大鼠羊膜细胞体外培养及其干细胞标记物的表达

目的分离并鉴定大鼠羊膜细胞,探索羊膜细胞分化潜能,为干细胞移植治疗探寻新的细胞来源。方法机械分离羊膜组织并采用0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化,应用高糖-DMEM培养基(添加10μg/L人表皮生长因子)培养,采用流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物,通过细胞免疫荧光染色检测神经干细胞表面标记物。结果大鼠羊膜组织可分离并培养,细胞呈梭型,贴壁生长,短期内可以稳定增殖。细胞表达干细胞表面标记物八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor,Oct-4)和性别决定区Y框蛋白(sex determining region Y box 2,Sox-2),间充质干细胞表面标志物vimentin,胚胎干细胞标记物阶段特异性胚胎表面标记物(stage specific embryonic antigen-4,SSEA-4),并表达神经干细胞表面标志物nestin,可表达脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)。结论大鼠羊膜细胞可表达间充质干细胞和神经干细胞标记物,并有神经营养因子表达,为大鼠羊膜细胞的研究和应用提供实验依据。

肾外细胞在移植肾组织损伤修复中的作用

目的 :研究移植肾组织损伤修复过程中有无肾外来源细胞的参与。 方法 :选择两例接受女性供肾的男性肾移植病例。分别于移植后第 10天、80天和 2 0 0天行移植肾活检 ,动态观察肾组织中肾外细胞的植入情况。荧光原位杂交法 (FISH)观察Y染色体阳性细胞 (肾外细胞 )在移植肾内分布与变化。结合荧光免疫双套色 ,观察上述细胞上皮细胞标志物cytokeratin和间充质细胞标志物smoothmuscleα actin (α SMA)的表达。 结果 :移植后第 10天 ,移植肾肾小管上皮内即可见肾外细胞存在。移植后 80天 ,肾小管上皮内肾外细胞增加 ,且其中部分细胞表达cytokeratin。肾外细胞还存在于小血管壁 ,且同时表达α SMA。此外 ,这些肾外细胞亦出现于肾间质、管周毛细血管和肾小囊壁内。移植肾发生亚临床急性排斥时 ,肾外细胞在肾小管内定居减少。 结论 :在移植肾组织损伤修复的过程中有肾外细胞的参与。它们不仅出现在肾小管上皮细胞和肾组织血管壁上 ,而且表现出同原固有细胞相似的表型特征。

鼻咽癌患者中的miR-10b表达及调控机制研究

目的研究miR-10b在鼻咽癌患者活检组织中的表达及调控机制,探讨miR-10b与鼻咽癌细胞增殖和迁移的关系。方法取79例鼻咽癌初诊患者(观察组)和35例鼻咽正常黏膜组织标本(对照组),采用实时荧光定量PCR法检测两组miR-10b、LMP1和Twist1的表达情况,分析三者的相关性。Western法检测两组患者E-钙黏蛋白、β-连环蛋白、纤连蛋白、N-连环蛋白、波形蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。结果miR-10b在鼻咽癌活检组织中的表达远高于鼻咽正常组织。Twist1以及EBV癌蛋白LMP1阳性组miR-10b过度表达(P<0.05)。鼻咽癌组织中上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和β-连环蛋白的表达低于鼻咽正常组织,间充质细胞标志物纤连蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9的表达高于鼻咽正常组织(P<0.05)。结论在鼻咽癌患者中,miR-10b基因通过LMP1、Twist1进行基因调控。过度表达的miR-10b促进鼻咽癌细胞的增殖和迁移,诱导上皮-间质转化(EMT),从而有可能成为治疗鼻咽癌的新靶点。