恶性间叶肿瘤的间叶-上皮表型转化研究进展

相对于上皮性肿瘤的上皮-间叶表型转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)及间叶-上皮表型转化(mesen-chymal to epithelial transition,MET)的研究,恶性间叶性肿瘤中MET相关研究较少。MET在分子水平上反映为上皮性标志物如E-钙粘素E-cadherin的上调和间叶性标志物如波形蛋白Vimentin的下调,其过程涉及始动信号、转录因子调节、表面标志物的改变、信号通路改变等多个环节。本文概述了恶性间叶肿瘤中与MET紧密相关的TGF-β等始动因素、SNAI等关键转录因子、mi RNA调节因素对重要细胞信号通路等影响及MET对肿瘤的演进及转归的影响等方面的研究,为针对MET的临床应用奠定基础。

活化血管内皮生长因子受体-1诱导肝癌细胞MHCC97-H上皮-间叶表型转化的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子受体-1（VEGFR-1）促肝细胞癌（HCC）侵袭转移的作用机制。方法用VEGFR—1的特异性配体血管内皮生长因子-B（VEGF—B）诱导活化肝癌细胞MHCC97-H，观察MHCC97-H细胞形态学改变，RT—PCR和Weaemblot检测MHCC97-H细胞上皮标志物钙黏蛋白（E—cad）、连环蛋白-α（α-cat）in间叶标志物波形蛋白、神经钙黏蛋白（N—cad）的mRNA和蛋白质表达改变，细胞荧光免疫组织化学法检测E—cad、α-cat和波形蛋白、N—cad表达部位改变，细胞侵袭和迁移试验检测MHCC97-H细胞侵袭和运动能力的改变。组间比较采用单因素方差分析。结果VEGFR—1活化后MHCC97-H细胞变成梭形、纺锤状，细胞间隙增宽，有的伸出伪足；活化前上皮标志物E—cad、α-cat的mRNA吸光度值（4值）分别为12．55±2．98、14．23±1．36，活化后E—cad、α-cat的月值分别为6．78±3．66、6．18±0．92，活化后上皮标志物的mRNA表达显著下调，F=17．21，P〈0．05。活化前上皮标志物E-cad、α-cat蛋白的A值分别为20878±11．54、7520．45±8．66，活化后E—cad、α-cat的A值分别为8031．23±10．44、5425．15±7．37，活化后上皮标志物的蛋白表达显著下调，F=30．49，P〈0．05。波形蛋白、N-cad蛋白的A值分别为6100．22±12．73、1244．64±10．27，活化后的分别为12836．99±9．67、4586．70土8．58，活化后间叶标志物的蛋白表达显著上调，F=19．16，P〈0．05。上皮标志物E-cad和α-cat在胞膜表达减少，胞质中的表达增加，波形蛋白和N—cad在胞质中表达显著增加；MHCC97-H细胞运动和侵袭能力显著增强，与活化前相比，F=20．13，P〈0．05，差异有统计学意义。结论VEGFR—1促进肝细胞癌侵袭和转移是通过诱导肝癌细胞发生上皮-间叶表型转化实现的。

活化血管内皮生长因子受体1诱导肝癌细胞株MHCC97-H细胞上皮-间叶表型转化的分子机制

目的探讨活化血管内皮生长因子受体1（VEGFR-1）诱导肝癌细胞株MHCC97-H细胞上皮-间叶表型转化（EMT）的分子机制。方法将MHCC97-H细胞分为对照组（1％胎牛血清的DMEM培养）、PP2组（10μmol／LPP2培养）、PBS组（10μmol／LPBS培养）、VEGF—B组（50μg/L的VEGF—B培养）、PP2＋VEGF—B组（10μmol／LPP2和50μ/L的VEGF—B培养）、PBS＋VEGF—B组（10μmol／LPBS和50μg/L VEGF-B培养）。Western blot法检测各组上皮标志物E-钙黏蛋白、α-连环蛋白和间叶标志物波形蛋白、N-钙黏蛋白的表达水平；细胞免疫荧光检测上述蛋白的表达部位；细胞侵袭和迁移试验检测各组MHCC97-H细胞的侵袭和运动能力。组间比较采用t检验。结果对照组、PP2组、PBS组、VEGF—B组、PP2＋VEGF-B组、PBS＋VEGF—B组的MHCC97-H细胞上皮标志物E-钙黏蛋白的表达分别为3．23±0．76、4．18±0．32、2．83±0．65、2．06±0．15、6．12±0．08、1．36±0．54；α-连环蛋白的表达分别为3．01±0．25、3．29±0．11、3．03±0．27、2．84±0．76、5．45±0．37、1．26±0．45；波形蛋白的表达分别为3．01±0．22、4．85±0．36、1．37±0．24、5．79±0．38、3．36±0．42、4．05±0．17；N-钙黏蛋白的表达分别为2．63±0．40、3．02±0．52、2．98±0．36、5．54±0．28、3．26±0．13、1．05±0．33。PP2组、PP2＋VEGF—B组的MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白和α-连环蛋白表达明显上调，PP2＋VEGF-B组与VEGF—B组比较，差异有统计学意义（t=7．625，9．931，P〈0．05）。PP2＋VEGF—B组的波形蛋白和N-钙黏蛋白的表达显著低于VEGF—B组（t=12．001，11．910，P〈0．05）。VEGF—B处理6h后，VEGF-B组、PP2＋VEGF-B组、PBS＋VEGF—B组的MHCC97-H细胞迁移数量分别为19±1、5±2和16±1，VEGF—B组MHCC97-H细胞迁移数量显著多于PP2＋VEGF—B组（t=13．566，P〈0．05），PP2＋VEGF-B组中MHCC97-H细胞穿过Matrigel包被的改良侵袭小室的数量为4±2，显著少于VEGF-B组的16±1（t=12．350，P〈0．05）。结论VEGFR-1活化诱导MHCC97-H细胞发生EMT是由c—Src激酶信号转导通路介导的，c—Sre作为该信号通路的关键因子之一可能是干预肝细胞癌侵袭和转移的有效靶点。