猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法的建立

根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2基因序列设计特异性引物，进行PCR反应，回收PCR产物，将其克隆人pMD18-T载体，再定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta，进行原核表达。表达产物经His—Bind蛋白纯化试剂盒纯化，平均浓度为1．10mg／ml。以1．8μg／ml蛋白包被酶标板，建立ELISA检测方法。建立的ELISA方法与北京世纪元亨公司试剂盒比较，两者检测结果符合率达85％以上。用该方法对常州某猪场36份母猪和156份10～160日龄猪群血清样品进行了检测，检测结果显示母猪阳性率为81．4％，仔猪阳性率随着日龄的增加而逐渐降低，之后由于受PCV-2的感染，阳性率逐渐升高。本试验建立的ELISA方法，具有较好的特异性、莺复性和敏感性，可用于猪群PCV-2抗体的大规模检测。