血清泛连接蛋白-1水平对急性缺血性脑卒中患者静脉溶栓后出血转化的预测价值

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清泛连接蛋白-1(Panx-1)表达情况,探讨其预测静脉溶栓后出血转化(HT)的价值。方法选取2020-01—2022-12新疆军区总医院、新疆医科大学第六附属医院采用rt-PA静脉溶栓治疗的173例AIS患者为研究对象,根据溶栓后48 h内HT发生情况分为HT组与非HT组,比较2组患者基线资料、入院时血清Panx-1水平及其他实验室指标,分析血清Panx-1在AIS患者静脉溶栓后HT发生中的预测效能。结果173例患者中最终168例完成研究,溶栓后48 h内25例(14.88%)出现HT。相较于非HT组,HT组患者入院时NIHSS评分更高(P<0.05),HT组患者入院时血清Panx-1、C反应蛋白(CRP)水平高于非HT组(P<0.05)。Logistic回归分析表明入院时血清Panx-1水平高会增加AIS患者静脉溶栓后HT发生风险(P<0.05),受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清Panx-1预测AIS患者静脉溶栓后HT发生的曲线下面积为0.857。结论AIS患者血清Panx-1水平可预测其静脉溶栓后HT发生风险。

孕妇宫颈分泌物中胎盘α1-微球蛋白、胎儿纤维连接蛋白水平预测自发性早产价值

目的:探究宫颈分泌物中胎盘α1-微球蛋白(PAMG-1)和胎儿纤维连接蛋白(fFN)水平对自发性早产的预测价值。方法:收集2021年4月-2023年4月本院收治的128例发生自发性早产患者临床资料纳入早产组,同期产前检查并足月分娩的正常孕妇128例临床资料纳入正常组。比较两组临床资料,宫颈分泌物PAMG-1、fFN水平;采用受试者工作曲线(ROC)分析PAMG-1、fFN对孕妇发生自发性早产的预测价值。结果:PAMG-1、fFN对孕妇发生自发性早产的预测准确性分别为68.0%和67.6%、阳性预测值分别为76.1%和73.2%、阴性预测值分别为63.7%和64.2%,2项联合预测的准确性(69.9%)和阳性预测值(79.3%)提高(P<0.05);经ROC曲线分析,PAMG-1、fFN预测孕妇发生自发性早产的曲线下面积分别为0.680和0.679,灵敏度分别为52.3%、55.5%,特异度分别为83.6%、79.7%,2项联合预测的曲线下面积为0.699,灵敏度53.9%、特异度85.9%。结论:PAMG-1、fFN可作为孕妇发生自发生性早产的预测指标,且2项联合可提高预测效能。

闭锁连接蛋白-1 核酸适配体的筛选与初步应用

基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了9条APTZO-1与ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-18>APTZO-12>APTZO-17>APTZO-113>APTZO-11>APTZO-15>APTZO-115>APTZO-112>APTZO-14.采用Cy5荧光基团标记APTZO-18(Cy5-APTZO-18),证实了其能对人结直肠腺癌细胞(Caco-2)与人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)的ZO-1进行荧光定位与半定量分析,且与基于ZO-1抗体法的免疫荧光与蛋白印迹实验结果基本相似.本研究首次筛选到了ZO-1的系列核酸适配体,有望为ZO-1的荧光标记与半定量分析提供一种新型的、特异性高的工具分子.

四氢嘧啶对HaCaT细胞活力及AQP3、Claudin-1、ZO-1表达的影响

目的研究四氢嘧啶(Ectoine)对人角质形成细胞(HaCaT)的细胞活力、细胞凋亡率和细胞活性氧(ROS)的影响,并分析水通道蛋白3(AQP3)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白(ZO-1)的表达水平。方法设置Ectoine浓度实验组和空白对照组,培养HaCaT细胞(24 h),采用CCK8法检测HaCaT细胞的细胞活力,甄选最佳的Ectoine作用浓度。用Western Blot法检测HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平;用流式细胞仪检测HaCaT细胞的凋亡率及胞内ROS水平。结果CCK8法检测结果显示,0.10%Ectoine组、0.20%Ectoine组、0.30%Ectoine组的HaCaT细胞活力均高于120%,其中0.20%Ectoine组最高(146.92%±7.67%)。Ectoine浓度实验组相对于空白对照组,HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平明显升高(P<0.05),且细胞凋亡率和胞内ROS水平均明显降低(P<0.05)。结论Ectoine可提高HaCaT细胞的细胞活力,降低凋亡率和胞内ROS水平,上调AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平。Ectoine可能与相关保湿蛋白的表达相关,对HaCaT细胞具有一定的保护作用。

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的影响

目的:探讨复方中药清肠栓对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠结肠黏膜上皮紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的修复作用.方法:清洁级♂SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组、SASP组、清肠栓高、中、低剂量组,每组6只.选用TNBS诱导的UC大鼠模型.采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin和F-actin的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,考察了中药清肠栓对UC大鼠结肠黏膜上皮屏障的修复作用.结果:UC发病会对结肠紧密连接和细胞骨架系统造成严重的损害,模型组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin几乎完全被破坏,不规则的分散在细胞外围,荧光染色暗淡.图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(1.802±1.304vs3.145±0.110;0.568±0.063vs1.538±0.220,均P<0.01).清肠栓能不同程度减轻UC对紧密连接的破坏,使上述两种蛋白表达升高(P<0.01),从而保护肠道屏障功能,抑制结肠通透性的增加.结论:清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合.

淫羊藿苷对阿尔茨海默病大鼠模型金属蛋白酶及紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用Western-blot法分析紧密连接蛋白ZO-1的表达,用免疫组织化学法检测大鼠海马区MMP-9、MMP-2表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退,ZO-1表达明显减少(P<0.05),MMP-9、MMP-2蛋白明显增加;淫羊藿苷干预后,大鼠学习记忆能力均明显提高,海马区MMP-9/MMP-2表达减少(P<0.05),ZO-1表达明显增加(P<0.05),以淫羊藿苷高剂量干予后明显。结论淫羊藿苷能通过抑制MMP-9/MMP-2表达,减轻血脑屏障破坏,从而改善AD症状。

糖尿病大鼠血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO-1表达变化

目的动态观察糖尿病大鼠血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO1表达。方法雄性SD大鼠60只,随机分为糖尿病模型组和正常对照组2组,每组30只,以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,分别于造模后第15天、30天、90天(各时间点均设对照)取脊髓组织(每次各取6只鼠)以Westernblot和实时荧光定量PCR法检测claudin-1、claudin-5、ZO-1蛋白和mRNA表达。结果 (1)claudin 1、claudin-5蛋白相对表达在糖尿病模型组第30天[分别为(0.324±0.01 5)、(0.289±0.032)]、第90天[分别为(0.220±0.029)、(0.242±0.034)]均较对照组[第30天分别为(0.464±0.009)、(0.475±0.035),第90天分别为(0.468±0.031)、(0.489±0.018)]降低(P<0.01),且糖尿病模型组第15天、30天、90天三时间点claudin-1、claudin-5蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各组均未检出ZO-1表达。(2)claudin-1、claudin-5 mRNA相对表达在糖尿病模型组第30天[分别为(2.67±0.71)×10^(-4) 、(2.87±0.74)×10^(-4)]、第90天[分别为(0.081 4±0.034)×10^(-1)、(0.122±0.027)×10^(-1))]均较对照组[第30天分别为(13.13±3.09)×10^(-1)、(14.81±2.24)×10^(-4),第90天分别为(13.21±1.98)×10 、(1 4.50±2.72)×10^(-4)]降低(P<0.01),且糖尿病模型组第15天、第30天、第90天三时间点mRNA相对表达水平逐渐降低,三时间点差异有统计学意义(P<0.05)。ZO-1 mRNA表达在糖尿病模型组第15天、第30天及第90天[分别为(4.40±1.94)×10^(-1)、(2.33±0.64)×10^(-1)、(2.32±0.45)×10^(-1)]亦均较对照组[分别为(29.89±6.27)×10^(-1)、(30.68±1 7.64)×10^(-1)、(29.27 ±7.55)×10^(-1)]降低(P<0.01)。结论糖尿病可能导致血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO-1表达降低,而且随病程延长claudin-l、claudin-5表达呈逐渐降低趋势。

紧密连接蛋白occludin和ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达

目的:研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达.方法:成年健康杂色豚鼠,耳廓反射灵敏,分别取耳蜗、脑、肺三组组织,免疫组织化学法及Western Blot研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在耳蜗外侧壁血管纹中的表达,以脑组、肺组为阳性对照.结果:光镜下可见豚鼠耳蜗外侧壁血管纹毛细血管内皮细胞等边缘细胞中均强阳性颗粒表达,脑组、肺组毛细血管内皮细胞内壁也均有明显阳性表达;Western Blot下occludin,ZO-1在耳蜗组中高表达,并且明显高于脑组与肺组.结论:occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹紧密连接中的高浓度表达,与维持血迷路屏障结构、功能密切相关.

紧密连接蛋白ZO-1 PDZ结构域的研究进展

自然界的生物过程常常需要特定的蛋白质间相互作用来实现,而这些相互作用大多数是通过结构域来实现的。结构域是蛋白质的基本结构和功能单位,是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域,

玉米须水提物对2型糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β_1和纤维连接蛋白表达的影响

目的研究玉米须水提物对2型糖尿病肾病大鼠肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用高糖高脂饲养加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病肾病大鼠模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组和玉米须水提物低、中和高剂量组,共5组。给药8周后,测定各组大鼠空腹血糖、体重、肾重、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白;免疫组化法分析TGF-β1表达水平;实时定量RT-PCR定量检测肾组织TGF-β1和FN的表达水平。结果与模型对照组比较,中和高剂量组的玉米须水提物可显著降低糖尿病肾病大鼠血糖、肾指数、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白(P<0.05或P<0.01),明显降低肾组织中TGF-β1和FN m RNA的表达量(P<0.05或P<0.01)。结论玉米须水提物能够降低糖尿病大鼠血糖、肾指数、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白的水平,下调肾病大鼠肾组织中TGF-β1和FN的表达,调节细胞外基质的生成和降解,从而减轻糖尿病肾病大鼠肾脏的病理损害,发挥其肾脏保护作用。

微波辐射对大鼠睾丸闭锁蛋白和连接黏附分子-1表达的影响

目的:探讨微波辐射后大鼠血睾屏障紧密连接闭锁蛋白(occludin)及连接黏附分子-1(JAM-1)表达的改变及意义。方法:80只雄性Wistar大鼠经平均功率密度为0、10、30、100mW/cm2微波辐射5min,于辐射后6h,1、3、7、14d,采用Western印迹和图像分析技术检测闭锁蛋白和JAM-1蛋白表达的动态变化。结果:10、30和100mW/cm2微波辐射后分别在3～7d、6h～7d和6h～14d闭锁蛋白表达明显下调(P<0.05),而JAM-1蛋白分别于辐射后3～7d、1～7d和1～14d表达亦明显下调(P<0.05)。结论:闭锁蛋白及JAM-1蛋白表达减少可能在微波辐射致血睾屏障损伤中发挥重要作用。

Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β_1和纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的 mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平。结果:高糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激可在 mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P<0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和Fn mRNA和蛋白质的表达明显下调(P<0.05)。结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法。

胎儿纤维连接蛋白与胰岛素样生长因子结合蛋白-1预测早产的临床应用

目的探讨胎儿纤维连接蛋白(fFN)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)在预测早产中的临床应用价值。方法选择先兆早产孕妇80例,高危早产孕妇70例,随机分为3组各50例,应用免疫测定法定性检测宫颈阴道分泌物中fFN和IGFBP-1的含量。A组行fFN检测,B组行IGFBP-1检测,C组行二者联合检测,通过与1周内分娩结局对照,计算3种方法的灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值和阴性预测值,并相互比较。结果A组中13例fFN阳性,1周内分娩9例,37例阴性者中1周内分娩1例;B组中15例IGFBP-1阳性,1周内分娩10例,35例阴性者中1周内分娩1例;C组两者均阳性或两者之一阳性共13例,1周内分娩9例,37例两者均阴性孕妇中1周内分娩1例。三种检测方法比较上述指标差异无显著性。结论fFN和IGFBP-1均可单独应用作为预测早产的有效指标,但联合应用可最大限度提高阴性预测值。

氯胺酮下调神经连接蛋白-1在创伤后应激功能障碍动物模型中的作用

目的观察氯胺酮是否可改善创伤后应激功能障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)症状及可能涉及的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,6~8周龄,随机分为四组:对照+生理盐水组(CN组)、对照+氯胺酮组(CK组)、PTSD+生理盐水组(PN组)、PTSD+氯胺酮组(PK组),每组15只。采用幽闭+足底电击法(IFS)建立PTSD模型。建模30 min后腹腔注射氯胺酮2.5mg/kg,连续注射14d。在建模后第14天,每组取12只大鼠开始行条件性恐惧实验和水迷宫实验;另外3只取海马组织,采用Western blot法检测神经连接蛋白-1(neuroligin-1,NLGN-1)含量。结果条件性恐惧实验中,PN组僵直反应时间占总时间百分比明显高于CN组和PK组(P<0.01)。水迷宫实验中,训练第2、3、4、5天PN组的逃避潜伏期明显长于CN组(P<0.05);训练第2、4、5天PK组的逃避潜伏期明显短于PN组(P<0.05)。PN组海马内NLGN-1含量明显高于CN组和PK组(P<0.05)。结论 PTSD模型大鼠出现明显的恐惧记忆增强及海马相关的空间学习障碍,可能与海马中NLGN-1含量明显增加有关,氯胺酮可能通过降低海马中NLGN-1表达而减弱PTSD大鼠的恐惧记忆及提高海马相关的空间学习能力。

全反式维甲酸抑制TGF-β_1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad2,3,4核转位

目的采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白(fibronectin),观察全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,atRA)对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响。方法用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad2的磷酸化,磷酸化Smad2、总Smad2/3和Smad4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响。结果atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达。atRA对TGF-β1引起的Smad2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad2、Smad2/3和Smad4核转位。结论atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad2、Smad2/3、Smad4的核转位所致。

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响。方法人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5%FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量。结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P<0.05)。ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P<0.05)。结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展。

经阴道超声检查联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白及胎儿纤维连接蛋白预测先兆早产的价值研究

目的研究经阴道超声(TVU)测宫颈长度(CL)联合宫颈分泌物胎盘α-1微球蛋白(PAMG-1)和胎儿纤维连接蛋白(fFN)在先兆早产(TPL)预测中的临床价值。方法将2019年2月至2021年8月在湖南省妇幼保健院就诊的268例适龄TPL孕妇本次前瞻性研究。根据妊娠周不同分为第一阶段(28~30^(+6)周),第二阶段(31~33^(+6)周),第三阶段(34~36^(+6)周)。用TVU测量3个阶段孕妇的CL,同时收集宫颈分泌物PAMG-1和fFN进行检测。以TPL孕妇妊娠结局为早产与否为“金标准”,比较3个阶段不同CL、PAMG-1、fFN的早产发生率;分析各阶段上述3个指标联合预测TPL孕妇早产的价值;研究3个指标与TPL孕妇早产的定量关系。结果268例TPL孕妇第一阶段有71例,第二阶段有104例,第三阶段有93例。3个阶段CL<2.5 cm、PAMG-1(+)、fFN(+)的早产率均高(P<0.05);3个阶段的3个指标联合预测的早产率均高于任两指标联合(P<0.05)。3个阶段CL<2.5 cm预测早产的敏感度和特异度分别为[第一阶段(72.2%和67.9%)、第二阶段(77.1%和79.7%)、第三阶段(81.0%和58.8%)],PAMG-1(+)的为[第一阶段(72.2%和73.6%)、第二阶段(82.8%和79.7%)、第三阶段(85.7%和66.7%)],fFN(+)的为[第一阶段(83.3%和62.3%)、第二阶段(77.1%和73.9%)、第三阶段(83.3%和58.8%)],CL<2.5 cm联合PAMG-1(+)、fFN(+)的为[第一阶段(72.2%和86.8%)、第二阶段(66.70%和97.10%)、第三阶段(69.0%和92.2%)]。多因素Logistic回归分析显示,CL、PAMG-1、fFN均与TPL孕妇早产有定量关系(P<0.05)。结论CL、PAMG-1、fFN对预测TPL孕妇早产有一定价值,3个指标联合提高了早产预测的特异度,3个指标联合对预测妊娠31~33周TPL孕妇早产的应用价值较高。

血管扩张刺激磷蛋白调节失血性休克大鼠小肠屏障功能与闭锁连接蛋白1的关系

目的观察血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)调节失血性休克大鼠小肠屏障功能与闭锁连接蛋白1(ZO-1)的关系。方法采用失血性休克大鼠模型,以血浆D-乳酸含量反映肠屏障功能,观察失血性休克后大鼠小肠上皮黏膜VASP表达和磷酸化的变化、ZO-1的表达变化以及肠屏障功能变化,比较变化趋势,并观察失血性休克加入VASP磷酸化激动剂后对上述分子表达和肠屏障功能的影响。结果①与正常对照组相比,失血性休克后大鼠小肠黏膜VASP蛋白表达明显降低(P<0.01),VASP蛋白磷酸化在正常时表达量低,休克1h时增高,2～4h迅速降低(P<0.01);ZO-1表达随着休克时间的延长显著降低,在休克2h时降低明显(P<0.01);血浆D-乳酸含量在休克1h改变不明显,2～4h显著增高(P<0.01)。②VASP磷酸化激动剂cAMP可明显增强失血性休克2h大鼠小肠上皮VASP蛋白表达和VASP磷酸化、ZO-1的表达,降低失血性休克2h大鼠血浆D-乳酸含量增高幅度(P<0.01)。结论ZO-1可能与VASP对失血性休克大鼠肠屏障功能的调节作用有关。

内皮素-1对体外培养人小梁网细胞纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察内皮素-1(ET-1)对人小梁网细胞(TMCs)细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(COLI)的影响。方法取死亡24h内尸眼小梁网组织,行TMCs原代和传代培养,并用FN、层黏连蛋白(LN)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)鉴定为人TMCs后,取传3代的人TMCs,给予不同浓度ET-1(10-9、10-8、10-7mol/L)孵育72h后,免疫荧光和Westernblot观察ET-1对TMCs中FN、COLI表达的影响;然后取传3代的人TMCs,分别给予10-7mol/LET-1、10-7mol/LET-1+10-7mol/LETA受体拮抗剂、10-7mol/LET-1+10-7mol/LETB受体拮抗剂后孵育72h,Westernblot观察ET受体拮抗剂对FN、COLI表达的影响。结果研究受到伦理委员会的批准,取材前征得供体家属的知情同意。培养的细胞形态多样,含少许色素颗粒,FN、LN、NSE染色均呈阳性反应,FⅧRAg呈阴性反应。人TMCs与10-9～10-7mol/LET-1共孵育后FN表达上调(F=18.41,P<0.05);与10-8mol/L、10-7mol/LET-1共孵育后COLI表达上调(F=39.81,P<0.05),并呈浓度依赖性,10-7mol/L时作用最明显;给予ETA受体拮抗剂后,与ET-1组相比,FN、COLI的表达均降低(qFN=7.213,P<0.05;qCOLI=6.187,P<0.05),但给予ETB受体拮抗剂后,FN、COLI的表达均无明显变化。结论 ET-1能够促进体外培养的人TMCs中FN、COLI的表达,其机制可能是通过激动ETA受体而非ETB受体发挥作用的。

高糖对人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白及纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)纤维连接蛋白(FN)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响。方法利用HPMC体外培养模型,HPMC分别经含1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48h后,用ELISA法检测HPMC分泌FN及PAI-1的情况。结果11.5%、2.5%、4.25%葡萄糖作用于HPMC,使培养上清中的FN明显高于对照组(P<0.05),且FN增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系。22.5%、4.25%的葡萄糖作用于HPMC,使培养上清中PAI-1明显高于对照组(P<0.05),且增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系,1.5%葡萄糖液与对照相比没有差别(P>0.05)。结论高糖促使HPMC分泌FN、PAI-1增加,在腹膜纤维化的进程中起一定作用。