间接免疫荧光技术研究黄芪多糖体外抗新城疫病毒作用

为探究间接免疫荧光技术辅以MTT法研究黄芪多糖(APS)抗新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)作用的可行性。将安全浓度范围内不同浓度APS和NDV以预防和治疗两种方式加入CEF培养体系中,MTT法测定CEF活力,间接免疫荧光技术检测NDV增殖情况。结果显示预防组CEF增殖活力强于治疗组,治疗组NDV的增殖量较预防组大,P<0.05或P<0.01。表明间接免疫荧光技术能直观的反应病毒在细胞上的增殖情况,该技术联合MTT法研究中药抗病毒作用可靠、可行。

间接免疫荧光技术检测尖锐湿疣中的人乳头瘤病毒

目的:间接免疫荧光技术在临床与基础研究中的应用较为广泛,但却极少有人用于尖锐湿疣的检测,我们旨在验证该方法是否可行,并将之与PCR方法相比较,以了解其准确性和敏感性。材料和方法:60例临床确诊的尖锐湿疣疣体标本均取自性病门诊。采取疣体印片,用小鼠抗人的HPV6型作为Ⅰ抗,FTTC标记的山羊抗鼠IgG作为Ⅱ抗,在荧光显微镜下检查。剩余标本消化后做PCR,证实有无人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的DNA,并用RFLP方法进行分型。结果:在34例尖锐湿疣标本中检测到特异性荧光,阳性率为56.67%,而用PCR方法共检测到58例阳性,阳性率为96.67%。用X^2检验比较二者的阳性率,P<0.01。主要感染类型为6和11型,占98.28%。结论:间接免疫荧光技术针对的是乳头瘤HPV的衣壳蛋白,能检测有完整衣壳的成熟HPV,操作简便,有望用于宫颈涂片的常规检查,以筛查带HPV者,对预防宫颈癌提供帮助。但敏感性不及PCR技术。

应用间接免疫荧光技术检测家犬唾液中的狂犬病毒抗原的研究

本文报告在国内首次采用间接免疫荧光技术(IFA)检测外观“健康”带毒犬唾液中狂犬病毒抗原的研究探讨。结果显示,IFA法与现行敏感,特异和快速的酶联免疫吸附试验(ELISA)法在检测犬唾液中狂犬病毒抗原比较上,具有良好的一致性,IFA法不但具有简便、快速、特异等特点,而且还具有重复性好和不受被检标本少,造成试剂浪费而使试验费用增高的优点,是目前对狂犬、“健康”带毒犬、健康犬简便、敏感、特异和快速的鉴别方法。本方法的建立,在狂犬病传染源的监测与控制,预防狂犬病的发生和流行有极其重要的实用价值,适应于广大基层防病单位推广应用。

间接免疫荧光技术在免疫检验实验教学中的应用

免疫荧光技术是免疫学检验实验课程的经典教学内容,实验所需材料和方法多为教学用试剂盒提供。为了提高实验教学的效果,将科研实验中的间接免疫荧光技术应用到该教学中。从制备标本开始,整个实验过程均通过学生自己动手进行操作完成。在实验过程中利用兔抗人白介素6的多克隆抗体和荧光标记的山羊抗兔的二抗对人胶质瘤细胞进行标记和观察。通过让学生掌握科研中常用的间接免疫荧光标记技术,有助于提高学生的动手能力并逐步培养其科研综合素质。

间接免疫荧光技术检测角膜内皮炎房水及小梁组织中的单纯疱疹病毒

5目的 :探讨间接免疫荧光技术 (IIF)对角膜内皮炎的病原学诊断价值 ,并以此揭示病因、指导临床治疗。方法 :用IIF对角膜内皮炎的房水及小梁中的单纯疱疹病毒 (HSV )进行检测 ,以老年性白内障和青光眼小梁组织作对照。结果 :实验组 13例角膜内皮炎患者的房水中有 4例呈阳性发现 ,其阳性率为 3 0 77% ;而对照组Ⅰ 2 0例老年性白内障患者的房水中无一呈阳性发现 ,二者之间存在显著性差异 (P <0 0 5 )。实验组 1例角膜内皮炎患者的小梁组织中呈阳性发现 ,而对照组Ⅱ 10例青光眼患者的小梁组织中无一阳性发现。结论 :应用IIF可检测角膜内皮炎患者急性期房水和小梁组织中的HSV ,说明角膜内皮炎的发病同HSV感染有关 ,同时可做出实验室病原学诊断 ,并进一步用于指导临床治疗。

间接免疫荧光抗体技术检测凡纳滨对虾红体病病原——副溶血弧菌

建立了凡纳滨对虾红体病病原——副溶血弧菌的间接免疫荧光抗体检测方法。确定免疫血清和荧光抗体的最适工作浓度分别为1∶1000和1∶200;交叉反应和阻断试验表明该方法具有较高的特异性。用该方法检测了10份人工感染后发病的凡纳滨对虾和10份感染后外观健康的凡纳滨对虾,阳性检出率分别为100%和60%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义,而且该方法具有快速、特异、简单的优点,适合于现场应用推广。

应用间接免疫荧光抗体技术检测鸡传染性贫血病毒抗体

用 MDCC－ MSB1细胞增殖鸡传染性贫血病毒 (CAV)CuX－ 1毒株制备抗原，建立了检测 CAV抗体的间接免疫荧光的方法。应用该方法检测 CAV基因工程亚单位苗首免、二免和三免后鸡体内的 CAV抗体，结果表明首免一个月后，鸡血清中 CAV抗体的滴度很低或几乎测不到抗体；二免一个月后，鸡血清中可测到较高的 CAV抗体；三免一个月后，鸡血清中的 CAV抗体滴度更高。另外，应用此方法调查了某禽场 3个批次鸡体内的 CAV抗体，其中 32日龄黄鸡和 1日龄乌骨鸡体内的 CAV抗体为阴性，而 1日龄黄鸡体内的 CAV抗体为阳性。

利用PCR和间接免疫荧光染色技术检测风信子黄腐病菌

根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。

盐裂皮肤间接免疫荧光技术在大疱性类天疱疮诊断中的价值评估

目的评价盐裂皮肤间接免疫荧光(IIF-SSS)在大疱性类天疱疮(BP)诊断中的价值。方法采用单中心临床回顾性研究。纳入2013年1月至2019年1月在中国医学科学院皮肤病医院就诊的初诊BP患者163例,对照组404例,包括天疱疮161例、湿疹67例、药疹26例、多形红斑23例、结节性痒疹18例等。于患者用药前采血,行IIF-SSS、BP180 NC16A ELISA及直接免疫荧光(DIF)检测,比较IIF-SSS在BP诊断中的价值。计量资料比较采用t检验及Mann-Whitney检验;计数资料比较采用χ2检验及Fisher精确检验法或McNemar test检验。结果BP组IIF-SSS、BP180 NC16A ELISA、DIF阳性例数分别为160、153和127,对照组分别为0、18和26。IIF-SSS、BP180 NC16A ELISA、DIF诊断BP的敏感性分别为98.15%、93.86%、77.91%,特异性分别为100%、95.54%、93.56%。IIF-SSS和DIF诊断BP具有较强的一致性(Kappa系数=0.767,P<0.001)。结论IIF-SSS诊断BP敏感性和特异性高,可作为BP诊断的常规方法。

猪圆环病毒间接免疫荧光方法的建立

将接种PCV2且经多次传代的PK-15带毒细胞分散到96孔细胞培养板上,制成抗原诊断板,应用间接免疫荧光技术检测血清中PCV2的抗体。通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化,建立了PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术,可用于PCV2抗体水平的监测,为今后的猪圆环病毒疫苗抗体检测的研究提供了检测方法。

猪鼻支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

目的猪鼻支原体是临床猪场的常见病菌,可引起猪多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、中耳炎等慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤有明显相关性,但其致病机理有待深入,其感染细胞机制的研究尚未明确,因此,本研究欲建立一种用间接免疫荧光技术检测猪鼻支原体黏附宿主细胞的方法。方法以猪鼻支原体和猪肾上皮细胞为研究对象,以兔抗猪鼻支原体纯化抗体为一抗,以FITC标记的羊抗兔IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立猪鼻支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法(IFA)。结果最终确定最小黏附滴度为1∶107 CCU/mL,猪鼻支原体黏附PK15所需时间为6h以上,一抗的最佳工作浓度为1∶100,二抗的最佳工作浓度为1∶1 600。结论表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪鼻支原体对宿主细胞的黏附作用。为猪鼻支原体的研究特别是感染细胞机制的体外研究提供基础方法,同时为疾病的诊断及疫苗的研发奠定基础。

基因C型鸭甲肝病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

为建立基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)间接免疫荧光检测技术(IFA),本研究以纯化的DHAV-C单克隆抗体(MAb)为一抗,FITC标记的兔抗鼠Ig G(Ig G-FITC)为二抗,建立了DHAV-C IFA检测方法。该方法仅对感染DHAV-C的肝组织触片检测为阳性,而对分别感染基因A型鸭甲肝病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒、鸭源金黄色葡萄球菌、鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的SPF鸭肝组织触片检测为阴性,表明该方法特异性好;重复性试验表明,该方法批内和批间重复性好。一抗和二抗在-20℃至少能保存7个月。实验感染SPF雏鸭IFA和RT-PCR检测符合率100%。本研究建立的DHAV-C IFA方法特异性好,可以用于该病毒感染肝组织的快速检测。

间接免疫荧光法与线性免疫印迹法联合检测抗核抗体在系统性红斑狼疮诊断中的意义

目的分析以间接免疫荧光法(IIF)法筛查的抗核抗体谱(ANAs)、抗双链DNA(dsDNA)抗体结果与线性免疫印迹法(LIA)检测ANAs的结果,了解2种方法是否可以相互取代及其联合检测的意义。方法 230例临床送检样本同时采用2种方法检测ANAs、抗dsDNA抗体与ANAs特异性抗体,分析检测结果的相互关系并寻找对临床有价值的检测方法。结果 2种方法检测结果总体符合率为57.0%;IIF(-)/LIA(+)患者中最易漏检的抗体为抗SSA抗体、Ro52、Jo-1、线粒体(AMA)-M2抗体。IIF(+)/LIA(-)中系统性红斑狼疮(SLE)组与非自身免疫病(AID)组在各个滴度间比较,差异均有统计学意义。检测抗dsDNA抗体,绿蝇短膜虫抗原片(CL)-IIF法的特异性和敏感性都超过了LIA法。SLE患者单一检测IIF-ANA敏感性较高,而LIA-ANAs特异性较高。2种方法联合诊断,敏感性提高。结论无论单独使用哪种检测方法都可能出现漏检的情况。2种方法不能互相代替,需同步检查。CL-IIF法检测抗dsDNA抗体的结果较LIA法更理想。

免疫荧光技术在寄生虫病诊断中的应用

免疫荧光技术是把血清学和显微镜示踪法结合起来的一种技术。介绍了直接免疫荧光技术、间接免疫荧光技术、时间分辨荧光免疫分析法在寄生虫病诊断中的应用。

多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的评价与临床应用

目的:分析和评估多重微球流式荧光免疫技术(MBFFI)检测抗核抗体谱的结果和临床应用价值。方法:同时用MBFFI和免疫印迹技术检测333例自身免疫病患者、44例其他疾病患者和59例健康者血清的抗核抗体谱,进行结果的一致性检验,并用间接免疫荧光技术检测抗核抗体,比较3种方法的灵敏度、特异度。结果:MBFFI与免疫印迹技术检测所有标本抗核抗体谱一致率为83. 26%,Kappa值=0. 655;病例组各项目一致率在79. 88%至99. 40%之间,Kappa值在0. 106至0. 958之间。对照组各项目一致率在96. 61%至100. 00%之间,其他疾病组各项目一致率在95. 45%至100. 00%之间。间接免疫荧光技术诊断自身免疫病的灵敏度最高(P<0. 01),MBFFI诊断自身免疫病的特异度最高(P<0. 05),MBFFI与间接免疫荧光技术联合检测可提高灵敏度(P<0. 01)。结论:多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱与免疫印迹技术相比,一致性尚可,特异度更高,可以替代免疫印迹技术成为新一代的抗核抗体确认试验检测方法。

神经系统免疫病自身抗体检测方法学进展及在诊断中的应用

自身抗体在神经系统自身免疫病中的作用越来越受重视,可以用来辅助诊断,评价治疗效果和预后评估。近些年来神经系统自身抗体研究进展快速,新报道的抗体种类繁多,但受限于神经系统自身免疫病的罕见及复杂性,众多研究只能以个案报道方式对抗体检测方法和临床意义进行阐述,缺少大规模的队列研究给予明确答案。在抗体致病机制尚不十分明确,检测方法也未完全统一的现状下,患者样品检测结果可靠与否以及有无临床意义是现阶段临床诊断时最感困扰的问题。本文对自身抗体产生及致病机制进行简单概括,着重介绍检测方法进展,并对其在诊断中的应用做了较为详细的总结及解释,以期有助于理清临床诊断所困扰的部分问题。

伊氏锥虫(Trypansosoma evansi)的一种60kD非变异性表面蛋白细胞定位和免疫原性研究

以经生物素标记、Triton X-114相分离、ConA-sepharose 和 Streptavidin-agarose 亲和沉淀抽提、SDS-PAGE 分离并经 wester blotting 鉴定的伊氏锥虫（T.evansi）一种60kD 非变异性表面蛋白质免疫 ICR 小鼠,制备高免血清,用间接免疫荧光技术对该60kD 蛋白的细胞表面分布进行了初步定位研究。结果表明,在同源和异源株虫体表面都有强烈的特异性荧光染色。以该蛋白经直接脾内免疫 ICR 小鼠(总剂量约10μg·鼠-1),可获得对102条同源和异源株虫体攻击的部分保护作用,表现为虫血症出现的时间（"潜隐期"）