血清连蛋白和闭合蛋白5水平与卒中后抑郁大鼠抑郁样行为的相关性

目的:探究卒中后抑郁大鼠血清连蛋白(Zonulin)和闭合蛋白5(Claudin-5)水平与抑郁样行为之间的相关性,为卒中后抑郁的诊疗和疗效评估提供依据。方法:通过MCAO手术结合CUMS的方法,建立卒中后抑郁SD大鼠模型。采用蔗糖水偏好实验和强迫游泳实验测试两组大鼠的快感缺失症状和抑郁症状。采用旷场实验观察两组大鼠的自主运动能力、焦虑和抑郁行为。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠血清Zonulin和Claudin-5水平。采用Logistic回归分析血清Zonulin、Claudin-5水平与卒中后抑郁大鼠抑郁样行为的相关性。评价血清Zonulin和Claudin-5水平对卒中后抑郁的早期诊断以及疗效评估价值。结果:相对于对照组,卒中后抑郁组大鼠表现出蔗糖水偏好率显著下降,强迫游泳不同时间显著延长等抑郁样行为,且其血清中Zonulin、Claudin-5水平均显著升高。Logistic回归分析显示,血清中Zonulin、Claudin-5水平与大鼠的蔗糖水偏好率负相关,与大鼠的强迫游泳不动时间正相关。结论:血清Zonulin、Claudin-5水平能够在一定程度上反映大鼠卒中后抑郁样行为严重程度,对卒中后抑郁的早期诊断和和疗效评估可能具有一定的潜在价值。

氧化苦参碱对急性脑梗死大鼠鞘氨醇激酶2及闭合蛋白5的影响

目的探究氧化苦参碱(OMT)对急性脑梗死(ACI)大鼠鞘氨醇激酶2(SphK2)及闭合蛋白5(claudin-5)的影响.方法建立急性大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为模型组及OMT治疗组(低、中、高剂量组),10只/组,另取10只正常大鼠作为对照组.OMT低、中、高剂量组分别腹腔注射30、60、120 mg/kg OMT,模型组及对照组分别注射等体积生理盐水,每12h一一次,共注射4次.末次注射后12h处死大鼠,取脑组织.采用TTC染色法测定各组大鼠脑梗死体积,干湿法测定脑组织水含量.ELISA法检测各组大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)含量;RT-PCR检测各组大鼠脑组织SphK2 mRNA及claudin-5 mRNA表达水平,免疫印迹检测SphK2及claudin-5蛋白表达相对表达量.结果相比较于模型组,OMT治疗组脑梗死体积百分比及脑组织水含量均明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性.相比较于对照组,模型组IL-1β、IL-6及IL-10含量均升高,SphK2mRNA及SphK2蛋白质相对表达量均升高,而claudin-5 mRNA及claudin-5蛋白质相对表达量均降低(均P<0.05).相比较于模型组,OMT治疗组IL-1β、IL-6及IL-10含量均降低,SphK2 mRNA及SphK2蛋白质相对表达量均降低,而claudin-5mRNA及claudin-5蛋白质相对表达量均升高(均P<0.05),且均呈剂量依赖性.结论OMT可明显降低ACI大鼠脑梗死体积及脑组织含水量,并抑制机体炎性反应,其作用机制可能与OMT能明显下调SphK2及上调claudin-5表达相关.

阿替普酶对急性脑梗死大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的:探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法:建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿替普酶溶栓组,每组18只。透射电子显微镜下观察大鼠脑内皮细胞超微结构,荧光免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果:透射电子显微镜检测,模型组大鼠缺血区域脑体积明显增大,内皮细胞肿胀,部分皮质与周围脑组织界限明显,基膜厚薄均匀,紧密连接结构非常松散、出现断裂和消失;阿替普酶溶栓组大鼠脑梗死区域毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻,基膜厚薄不均匀改善,脑毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间大部分紧密连接结构断裂情况消失,无紧密连接结构消失。荧光免疫组织化学检测,与模型组比较,阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达有明显改善。Western blotting检测,与假手术组比较,模型组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平明显减少(P<0.01);与模型组比较,不同时间点阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平均升高(P<0.01)。结论:阿替普酶对急性脑梗死大鼠大脑内皮细胞的结构有改善作用,其作用机制可能与阿替普酶能降低大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平有关。

肿瘤坏死因子-α通过激活Wnt/β-catenin通路增加肺微血管内皮屏障通透性

目的 探讨炎症环境下Wnt/β-catenin通路对肺微血管内皮屏障通透性的影响。方法 分别用浓度为0、25、50、100、200 ng·mL^(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVECs)24 h,采用CCK-8检测细胞存活率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测闭合蛋白-5(claudin-5)、闭锁小带蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)的表达,选取TNF-α最佳干预浓度。将细胞分为control组、TNF-α 100 ng·mL^(-1)组、Wnt通路抑制对照组(XAV-NC组)、Wnt通路抑制组(XAV组),应用Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939(10μmol·L^(-1),24 h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率,细胞划痕实验检测细胞迁移,FITC-葡聚糖检测微血管内皮屏障通透性,RT-qPCR和蛋白免疫印迹(Western blot)测定各实验组β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、claudin-5、ZO-1的表达。结果 随TNF-α浓度增加,HPMVECs存活率逐渐降低,claudin-5、ZO-1 mRNA表达逐渐减少(P均<0.05),筛选出TNF-α作用的最适剂量为100 ng·mL^(-1)。应用XAV-939后,与control组相比,TNF-α 100 ng·mL^(-1)组细胞存活率及迁移率降低,Transwell小室通过FITC-葡聚糖增多,屏障相对通透性系数增大,β-catenin及Cyclin D1表达增加,claudin-5、ZO-1的表达减少(P均<0.05);与XAV-NC组比,XAV组细胞存活率及迁移率增加,Transwell小室通过FITC-葡聚糖减少,屏障相对通透性系数减小,β-catenin及Cyclin D1表达减少,claudin-5、ZO-1的表达增加(P均<0.05)。结论 TNF-α可通过激活Wnt/β-catenin通路,使紧密连接蛋白claudin-5、ZO-1的表达减少,增加肺微血管内皮屏障通透性。

片仔癀对局灶性脑梗死大鼠AQP4及claudin-5表达的影响(英文)

目的:评估片仔癀对局灶性脑梗死可能的治疗作用及机制。方法:采用改良的Longa法制备大脑中动脉栓塞型,将195只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,片仔癀大、中、小剂量组,尼莫地平组和脑得生组。造模前给药3d,造模后给药4d后取材,术后及给药期间进行神经功能学评分,并将各组脑组织样本采用Western Blot法及Real-time PCR法检测AQP4、claudin-5的表达。结果:模型组神经功能学评分明显高于假手术组,给药各组较模型组均有不同程度的减低(P<0.01,P<0.05)。模型组AQP4表达水平较假手术组显著升高(P<0.01);各给药组AQP4表达水平较模型组均有不同程度的降低;其中片仔癀各剂量组表达均显著下降(P<0.01)、脑得生组、尼莫地平组表达均有所下降(P<0.05)。模型组与假手术组比较,claudin-5表达有所下降(P<0.01);与模型组比较,各组表达均显著升高(P<0.01)。结论:PTH对脑缺血后脑组织具有保护作用,这种保护作用可能通过下调AQP4的表达和上调claudin-5的表达来完成。

通过抑制小窝蛋白磷酸化调控Nrf2信号通路可以对呼吸机相关性肺损伤起保护作用

【摘要】目的探讨在体动物抑制小窝蛋白-1（Cav-1）磷酸化是否可有效调节核因子E2相关因子（Nrf2）信号通路及下游效应分子表达，以及是否对呼吸机相关性肺损伤（VILI）起保护作用。方法将90只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为9组，每组10只：假手术组（Sham）仅做气管切开而不通气；保护性通气（PV）1h、2h组；大潮气量（VT）通气（40mL／kg）1h、2h组；酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP，或罗格列酮（Rsg）预处理＋大VT通气1h、2h组（PP2或Rsg1h、2h组）。两个预处理组分别于通气前1h腹腔注射PP2（15mg／kg）或灌胃Rsg（5mg／kg）。制模后处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），用伊文思蓝（EB）实验检测肺血管通透眭；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、转录激活因子蛋白1（AP-1）、核转录因子-KB（NF—KB）、白细胞介素-8（IL-8）水平。取肺组织，计算肺湿／干质量比值（W／D），光镜下观察肺组织病理学改变；用比色法测定髓过氧化物酶（MPO）活性；用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Nrf2mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测磷酸化小窝蛋白-1酪氨酸残基14（pCav-1-Y14）、Cav-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、紧密连接蛋白闭合蛋白-5（elaudin-5）蛋白表达及Nrf2在胞质和胞核中的蛋白表达；用免疫组化法检测PPARγ、claudin-5阳性表达。结果Sham组和PV组肺组织无明显病理学改变，两组各指标均无差异。大VT组肺组织损伤严重，肺W／D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF—α、AP-1、IL-8、NF—KB水平较Sham组及PV组明显升高，pCav-1-Y14、Cav-1表达均显著高于Sham组及Pv组，PPARγ、elaudin-5表达则显著低于Sham组及PV组，并呈时间依赖性；胞核和胞质Nrt2表达与Sham组和PV组无统计学差异。PP2或Rsg预处理后，肺W／D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF—α、AP-1、IL-8、NF—κB水平均较大VT组明显降低；肺组织Nrf2mRNA表达明显增加；胞核内Nrf2蛋白表达较大VT组明显上调[核内Nrf2蛋白（灰度值）：1h为0．61±0．06、0．56±0．06比0．31±0．02，2h为0．38±0．06、0．43±0．07比0．22±0．03，均P〈0．05]，各组胞质内Nrf2蛋白表达无差异。PP2预处理组pCav-1-Y14表达明显低于大VT组（灰度值：1h为0．89±0．04比1．48±0．02，2h为0．86±0．02比1．31±0．01，均P〈0．05）；PP，或Rsg预处理组PPARl、elaudin-5的蛋白表达均明显高于大VT组[PPARγ（灰度值）：1h为0．34±0．07、0．42±0．13比0．17±0．07，2h为0．38±0．09、0．33±0．07比0．16±0．03；claudin-5（灰度值）：1h为0．33±0．05、0．38±0．07比0．14±0．03，2h为0．30±0．06、0．31±0．04比0．17±0．04；均P〈0．05]。结论抑制Cav-1-Y14磷酸化可增加Nrf2的核内表达及其效应分子PPAR1、elaudin-5的表达，从而减轻肺组织炎症及降低毛细血管通透性。

芪归健脑方对阿尔茨海默病大鼠海马区MMP-9、claudin-5和occludin表达的影响

目的探讨芪归健脑方对阿尔茨海默病(AD)大鼠神经组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、闭合蛋白-5(claudin-5)和咬合蛋白(occludin)含量的影响。方法制备AD大鼠模型,造模后进行不同的处理。芪归组:每天口服芪归健脑方1 g/kg,吡拉西坦组:每天口服吡拉西坦0.43 g/kg;对照组与AD组:口服同样剂量的无菌生理盐水,疗程均为30天。所有实验对象投入水迷宫检测其行为变化;免疫印迹评估大脑组织中MMP-9、claudin-5和occludin的含量的改变。结果与对照组比较,AD组大鼠的学习记忆功能明显减弱,MMP-9的水平(0.572±0.031)上升,而claudin-5(0.188±0.021)和occludin(0.192±0.021)的水平降低(均P<0.05);口服芪归健脑方后其学习记忆功能明显改善,MMP-9的水平(0.338±0.017)下降,而claudin-5(0.295±0.014)和occludin(0.296±0.011)的水平升高(均P<0.05)。芪归组与吡拉西坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪归健脑方可以改善AD大鼠大脑的学习记忆功能,这与其能下调MMP-9的水平,上调claudin-5和occludin水平紧密相关。

三化汤及其拆方对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的:观察三化汤及其拆方对脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用,探讨三化汤的作用机制及其组方配伍特点。方法:将140只清洁级SD大鼠随机分为正常组,假手术组及模型组,造模组采用Longa线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)动物模型,后按照随机数字表法分为模型组,尼莫地平组,三化汤去羌活组,羌活组及三化汤组,灌胃给药5 d。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测各组大鼠脑组织梗死面积,苏木素-伊红(HE)染色及电镜检测各组大鼠脑组织病理变化情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脑组织紧密连接闭合蛋白-5(Claudin-5),咬合蛋白(Occludin)及闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织Claudin-5,Occludin及ZO-1蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠脑组织梗死灶显著,病理形态及超微结构改变明显,Claudin-5,Occludin及ZO-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组、三化汤组大鼠脑组织梗死面积显著降低(P<0.01),病理损伤减轻;三化汤去羌活组及羌活组大鼠脑组织梗死面积及病理改变有减小趋势,差异无统计学意义;与模型组比较,尼莫地平组、三化汤组、羌活组大鼠脑组织Claudin-5,Occludin,ZO-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与三化汤去羌活组比较,羌活组大鼠脑组织Claudin-5,ZO-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与调节Claudin-5,Occludin及ZO-1表达,改善血脑屏障的功能密切相关。其中羌活可能在三化汤保护大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥了重要作用。