抗核抗体自动间接免疫荧光检测性能分析

目的评估全自动间接免疫荧光分析仪对抗核抗体(ANA) HEP-2细胞荧光核型滴度与人工判读结果的一致性验证及临床的应用价值。方法通过helios自动判读系统与人工荧光显微镜判读,对本院2018年8月-2019年2月352例门诊及住院患者的ANA荧光载片判读,二者结果进行比对,验证HELIOS自动图形判读系统对抗核抗体荧光核型识别、终点滴度的预测准确性。结果 HELISO判读ANA荧光片阴性/阳性结果与人工判读结果的总符合率为98.29%,其阳性符合率为100.00%,阴性符合率为92.40%。ANA细胞滴度仪器与人工比对,两者符合率达96%。对ANA细胞的荧光核型识别,HELIOS荧光分析仪对复合核的ANA细胞判读能力上略偏弱外,总体核型识别比较满意,结果符合率为91.21%。结论 HELIOS荧光分析仪,自动判读ANA荧光结果和人工肉眼判读ANA结果具有一致性。HELIOS检测ANA的实验程序,更具有标准化、简便性、稳定性,提高临床实验室对AID疾病认识甄别和自体抗体实验室标准化建立具有一定价值。

儿童抗核抗体不同稀释度检测结果分析

目的比较不同血清稀释滴度对儿童抗核抗体间接免疫荧光分析(ANA-IIF)结果的影响,探讨降低血清起始稀释度必要性。方法以间接免疫荧光法检测110例健康儿童系列稀释度血清标本抗核抗体(ANA),并与特异性ANA线性免疫(ANA-LIA)结果相比较;同时分析一组ANA-IIF阴性的临床患儿标本ANA-LIA结果。结果健康组标本随着稀释度从1∶80、1∶40、1∶20逐步减低,ANA-IIF阳性检出率有所上升,分别为7.3%、9.1%、10.9%,但差异无统计学意义(P>0.05),弱阳性分别为7.3%、15.5%、31.8%,差异有统计学意义(P<0.01)。110例健康体检儿童中8例标本检测出特异性ANA,阳性率为7.3%。8例IIF法稀释度1∶80阳性者中,特异性ANA阳性者2例;稀释度1∶40、1∶20新增的4例荧光ANA阳性标本中,有1例特异性ANA阳性。若视ANA-IIF(1∶80)或ANA-LIA任一阳性为ANA阳性,ANA阳性率从7.3%上升到12.7%。29例ANA-IIF(1∶80)为阴性的自身免疫肝病相关自身抗体检测患儿临床标本中,特异性ANA-LIA检测出5例阳性(17.2%)。结论降低儿童血清起始滴度并不能明显提高ANA-IIF阳性检出率,反而增加了非特异的弱阳性,因此,临床实验室不需改变儿童ANA常规标本稀释滴度,联合特异性ANA-LIA的检测有利于ANA的发现。

家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1)的基因克隆及原核表达

极管作为微孢子虫高度特异的结构,在微孢子虫侵染宿主细胞的过程中扮演重要角色。利用家蚕微孢子虫和兔脑炎微孢子虫基因组数据,通过共线性分析获得一个编码家蚕微孢子虫假定极管蛋白的基因NBO_7g0016。序列特征分析表明该基因编码富含脯氨酸的409个氨基酸,预测蛋白质分子质量39.6 kD,蛋白质序列的N端具有信号肽,有40个潜在的O-糖基化位点和17个磷酸化位点。以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆NBO_7g0016基因,并构建插入该基因的重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,融合蛋白经亲和层析纯化后免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。免疫印迹实验证明该基因编码的蛋白质在成熟孢子中有表达,间接免疫荧光实验将蛋白质定位于家蚕微孢子虫的极管,确证该蛋白质为家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1,GenBank登录号:EOB15198.1)。初步推测家蚕微孢子虫极管蛋白1具有糖基化修饰特征。

两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价

目的对比研究两种不同粒径量子点(QDs)标记抗体在抗核抗体(ANA)检测中的成像效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655和QD605标记第二抗体(二抗),用间接免疫荧光分析(IIFA)检测114例自身免疫病患者和30例健康对照者血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗为对照。单特异性ANA用免疫印迹法(IBT)确认。比较和评价各法应用效果。结果经对114例患者血清研究发现,两种QD标记二抗均可见与FITC标记二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,但ANA滴度略显不同,对核颗粒型与胞浆颗粒型ANA测定灵敏度以QD655为最高,QD605次之,FITC标记二抗相对较弱。而对核均质型、核仁型与核着丝点型ANA测定灵敏度高低依次为FITC、QD655和QD605标记二抗。相关分析结果显示,两种QD与FITC标记物检测ANA滴度结果均呈高度正相关,r值分别为0.834、0.832(P均<0.01)。两种QD标记二抗对核颗粒型、胞浆颗粒型荧光模式与FITC标记二抗检测结果阳性符合率均为100%;而核均质型与核仁型检测,阳性结果符合率为80.6%～84.4%。30例用FITC标记二抗检测ANA阴性血清中,两种QD标记二抗检测均见1例ANA阳性。两种QD与FITC标记物检测ANA总符合率均超过90.0%,有高度的一致性(Kappa值均>0.75)。结论 QD655和QD605标记二抗用于ANA检测总体结果稳定、灵敏、可行;QDs粒径越大其标记二抗测定ANA灵敏度越高,但对某些低滴度免疫荧光核型(包括核均质型、核仁型与核着丝点型)ANA有漏检可能。

应用流式细胞术检测抗核抗体

目的建立流式细胞术(flow cytom etry,FCM)检测抗核抗体(an tinuclear an tibody,ANA)的方法。方法收集经间接免疫荧光法(ind irect imm unofluorescen t assay,IIF)测定的55例血清标本作为检测对象,36例健康体检者血清作为阴性对照,采用提取的H e la细胞核作为靶抗原,对所有血清标本进行FCM分析。结果将阳性细胞百分率大于12%的标本定为ANA阳性。IFA和FCM两种方法阴性和阳性的总符合率为92.7%(51/55),FCM测定值随着ANA滴度的增高而增高,并大部分集中于某一个范围。结论FCM分析法具有省时、客观、可定量分析的特点,是ANA检测的一种新方法。

量子点标记链酶亲合素-生物素系统用于抗核抗体检测的对比研究与评价

目的对比研究不同颜色量子点(QDs)标记链霉亲合素(SA)-生物素系统在抗核抗体(ANA)间接免疫荧光实验(IIFA)检测中的效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素化羊抗人Ig G(生物素化二抗),用IIFA检测临床样本血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记二抗(FITC-二抗)为对照。比较和评价3种QDs-SA的应用效果。结果对114例患者血清研究发现,QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素二抗检测可见与FITC-二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,阳性结果符合率均为100%,平均抗体滴度均高于FITC-二抗标记检测结果(P<0.01)。尤其对核仁型、核均质型与核点型ANA荧光模式检测效果优于FITC-二抗结果。相关分析结果显示:QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA与FITC-二抗标记ANA定性结果高度一致(Kappa=0.979),滴度均呈高度正相关(P均<0.01)。结论 QDs-SA用于IIFA法检测ANA总体结果稳定、灵敏、可行,可获得较FITC-二抗检测更加敏感和稳定的实验结果。

老年系统性红斑狼疮患者自身抗体的研究

目的探讨抗双链DNA抗体、抗核抗体、抗ENA抗体在老年系统性红斑狼疮患者中的检测价值。方法采用间接荧光免疫分析技术对72例老年系统性红斑狼疮患者的抗ds-DNA、抗核抗体进行检测,免疫斑点法检测抗ENA抗体。结果72例系统性红斑狼疮老年患者抗核抗体阳性率88.9%,抗ds-DNA阳性率9.7%,抗ENA阳性率37.5%。抗核抗体荧光分型以核颗粒型为主。结论自身抗体的联合检测有助于老年系统性红斑狼疮的诊断。

异源CD151蛋白在H9c2细胞中的表达对PRRSV感染的影响

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的以猪繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染的病毒性疾病。研究表明PRRSV可在表达CD151的一株鼠源细胞系中复制增殖,提示异源CD151可能与PRRSV复制增殖相关。为了进一步验证异源CD151本文运用是否参与病毒的复制增殖,本研究验证了表达CD151的大鼠来源的心肌细胞系H9c2对PRRSV的易感性。RT-PCR和间接免疫荧光分析(indirect immunofluorescence analysis,IFA)表明H9c2细胞系中表达CD151蛋白和波形蛋白。病毒吸附试验和攻毒试验提示该病毒可以与H9c2细胞结合,但接种病毒后细胞培养上清和细胞裂解液中均不能检测到病毒核衣壳N蛋白表达,表明病毒不能在该细胞中复制。这一结果提示H9c2细胞中表达的异源CD151不能支持PRRSV的复制增殖。

川崎病患儿血管内皮细胞抗体检测临床意义分析

目的探讨血管内皮细胞抗体(AECA)检测对川崎病(KD)患儿诊断及预后评价。方法2007年8月至2008年5月在广州市儿童医院住院的5岁以下KD患儿55例,采用以人脐静脉内皮细胞和猴骨骼肌为基质的间接免疫荧光技术检测55例急性期KD患儿和43例对照组(发热对照23例,健康对照20名)血清中AECA,并通过比较AECA阴性和阳性组相应的实验室、临床指标,初步评估AECA对KD早期诊断、预后转归的临床应用价值。结果KD患儿中AECA阳性率为40.0%,明显高于健康对照组(5.0%,P=0.004),但与发热对照组差异无统计学意义(17.4%,P=0.053);AECA对KD诊断的灵敏度为40.0%,特异性为88.4%,阳性预测值与阴性预测值则分别为80.0%、53.5%,准确率为60.4%。抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)、蛋白酶3抗体(抗-PR3)阳性KD患儿中AECA阳性率显著高于阴性者(P值分别为0.013、0.034)。AECA阳性组与阴性患儿组临床指标、实验室指标差异无统计学意义。AECA阳性组冠状动脉瘤发生率高于阴性组(P<0.05),发生动脉瘤的相对危险度为6.67(95%CI1.2～36.1)。结论AECA检测对KD的早期诊断价值有限,但对冠状动脉瘤的发生具有预警意义。AECA可能与抗-PR3相互协同在KD冠状动脉损伤、进展至动脉瘤过程中起一定的作用。