin-3蛋白的阳性表达率高于交界性卵巢肿瘤组织、良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织(χ2=35.443,P<0.05);卵巢上皮性癌组织和交界性卵巢肿瘤组织中Claudin-4蛋白的阳性表达率高于良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织(χ2=40.258,P<0.05)。②卵巢上皮性癌中、低分化组Claudin-3和Claudin-4的表达高于高分化组(χ2分别为14.249和9.991,P<0.05);有淋巴结转移组Claudin-3和Claudin-4的表达高于无淋巴结转移组(χ2分别为4.710和4.065,P<0.05)。③在卵巢上皮性癌组织中Claudin-3与Claudin-4的表达呈正相关(rP=0.588,P<0.05)。结论:Claudin-3和Claudin-4的高表达与卵巢上皮性癌的发生发展及侵袭转移密切相关。

谷氨酰胺对大鼠肠缺血再灌注损伤后闭合蛋白的保护作用

目的:探讨谷氨酰胺(Gln)对大鼠肠缺血再灌注损伤后闭合蛋白(occludin)的保护作用及其可能机制。方法:成年雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)和谷氨酰胺预处理组(Gln组)。Gln组给予谷氨酰胺1 g·kg-1·d-1连续灌胃7 d。Sham组和I/R组以同等剂量生理盐水灌胃7d。Sham组仅分离肠系膜上动脉而根部不夹闭。I/R组和Gln组均用无损伤血管夹夹闭SMA根部30 min后放松血管夹形成再灌注损伤模型。各组大鼠均于制模后24 h采集静脉血和回肠标本。酶联免疫吸附试验检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10和IL-2水平。全自动生化仪检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。免疫组化及Western blotting法检测occludin蛋白的表达情况。结果:I/R组occludin蛋白表达明显低于正常对照组及谷氨酰胺处理组(P<0.05);I/R组TNF-α和MDA水平均高于sham组和Gln组(P<0.05)。I/R组血清的SOD活力、GSH、GSH-Px、IL-10和IL-2均低于sham组和Gln组(P<0.05)。结论:谷氨酰胺对肠缺血再灌注损伤后的occludin蛋白具有保护作用,其机制可能与抑制炎症反应、抗氧化应激有关。

闭合蛋白:结构、功能及其相关调节机制

闭合蛋白(occludin)是紧密连接蛋白中重要的组成蛋白之一,具有维持上皮细胞极性、调节细胞之间的黏附性、接受并传递细胞信号等生物学功能。本文对occludin的结构、功能及其相关调节机制进行了综述,并且指出occludin在疾病治疗和动物营养中的应用前景。

铅暴露对体外血脑脊液屏障功能及ZO-1和闭合蛋白表达的影响

目的通过建立体外血脑脊液屏障(BCB)模型,研究铅诱导BCB损伤的可能机制。方法使用Z310细胞建立BCB体外细胞模型,分别加入Pb(AC)22.5,5.0和10.0 mmol·L-1,暴露24,48和72 h。采用跨内皮电阻(TEER)检测法及葡聚糖法检测BCB模型通透性;Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测BCB中紧密连接蛋白ZO-1和闭合蛋白表达及分布。结果与细胞对照组相比,Pb(AC)22.5,5.0和10.0 mmol·L-1暴露48 h对Z310细胞存活率和密度均无明显影响。暴露后第12天,与细胞对照组比较,Pb(AC)25.0和10.0 mmol·L-1组TEER值明显降低(P<0.05),葡聚糖通过率显著增高(P<0.05)。Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测结果显示,与细胞对照组相比,Pb(AC)2各浓度暴露48 h后,ZO-1和闭合蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论铅暴露能够破坏BCB模型的通透性,其机制可能与抑制紧密连接蛋白的表达有关。

细颗粒物(PM2.5)降低人鼻黏膜上皮细胞闭合蛋白(occludin)的表达

目的探讨细颗粒物(PM2.5)对人正常鼻黏膜上皮细胞间闭合蛋白(occludin)表达及分布的影响。方法采用(0、 50、 100、 200、 400、 500、 800、 1000)μg/mL PM2.5处理体外培养的正常人HNEpC鼻黏膜上皮细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,确定最佳处理剂量;后续采用(200、 400、 500)μg/mL PM2.5处理HNEpC细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测细胞occludin的表达和分布情况,实时荧光定量PCR检测occludin的mRNA水平, Western blot法检测occludin蛋白水平。结果与阴性对照组(0μg/mL PM2.5)相比,各剂量PM2.5处理鼻黏膜上皮细胞24 h和48 h后,细胞活性均降低,且细胞活性与PM2.5剂量呈负相关。与阴性对照组相比, 200μg/mL PM2.5组,细胞形态及细胞间occludin蛋白分布表达无明显改变; 400μg/mL PM2.5组,细胞形态变为梭形,细胞间隙增宽; 500μg/mL PM2.5组,细胞数量明显减少,细胞形态变为长梭形,细胞间隙增宽明显;除200μg/mL PM2.5处理细胞24 h外,其余各组细胞occludin mRNA及蛋白水平均下调,且occludin蛋白表达水平呈时间依赖性。结论 PM2.5可降低正常人HNEpC鼻黏膜上皮细胞活性、降低occludin的表达和分布。

前列地尔注射液联合奥曲肽治疗急性重症胰腺炎的疗效及对患者血清TNF-α、IL-6、IL-18、闭合蛋白水平的影响

目的 探讨前列地尔注射液联合奥曲肽用于急性重症胰腺炎的疗效及对血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-18（IL-18）、闭合蛋白水平影响。方法 选取2013年9月~2017年2月于绍兴文理学院附属医院就诊的68例急性重症胰腺炎患者,按治疗方法分组,每组34例。对照组采用奥曲肽治疗,研究组在对照组基础上加用前列地尔注射液治疗,2组均持续用药5 d。比较2组临床疗效,临床表现缓解时间,TNF-α,IL-6,IL-18,闭合蛋白和不良反应发生情况。结果 研究组治疗总有效率为97.07%,显著高于对照组79.41%（P〈0.05）。研究组肠鸣音、腹痛、体温及血清淀粉酶缓解时间均短于对照组（P〈0.05）。研究组TNF-α、IL-6、IL-18水平显著低于对照组（P〈0.05）,研究组闭合蛋白高于对照组（P〈0.05）。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义。结论 前列地尔注射液联合奥曲肽用于急性重症胰腺炎的疗效确切,改善血清TNF-α、IL-6、IL-18、闭合蛋白水平。

闭合蛋白Occludin在畜禽肠道屏障中的调节作用

肠道是动物消化食物、吸收营养的主要场所。闭合蛋白Occludin作为细胞紧密连接的重要组成部分,发挥封闭细胞间隙、形成机体渗透屏障、保持细胞两侧物质差异的作用。本文综述了闭合蛋白Occludin在调控畜禽肠道健康中的作用及影响其蛋白表达的一些因素。

闭合蛋白的胞外环缺失对小鼠TM4细胞紧密连接的影响分析

目的:分析闭合蛋白的2个胞外环结构域在小鼠TM4细胞紧密连接中的功能。方法:利用基因工程的方法,分别或者同时缺失掉闭合蛋白的2个胞外环,将缺失了胞外环3个闭合蛋白基因序列,分别克隆入pcDNA3.1表达载体,再转入TM4细胞。用RT-PCR和Western印迹分析闭合蛋白表达量,用紧密连接的体外细胞模型来分析闭合蛋白的胞外环对紧密连接程度的影响。结果:测序结果表明pcDNA3.1-occludinΔOCC1、pcDNA3.1-occludinΔOCC2和pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2表达载体已经构建成功。RT-PCR和Western印迹结果显示3个缺失组闭合蛋白的mRNA和蛋白质的表达量都显著高于对照组。体外紧密连接模型分析结果表明闭合蛋白2个胞外环都能够增加TM4的紧密连接程度,其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1转染组每天的大分子通过率均比pcDNA3.1-occludinΔOCC2转染组显著降低(P<0.05),表明闭合蛋白第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。结论:闭合蛋白2个胞外环都能够影响小鼠TM4细胞紧密连接的程度,并且第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。

闭合蛋白4在前列腺癌组织中的表达及其与血-前列腺屏障的相关性

目的探讨闭合蛋白4在前列腺癌组织中的表达及其与血-前列腺屏障的相关性。方法收集2008年1月至2015年1月重庆医科大学附属第一医院29例住院治疗前列腺癌患者的癌标本,采用免疫组织化学方法检测癌组织中闭合蛋白4表达，分析闭合蛋白4表达强度与Gleason分级评分和术前血清前列腺特异性抗原（PSA）水平的相关性。结果29例患者癌组织中闭合蛋白4均表达阳性。癌组织中闭合蛋白4的表达强度与Gleason分级评分无显著相关性（r=0.2,P=0.8），血清PSA水平与闭合蛋白4表达强度和Gleason分级评分均有显著相关性（均P＜0.05）。结论闭合蛋白4在前列腺癌患者癌组织中的表达与血清PSA水平有关，闭合蛋白4可能参与构成血-前列腺屏障。

小窝蛋白-1对N-甲基-D天冬氨酸诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1的破坏作用研究

目的:探索小窝蛋白(Cav)-1对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用。方法:体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型。以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i,并观察其对细胞活力的影响。细胞分别用NMDA受体(NMDAR)拮抗剂MK-801或Cav-1抑制剂Daidzein预处理后再用NMDA孵育。蛋白免疫印记(western blotting)法检测ZO-1、Cav-1及p-Cav-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ZO-1 mRNA的表达;跨膜细胞电阻仪Millicell ERS Volt-Ohm meter测量血脑屏障模型跨内皮细胞膜电阻(TEER)值。结果:与对照组比较,NMDA组p-Cav-1蛋白表达升高(P<0.05),ZO-1蛋白和mRNA表达下降(P<0.01),同时TEER值下降(P<0.001)。与NMDA组比较,使用MK801拮抗NMDAR活化后ZO-1蛋白和mRNA水平上调(P<0.05),TEER值增加(P<0.001);用Daidzein抑制Cav-1活化可下调p-Cav-1蛋白表达(P<0.05),上调ZO-1蛋白和mRNA表达(P<0.05)以及增加TEER(P<0.001)。结论:NMDA可诱导HBEC-5i中紧密连接蛋白ZO-1的破坏,从而增加紧密连接屏障的通透性。抑制Cav-1的活化可阻断NMDA诱导的ZO-1表达下降和减少TEER。

3'-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤后闭合蛋白的保护作用

目的:研究3'-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤后闭合蛋白保护作用及其机制。方法:大鼠大脑中动脉栓塞制作局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,缺血后10 min,于舌下静脉注射3'-大豆苷元磺酸钠(2. 0 mg·kg^(-1)),再灌注24 h后,取缺血区脑组织制成10%的匀浆,定量PCR检测法测定TNF-α,Bax,Bcl-2,Ocln mRNA的表达。结果:与模型组相比,3'-大豆苷元磺酸钠能显著降低TNF-α和Bax mRNA的表达,能显著升高Bcl-2和Ocln mRNA的表达。结论:3'-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用机制,可能与其降低TNF-α、Bax mRNA的表达和升高Bcl-2、Ocln mRNA的表达有关。

生长抑素辅助用于急性重症胰腺炎患者对其闭合蛋白白细胞介素-8 白细胞介素-2水平及黏膜屏障功能影响

急性重症胰腺炎是一种临床上较为常见的分解代谢性疾病,致病机制与腺体循环障碍、组织消化能力受损、脏器功能损伤等具有紧密的关联性,对患者的身体健康具有严重的不良影响[1]。本次研究讨论对急性重症胰腺炎患者应用生长抑素进行治疗对其闭合蛋白(Occludin)、白细胞介素(IL)-8、IL-2水平及黏膜屏障功能的影响。现报告如下。

血清闭合蛋白水平与急性脑梗死病情严重程度及出血转化的关系研究

目的探讨血清闭合蛋白水平与急性脑梗死病情严重程度及出血转化的关系。方法选取2021年11月至2022年12月徐州医科大学附属沭阳医院收治的急性脑梗死患者182例为研究对象。收集患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清闭合蛋白水平,治疗14 d后复查颅脑CT以评价患者是否发生出血转化。采用Pearson相关分析探讨急性脑梗死患者血清闭合蛋白水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性,采用多因素Logistic回归分析探讨急性脑梗死患者发生出血转化的影响因素,采用ROC曲线分析血清闭合蛋白水平预测急性脑梗死患者发生出血转化的价值。结果不同病情严重程度、脑梗死面积患者血清闭合蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,急性脑梗死患者血清闭合蛋白水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.327,P<0.05)。根据出血转化发生情况将患者分为发生出血转化组50例与未发生出血转化组132例。两组年龄、病情严重程度、脑梗死面积、血清闭合蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄〔OR=1.883,95%CI(1.212,2.927)〕、病情严重程度〔OR=2.812,95%CI(1.487,5.317)〕、脑梗死面积〔OR=3.050,95%CI(1.390,6.692)〕、血清闭合蛋白水平〔OR=1.923,95%CI(1.320,2.802)〕是急性脑梗死患者发生出血转化的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清闭合蛋白水平预测急性脑梗死患者发生出血转化的曲线下面积为0.760,最佳截断值为3.30μg/L,灵敏度为84.00%,特异度为54.50%。结论急性脑梗死患者血清闭合蛋白水平与病情严重程度呈正相关,血清闭合蛋白水平是急性脑梗死患者发生出血转化的独立影响因素,在出血转化方面有一定预测价值。

外源性硫化氢通过抑制闭合蛋白和闭锁小带蛋白1表达减轻脑缺血再灌注大鼠脑水肿和脑损伤

目的探讨外源性硫化氢对脑缺血再灌注后脑水肿和脑损伤的影响及其机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、硫化氢30ppm组（1ppm=1mg／L）和硫化氢60ppm组，每组15只。采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠局部脑缺血2h再灌注24h模型。在脑缺血再灌注24h后观察神经功能学评分，测定脑梗死体积、脑水肿程度以及血脑屏障通透性变化。采用蛋白质印迹法检测缺血半暗带闭合蛋白和闭锁小带蛋白1（zonula occludens protein1，ZO-1）表达。结果与缺血再灌注组比较，吸入硫化氢30ppm和60ppm能以剂量依赖方式显著增高神经功能评分（P均〈0．05），缩小脑梗死体积（P均〈0．05），减轻脑水肿（P均〈0．05）。缺血再灌注组缺血侧脑组织伊文思蓝含量较假手术组显著增高[（0．74±0．14）μg／100mg对（0．19±0．06）μg／100mg；P〈0．05]，硫化氢30ppm组[（0．554-0．10）μg／100mg]和硫化氢60ppm组[（0．35±0．08）μg／100mg]脑组织伊文思蓝含量均较缺血再灌注组显著降低（P均〈0．05），其中硫化氢60ppm组显著低于硫化氢30ppm组（P〈0．05）。蛋白质印迹分析显示，硫化氢30ppm和60ppm组半暗带闭合蛋白（Q621％±0．101％对0．787％±0．087％对0．453％±0．127％；P〈0．05）和ZO-1（0．602％±0．118％对0．778％±0．805％对0．426％±0.146％；P〈0．05）的表达水平均较缺血再灌注组显著增加，其中硫化氢60ppm组闭合蛋白和ZO-1的表达水平均显著高于硫化氢30ppm组（P均〈0．05）。结论吸入外源性硫化氢能以剂量依赖方式显著降低脑缺血再灌注后脑水肿，缩小脑梗死体积并改善神经功能，其机制可能与抑制闭合蛋白和ZO-1表达、下调维持血脑屏障完整性有关。

白细胞介素-22对小鼠实验性结肠炎肠黏膜闭合蛋白的影响

UC 是一种病因未明的自发性、慢性结肠黏膜炎病变。近年来，已发现肠黏膜屏障功能在 UC 发病机制中占有重要地位［1］。闭合蛋白（occludin）是肠上皮屏障紧密连接中的重要结构蛋白质，对保持肠黏膜屏障完整性具有重要意义，并受 IL-10等多种细胞因子的影响［2］。IL-22属于 IL-10细胞因子家族中的一员，对 UC 的肠黏膜屏障具有重要的保护作用［3］，但对闭合蛋白的作用尚未明确。本研究拟通过 IL-22干预小鼠急性结肠炎模型，观察其对肠黏膜屏障闭合蛋白的影响。

氧化苦参碱对急性脑梗死大鼠鞘氨醇激酶2及闭合蛋白5的影响

目的探究氧化苦参碱(OMT)对急性脑梗死(ACI)大鼠鞘氨醇激酶2(SphK2)及闭合蛋白5(claudin-5)的影响.方法建立急性大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为模型组及OMT治疗组(低、中、高剂量组),10只/组,另取10只正常大鼠作为对照组.OMT低、中、高剂量组分别腹腔注射30、60、120 mg/kg OMT,模型组及对照组分别注射等体积生理盐水,每12h一一次,共注射4次.末次注射后12h处死大鼠,取脑组织.采用TTC染色法测定各组大鼠脑梗死体积,干湿法测定脑组织水含量.ELISA法检测各组大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)含量;RT-PCR检测各组大鼠脑组织SphK2 mRNA及claudin-5 mRNA表达水平,免疫印迹检测SphK2及claudin-5蛋白表达相对表达量.结果相比较于模型组,OMT治疗组脑梗死体积百分比及脑组织水含量均明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性.相比较于对照组,模型组IL-1β、IL-6及IL-10含量均升高,SphK2mRNA及SphK2蛋白质相对表达量均升高,而claudin-5 mRNA及claudin-5蛋白质相对表达量均降低(均P<0.05).相比较于模型组,OMT治疗组IL-1β、IL-6及IL-10含量均降低,SphK2 mRNA及SphK2蛋白质相对表达量均降低,而claudin-5mRNA及claudin-5蛋白质相对表达量均升高(均P<0.05),且均呈剂量依赖性.结论OMT可明显降低ACI大鼠脑梗死体积及脑组织含水量,并抑制机体炎性反应,其作用机制可能与OMT能明显下调SphK2及上调claudin-5表达相关.