镨与间乙酰基偶氮氯膦配合物形成反应的分光光度法研究

文本报导用分光光度法研究间乙酰基偶氨氯膦的性质,及其与稀土元素镨的α型配合物的组成、吸收光谱、积累稳定常数(1gβ_3=49.59)。一定条件下镨的偶氮氯膦mA配合物可由α型转变为β型,α型是瞬时形成的,随着反应的进行α峰下降而β峰上升。在pH为2.02、Pr/CPAmA摩尔比为2∶1时,测得β型配合物形成反应的级数为一级,半衰期为8.4分,表观活化能为29.98kJ/mol。

KBrO_3氧化间乙酰基偶氮氯膦动力学光度法测定痕量钒

研究了在H3PO4介质中,钒(Ⅴ)对KBO3氧化间乙酰基偶氮氯膦褪色反应的催化作用,测定了体系的动力学性质,拟定了反应的最佳条件,建立了测定痕量钒的新方法.该方法是用固定时间法在530nm波长处监测化学反应,方法的线性范围为0～9.0×10-8g·mL-1,检出限为2.8×10-10g·mL-1,在NH4F及尿素存在下,大多数常见离子无干扰.可用于钢样中微量钒的直接测定.

抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚作为荧光假单胞菌2P24菌株生防功能因子的实证分析

荧光假单胞杆菌 2P2 4菌株分离自小麦全蚀病自然衰退土壤 ,它是酚类抗生素 2 ,4 二乙酰基间苯三酚 (2 ,4 DAPG)的高产菌 ,对多种土传病害具有较好的防治能力。利用同源重组构建 2 ,4 DAPG合成基因的定位突变体 ,并对突变体进行基因互补 ,通过检测突变菌株和恢复突变菌株抗生素产量和生防效果确定 2 ,4 DAPG在菌株 2P2 4生防功能中的作用。实验中 ,定位突变体丧失产生抗生素和拮抗病原菌的能力 ,而恢复突变体的抗生素产量和拮抗能力均恢复至野生菌水平。在对番茄青枯病的防病试验中 ,2 ,4 DAPG突变体的防效低且下降快 ,而恢复突变体的生防能力与野生菌相当 ,且效果稳定。由此可确定 2 ,4 DAPG是菌株 2P2 4防治番茄青枯病的主要因子 ,在防效上起关键作用。

抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚合成方法的改进

以间苯三酚(phl)和乙酸酐为原料,三氟化硼为催化剂,乙醚为溶剂,通过Friedel-Crafts酰基化反应合成了2,4-二乙酰基间苯三酚(DAPG),产物通过硅胶柱层析方法纯化,通过1H NMR、MS进行结构表征。考察了原料摩尔比、反应温度、反应时间对产率的影响,最佳反应条件为:n(间苯三酚)∶n(乙酸酐)∶n(三氟化硼)=1∶2.1∶5.5,反应温度为26～30℃,反应时间为24 h,收率62.0%。

固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选，并将其固定化，海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好，其浓度为１％，包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致，分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ；但最适反应温度比游离细胞高５℃，为３０℃；最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位，为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中，转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。

2-乙酰基-4-丁酰基间苯三酚对棉花立枯病、小麦白粉病的防治效果

2-乙酰基-4-丁酰基间苯三酚是以2,4-二乙酰基间苯三酚为先导化合物经过结构改造筛选得到的高活性化合物之一。田间小区试验结果表明,2-乙酰基-4-丁酰基间苯三酚对棉花立枯病和小麦白粉病具有较好的防治效果,按种子重量1%的可湿性粉剂拌种处理对棉花立枯病的防效达56.76%,200 mg/L浓度下对小麦白粉病的防治效果达41.8%。

2,4-二乙酰基间苯三酚对两种常见田间病害的防治效果

2,4-二乙酰基间苯三酚能够防治多种土传病原菌引起的根部病害和苗期病害,是一种新型广谱抗生素。通过田间小区试验发现,2,4-二乙酰基间苯三酚对两种常见田间病害具有很好的防治效果,1%可湿性粉剂拌种处理对棉花立枯病的防效达到61.74%,200ug/mL浓度下对小麦白粉病的防治效果达到47.5%。

产2,4-二乙酰基间苯三酚的微生物研究进展

在土壤环境中,大多数2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)是由荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)产生的。它在生物防治中具有重要作用。对近年来2,4-DAPG的生物合成及调控机理,2,4-DAPG在诱导系统抗性(ISR)的机制,2,4-DAPG的生物反应模式、生态效应,荧光假单胞菌农田生物防治应用实例等相关研究进行了综述。

抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚及其衍生物的绿色高效合成

以间苯三酚及酸酐为原料,45%~47%三氟化硼乙醚溶液为催化剂,在无溶剂条件下以50%~90%的收率高效合成了天然抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(DAPG)及其衍生物,其结构经~1H NMR和^(13)C NMR确证。将DAPG的合成放大至20克级,收率80%。

N-[4-(间甲基苯甲酰基哌嗪)乙酰基]-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩基)-丙胺的合成

以N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩基)-丙胺(Duloxetine)为原料,合成了标题化合物。中间体和产物的结构经1H NMR、IR和质谱表征。

间乙酰胺基－N－乙基－N－苄基苯胺合成工艺研究

研究了由间苯二胺经单氨基酰化、氯化苄苄基化及溴乙烷乙基化合成间乙酰胺基－Ｎ－乙基－Ｎ－苄基苯胺的工艺，总收率达７１．２４％。

荧光假单胞菌2P24中opgGH基因影响抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚的产生

【目的】抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG)是生防菌株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)2P24防治植物病害的关键因子,然而对2,4-DAPG生物合成的调控通路并未完全解析。【方法】前期利用Tn5随机突变的方法获得一株对棉花立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)拮抗能力完全丧失的突变菌株W3,本研究利用基因互补等方法研究该突变体中被破坏的基因对菌株2P24分泌2,4-DAPG和其他生防相关性状的影响。【结果】Tn5插入位点及其序列分析表明突变菌株W3中Tn5破坏了opgG基因。鉴于opgG和opgH基因组成操纵子,利用同源重组技术构建了opgGH内缺失突变菌株。与野生菌株2P24相比,opgGH突变菌株中2,4-DAPG的产量显著降低。对其他生防相关性状的检测发现,突变opgGH基因并不影响群体感应系统(quorum sensing,QS)信号分子的产生、氢氰酸的产生以及生物膜的形成,但可抑制菌株2P24的游动性。转录融合实验进一步表明opgGH基因并不调控gacA基因及其调控的小RNA分子编码基因的表达,这些结果表明opgGH基因可能不通过Gac/Rsm信号通路影响2,4-DAPG的产生。另外,高渗透势条件下,菌株2P24可通过opgGH基因调控2,4-DAPG的产生。【结论】菌株2P24中opgGH基因正调控抗生素2,4-DAPG的产生、游动性以及抑菌能力,是该菌株中一个与生防性状相关的重要调控因子。

荧光假单胞菌2P24中phlF基因对抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚产生的影响

Pseudomonas fluorescens2P24是分离自山东小麦全蚀病自然衰退土的1株生物防治菌株,产生抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol;2,4-DAPG)是其主要防病机制。2,4-DAPG是由phlACBD基因簇合成,受多种调控因子调控。本研究用Tn5转座子插入技术,获得1株phlA基因转录增强的突变体,其突变基因为抗生素合成的负调控基因phlF。与野生菌相比,phlF基因的缺失突变体中phlA的转录增强约100倍,抗生素产量提高492倍。同时,菌株2P24的phlF缺失突变体对病原真菌的拮抗作用明显增强。但2,4-DAPG过量表达菌株对多种作物种子根生长有抑制作用。

荧光假单胞菌2P24中retS对抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚合成的影响

假单胞菌中RetS是一个位于膜上的感应激酶,对多种基因的表达都有调控作用。在铜绿假单胞菌中,RetS可以与另一个感应激酶GacS直接互作,并抑制GacS的磷酸化。【目的】本文利用遗传学方法研究了荧光假单胞菌2P24中RetS对抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)合成的影响,并对其可能的调控机制进行了初步探索。【方法】利用高压液相色谱法(HPLC)检测2P24及其衍生菌株中2,4-DAPG的产量。将Gac/Rsm信号途径中小RNA及调控蛋白的转录报告质粒转入到菌株2P24及其retS突变菌株中,检查RetS对以上基因转录表达的影响。【结果】菌株2P24中缺失retS后未知红色素和抗生素2,4-DAPG的产量较野生型均明显升高。进一步试验表明,RetS转录水平负调控小RNA RsmX和RsmZ的表达,这说明RetS可在转录后水平影响2,4-DAPG的合成。然而,同时缺失retS和gacS或同时缺失retS和gacA之后,由retS单基因缺失所造成的未知红色素和2,4-DAPG合成量升高、小RNA转录表达增强等性状消失,而与gacS或gacA单基因缺失突变体的表型一致。【结论】以上结果说明菌株2P24中RetS是2,4-DAPG及未知红色素合成的负调控因子,并且RetS对2,4-DAPG及未知红色素合成的调控依赖于Gac/Rsm信号传递路径。

防御假单胞菌H78中crp基因对抗生素合成的调控作用

crp基因(编码cAMP受体蛋白)作为全局调控因子广泛存在于各种细菌中,在不同菌株中表现不同的调控功能。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78能产生硝吡咯菌素(Prn)、2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)和藤黄绿菌素(Plt)等多种广谱抗生素。为探究P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成的调控作用,利用基因无痕敲除、HPLC分析、lacZ报告基因分析等技术,分析crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成及基因表达的影响。结果表明:H78菌株中crp基因的敲除导致Prn合成操纵子prnABCD表达显著下降;Plt合成及操纵子表达显著上升;2,4-DAPG合成及操纵子表达小幅下降。因此,P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn合成存在显著的正调控作用,而对Plt合成存在明显的负调控作用,对2,4-DAPG合成存在一定的正调控作用。

不同碳源对生防荧光假单胞菌2P24产抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚的影响

【目的】包括碳源代谢等不同环境因子可调控生防菌株生防相关因子表达,进而影响其防病效果。荧光假单胞菌2P24可防治多种植物病原真菌、细菌引起的土传病害,抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphoroglucinol,2,4-DAPG)是其主要生防因子之一。本文利用平板对峙法及遗传学方法研究不同碳源对菌株2P24产生2,4-DAPG的影响及相关的调控途径。【方法】利用平板对峙法检测了菌株2P24在添加葡萄糖、果糖和蔗糖等碳源的土豆浸液培养基中对棉花立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的拮抗能力及菌株2P24中影响2,4-DAPG产生的相关基因的表达。另外,利用Tn5转座子对含有2,4-DAPG合成基因phl A报告质粒p970Gm-phl Ap的野生型菌株2P24进行随机突变,在果糖土豆浸液培养基中筛选提高phl A基因表达的突变菌株。【结果】平板对峙实验表明,菌株2P24以葡萄糖为碳源时其抑菌活性最强,蔗糖次之,而以果糖等为碳源时菌株2P24无抑菌活性;转录融合实验进一步表明葡萄糖可促进phl A基因的表达,果糖则不影响phl A基因的表达。在果糖土豆浸液培养基中,转座子随机突变实验获得了5株可明显提高phl A基因表达的突变菌株。Tn5插入位点和序列分析显示其中一个突变体是Tn5破坏了che B基因。转录检测表明与野生菌株相比,che B突变体中phl A基因的表达和2,4-DAPG的前体物质间苯三酚(phloroglucinol,PG)产量都显著提高。游动性实验发现突变che B基因可显著降低该菌株的游动性。【结论】上述结果表明菌株2P24中不同碳源在转录水平上可影响phl A基因的表达,进而影响2,4-DAPG产生。遗传学结果也显示,che B基因参与调控2,4-DAPG生物合成过程。

偶氮氯膦——mA分光光度法测定钢样及食盐中钡

在pH9.0的NH_3—NH_4Cl缓冲溶液中,Ba(Ⅱ)与间乙酰基偶氮氯膦(CPAmA)生成紫蓝色络合物。络合物的最大吸收位于635nm。络合物的组成Ba(Ⅱ):CPAmA为1∶4,表现摩尔吸光系数ε_(max)=1.95×10~41·mol^(-1)·cm^(-1),钡(Ⅱ)含量在0-3.2×10^(-3)g/L范围内遵守比尔定律。本法用于测定钢样及食盐中的钡,结果满意。

曲古抑菌素A对博莱霉素致肺纤维化小鼠新生血管的影响

目的探讨组蛋白脱乙酰基转移酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatinA，TSA）对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠的新生血管的影响。方法120只雄性C57BL／6小鼠随机分为控制对照组（CG）、肺纤维化模型组（MG）、TSA早期处理组（EG）和TSA晚期处理组（LG）。MG、EG、LG予以博莱霉素溶液10mg／kg气管内注射建立小鼠肺纤维化模型，CG予以等体积019％氯化钠溶液注射。TSA处理组在造模后分两个阶段（早期：第1～14天；晚期：第15～28天）予以TSA溶液40mg／kg腹腔内注射，每周2次；CG和MG则予以等体积二甲基亚砜（Dmso）腹腔注射。各组于造模后第7、14、28天分三批处死，观察肺组织大体，行HE和Masson染色，Szapiel评分，测定羟脯氨酸（HYP）含量，免疫组化检测血管内皮生长因子（vascularendothelialgrothfactor，VEGFo结果小鼠造模均成功：CG小鼠未见蓝色胶原沉积；MG小鼠可见蓝色胶原沉积明显；并随着小鼠生存时间延长，蓝色胶原沉积加重，EG小鼠可见蓝色胶原沉积介于CG组与MG组之间；LG组蓝色胶原沉积较EG更重。与CG组比较，其他各组各时点HYP含量及VEGF的tOD值均发生显著变化（均P〈0．01）；与MG组比较，EG组第7、14、28天HYP含量均显著降低（均P〈001）；与EG组比较．LG组第7、14、28天HYP含量均显著升高（均P〈0．01）与MG组比较，EG组第7、14、28天VEGF的IOD值均发生显著变化（均P〈001）；与EG组比较，LG组第7、14、28天VEGF的IOD值均显著升高（均P〈0．01o结论早期予以TSA可以抑制博莱霉素致肺纤维化小鼠新生血管形成，减轻肺问质纤维化，晚期干预则没有明显作用。

甜瓜采后病害生防菌遗传改良及其相关性状初步分析

X4(Pseudomonas fluorescens biovarⅢ)是利用直接生物测定的方法从甜瓜表面分离得到的生防菌株,此菌株并不产生抗生素2,4-DAPG,但对多种甜瓜采后病害具有较好生防能力。本试验利用Tn5转座子携带2,4-DAPG合成基因簇整合到X4上,得到改良菌株X4-G。经PCR检测和TLC检测导入成功,并且确定可在改良菌株X4-G中稳定存在。拮抗试验中,菌株X4和X4-G对甜瓜采后病害病原菌Fusarium spp.和Trichothe-cium roseum都有一定的抑制作用。菌株X4和工程菌株X4-G在甜瓜上对T.roseum生防效果均达到80%以上,且X4-G的防效优于X4。表明通过染色体整合抗生素2,4-DAPG合成基因可提高甜瓜采后病害生防菌株生防能力。

生防假单胞菌2P24中mvaT和mvaV基因对PcoI/PcoR群体感应系统的调控作用

【目的】自小麦全蚀病自然衰退土壤分离得到的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)2P24,可防治多种由植物病原菌引起的土传病害。菌株2P24具有群体感应(quorum-sensing,QS)系统PcoI/PcoR,该系统影响生防菌2P24生物膜的形成以及其在小麦根围的定殖能力,从而影响2P24的生防能力。本文利用遗传学方法进一步研究了2P24中QS系统的调控途径。【方法】将QS系统信号合成基因pcoI的转录报告质粒p970Gm-pcoIp转入gacA基因突变菌株PM201中,再利用Tn5转座子对该菌株进行随机突变,筛选影响pcoI基因表达的调控因子。【结果】根据菌落颜色的变化筛选到2株突变菌株。Tn5插入位点和基因序列分析表明这2个突变体中Tn5破坏了同一个基因mvaT;设计引物利用PCR方法从2P24基因组中获得mvaT基因及其同源基因mvaV。转录融合报告实验表明:与野生菌株2P24相比,mvaT及mvaV突变体中pcoI基因的表达和N-乙酰高丝氨酸内酯的产量显著提高;HPLC试验表明mvaT和mvaV基因影响抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚的合成。细菌双杂交试验证实,MvaT蛋白和MvaV蛋白在体内发生自身互作,这两个蛋白也可相互作用。【结论】以上结果表明mvaT和mvaV参与调控生防假单胞菌2P24的PcoI/PcoR群体感应系统,并可能影响其生防功能基因的表达。