间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛的组织嗜性；在感染的第１０天，只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光，而以肾脏中的荧光最强，特异性荧光持续时间最长的是肾脏，可达１４天，病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实，ＩＦＡ方法具有直观、特异等特点，在抗原定位上具有独特的优点。

间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒(DEV)免疫兔制备兔抗DEV高免血清后,用DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化的兔抗DEVIgG建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中DEV的方法。IFA的最佳条件为:石蜡切片用10mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复10min,胰酶修复20min;10%小牛血清室温封闭30min;加入1∶25的兔抗DEVIgG于4℃孵育过夜;再加入FITC标记的羊抗兔IgG于37℃孵育45min。以建立的IFA对DEV人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测,在死亡鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏中检测到DEV抗原。研究表明,IFA检测石蜡切片中的DEV具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的良好方法。

利用间接免疫荧光染色和协同凝集技术检测梨火疫病菌

提取梨火疫病菌 (0 0 5 6菌株 )的脂多糖免疫家兔 ,获得抗血清 ,建立了检测梨火疫病菌的间接免疫荧光染色和协同凝集检测技术 ,对梨火疫病菌的不同菌株和人工接种发病样品实施了检测。结果表明 ,这 2种方法可以准确、灵敏地检测梨火疫病菌及样品 ,方法简单、快速、实用 ,可以在中国口岸推广使用 ,减少梨火疫病进入中国的风险。

间接免疫荧光抗体技术检测凡纳滨对虾红体病病原——副溶血弧菌

建立了凡纳滨对虾红体病病原——副溶血弧菌的间接免疫荧光抗体检测方法。确定免疫血清和荧光抗体的最适工作浓度分别为1∶1000和1∶200;交叉反应和阻断试验表明该方法具有较高的特异性。用该方法检测了10份人工感染后发病的凡纳滨对虾和10份感染后外观健康的凡纳滨对虾,阳性检出率分别为100%和60%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义,而且该方法具有快速、特异、简单的优点,适合于现场应用推广。

免疫组织化学法与间接免疫荧光法对REV抗原定位的比较

本研究分别用免疫组织化学(IHC)法、间接免疫荧光(IFA)法对肿瘤病鸡不同脏器中的禽网状内皮增生病病毒(REV)进行了检测,旨在为两种REV抗原定位方法的应用提供实验依据。采用REV SD1005分离株人工接种1日龄海兰褐鸡,分别采取28日龄肿瘤病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃的新鲜切面在洁净盖玻片上触片,同时制备其病理组织连续切片,分别用IHC法、IFA法对触片和切片进行REV检测。结果显示,两种用于抗原定位的染色方法检测结果完全一致,均可对病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃等组织中存在的REV进行定位,依据染色后的阳性细胞感染率可判断REV的组织嗜性。本研究表明,IHC法与IFA法均可用于检测不同脏器中的REV,并具有良好的特异性、低背景和简便快速的特点。但相对于IFA法,IHC法更经济实用并且实验材料易于保存,因此可以在REV抗原定位研究中推广应用。

利用PCR和间接免疫荧光染色技术检测风信子黄腐病菌

根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。

应用间接免疫荧光抗体技术检测鸡传染性贫血病毒抗体

用 MDCC－ MSB1细胞增殖鸡传染性贫血病毒 (CAV)CuX－ 1毒株制备抗原，建立了检测 CAV抗体的间接免疫荧光的方法。应用该方法检测 CAV基因工程亚单位苗首免、二免和三免后鸡体内的 CAV抗体，结果表明首免一个月后，鸡血清中 CAV抗体的滴度很低或几乎测不到抗体；二免一个月后，鸡血清中可测到较高的 CAV抗体；三免一个月后，鸡血清中的 CAV抗体滴度更高。另外，应用此方法调查了某禽场 3个批次鸡体内的 CAV抗体，其中 32日龄黄鸡和 1日龄乌骨鸡体内的 CAV抗体为阴性，而 1日龄黄鸡体内的 CAV抗体为阳性。

鸡组织中禽波氏杆菌间接免疫荧光组化定位检测方法的建立

为研究禽波氏杆菌感染鸡后在体内组织器官中的定植规律及其在不同组织细胞中的定位、定量状况,本试验对禽波氏杆菌感染鸡组织器官的固定剂进行了筛选,制备石蜡切片,选择良好的粘片剂,利用纯化的兔抗禽波氏杆菌外膜蛋白IgG作为一抗,建立了能进行禽波氏杆菌抗原定位检测的间接免疫荧光组化法,并对禽波氏杆菌人工感染鸡进行了检测。经多次优化,确定将10%中性福尔马林作为固定剂固定组织24h,0.1%多聚-L-赖氨酸作为切片的粘片剂。最佳工作条件为2%脱脂奶粉37℃封闭30min;兔抗禽波氏杆菌外膜蛋白IgG 1∶100稀释,4℃孵育过夜;荧光素标记羊抗兔二抗1∶20稀释,37℃作用30min。该方法重复性和特异性检测良好,对禽波氏杆菌感染雏鸡组织器官的检测结果表明,该法能特异性地对鸡组织器官中的禽波氏杆菌进行抗原定位,气管、肺脏、肝脏、心脏、脾脏、肾脏中的禽波氏杆菌抗原均呈现特异性荧光信号,同细菌分离鉴定方法检测的阳性符合率为99.27%。试验结果表明,本试验所建立的间接免疫荧光组化法可作为一种有效的检测方法用于禽波氏杆菌致病机制的研究。

间接免疫荧光技术研究黄芪多糖体外抗新城疫病毒作用

为探究间接免疫荧光技术辅以MTT法研究黄芪多糖(APS)抗新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)作用的可行性。将安全浓度范围内不同浓度APS和NDV以预防和治疗两种方式加入CEF培养体系中,MTT法测定CEF活力,间接免疫荧光技术检测NDV增殖情况。结果显示预防组CEF增殖活力强于治疗组,治疗组NDV的增殖量较预防组大,P<0.05或P<0.01。表明间接免疫荧光技术能直观的反应病毒在细胞上的增殖情况,该技术联合MTT法研究中药抗病毒作用可靠、可行。

间接免疫荧光技术检测尖锐湿疣中的人乳头瘤病毒

目的:间接免疫荧光技术在临床与基础研究中的应用较为广泛,但却极少有人用于尖锐湿疣的检测,我们旨在验证该方法是否可行,并将之与PCR方法相比较,以了解其准确性和敏感性。材料和方法:60例临床确诊的尖锐湿疣疣体标本均取自性病门诊。采取疣体印片,用小鼠抗人的HPV6型作为Ⅰ抗,FTTC标记的山羊抗鼠IgG作为Ⅱ抗,在荧光显微镜下检查。剩余标本消化后做PCR,证实有无人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的DNA,并用RFLP方法进行分型。结果:在34例尖锐湿疣标本中检测到特异性荧光,阳性率为56.67%,而用PCR方法共检测到58例阳性,阳性率为96.67%。用X^2检验比较二者的阳性率,P<0.01。主要感染类型为6和11型,占98.28%。结论:间接免疫荧光技术针对的是乳头瘤HPV的衣壳蛋白,能检测有完整衣壳的成熟HPV,操作简便,有望用于宫颈涂片的常规检查,以筛查带HPV者,对预防宫颈癌提供帮助。但敏感性不及PCR技术。

细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的:探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法:以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果:细胞悬液浓度在105～106个/ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10%甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论:细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。

正常人皮肤用于间接免疫荧光技术检测寻常型天疱疮抗体的研究

目的:评价以人皮肤为底物的间接免疫荧光技术用于检测寻常型天疱疮抗体的方法。方法:用间接免疫荧光技术检测20例天疱疮患者和20例健康对照患者血清中的抗桥粒抗体,分别以人皮肤和猴食管为底物,并比较两种底物敏感性的差异。结果:以人皮肤作底物检测的阳性结果为19例(95.0%),以猴食管作底物检测的阳性结果为20例(100.0%)。对照组血清的检测结果均为阴性。人皮肤与猴食管上皮作底物的两种间接免疫荧光技术检测方法的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以人皮肤为底物的间接免疫荧光技术可以作为一种检测寻常型天疱疮抗桥粒抗体的方法。

间接免疫荧光定位分析精子表面MIM

男性抑制物质(male inhibition material,MIM)缺乏,往往引起女性对精子的过敏反应,产生抗精子抗体(AsAb)而致不孕。1988年作者在南京军区总医院应用间接免疫荧光技术,对339例男性进行精子MIM定位分析,并与精浆中游离的MIM比较,以探讨精子表面MIM分布对生育、不育及流产的影响。

间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立

【目的】建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDVIgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修复20min后,以10%马血清37℃下封闭30min,然后加入1﹕50的一抗4℃孵育过夜,最后加入1﹕100FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37℃孵育30min。IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性。IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑、皮肤、腺胃为阴性。阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆。经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性。DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈"334"分布。【结论】建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究。DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官。

应用间接免疫荧光技术检测家犬唾液中的狂犬病毒抗原的研究

本文报告在国内首次采用间接免疫荧光技术(IFA)检测外观“健康”带毒犬唾液中狂犬病毒抗原的研究探讨。结果显示,IFA法与现行敏感,特异和快速的酶联免疫吸附试验(ELISA)法在检测犬唾液中狂犬病毒抗原比较上,具有良好的一致性,IFA法不但具有简便、快速、特异等特点,而且还具有重复性好和不受被检标本少,造成试剂浪费而使试验费用增高的优点,是目前对狂犬、“健康”带毒犬、健康犬简便、敏感、特异和快速的鉴别方法。本方法的建立,在狂犬病传染源的监测与控制,预防狂犬病的发生和流行有极其重要的实用价值,适应于广大基层防病单位推广应用。

猪圆环病毒间接免疫荧光方法的建立

将接种PCV2且经多次传代的PK-15带毒细胞分散到96孔细胞培养板上,制成抗原诊断板,应用间接免疫荧光技术检测血清中PCV2的抗体。通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化,建立了PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术,可用于PCV2抗体水平的监测,为今后的猪圆环病毒疫苗抗体检测的研究提供了检测方法。

间接免疫荧光技术在免疫检验实验教学中的应用

免疫荧光技术是免疫学检验实验课程的经典教学内容,实验所需材料和方法多为教学用试剂盒提供。为了提高实验教学的效果,将科研实验中的间接免疫荧光技术应用到该教学中。从制备标本开始,整个实验过程均通过学生自己动手进行操作完成。在实验过程中利用兔抗人白介素6的多克隆抗体和荧光标记的山羊抗兔的二抗对人胶质瘤细胞进行标记和观察。通过让学生掌握科研中常用的间接免疫荧光标记技术,有助于提高学生的动手能力并逐步培养其科研综合素质。

猪鼻支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

目的猪鼻支原体是临床猪场的常见病菌,可引起猪多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、中耳炎等慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤有明显相关性,但其致病机理有待深入,其感染细胞机制的研究尚未明确,因此,本研究欲建立一种用间接免疫荧光技术检测猪鼻支原体黏附宿主细胞的方法。方法以猪鼻支原体和猪肾上皮细胞为研究对象,以兔抗猪鼻支原体纯化抗体为一抗,以FITC标记的羊抗兔IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立猪鼻支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法(IFA)。结果最终确定最小黏附滴度为1∶107 CCU/mL,猪鼻支原体黏附PK15所需时间为6h以上,一抗的最佳工作浓度为1∶100,二抗的最佳工作浓度为1∶1 600。结论表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪鼻支原体对宿主细胞的黏附作用。为猪鼻支原体的研究特别是感染细胞机制的体外研究提供基础方法,同时为疾病的诊断及疫苗的研发奠定基础。